氧化应激在帕金森病发病机制中的作用

在细胞正常代谢过程中产生活性氧基团(ROS),ROS发挥重要的生理功能。当ROS的水平超过细胞生理需要时,由于其高度的活性,可通过关键分子如DNA、蛋白质及脂质的氧化降解,影响细胞结构及功能的完整性。当ROS的水平超过体内抗氧化防御的水平时可产生氧化应激。一些组织尤其是脑组织对氧化应激尤为易感。尸检结果表明帕金森病(PD)中存在氧化应激。但氧化应激与神经变性的时程及与PD其他发病机制,如线粒体功能紊乱、兴奋毒性、一氧化氮(NO)毒性、炎症及泛素蛋白酶体系统(UPS)等之间的关系仍有待于进一步研究。本文对PD中氧化应激近年来…     

泛素-蛋白酶体系统与帕金森病

帕金森病(Parkiinson's disease,PD)是常见的神经系统变性疾病,发病率为160/10万.帕金森病的病理特点是中脑黑质多巴胺(DA)能神经元进行性地变性、脱失,残存的神经元内出现α-synuclein、Parkin、泛素等蛋白染色阳性的包含体(Lewy体).PD的病因及发病机制至今尚未明确,多数人认为是遗传因素和环境因素共同作用的结果.近来的研究发现,每一个已知的与家族性PD直接相关的基因突变都具有干扰泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)正常对蛋白降解的能力;同时,人们发现散发性PD患者黑质DA能细胞的蛋白酶体功能亦有异常.因此,人们已经开始将UPS作为不同的遗传性和散发性PD共同的发病因素[1].     

不同分化状态的SH-SY5Y细胞对MPP+的敏感性

目的比较不同分化状态的SH-SY5Y细胞对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)的敏感性。方法未分化的、单纯全反式维甲酸(AT-RA)分化的和ATRA与十四烷酰佛波醇乙酸酯(TPA)序贯分化(ATRA/TPA)的SH-SY5Y细胞分别用不同浓度的MPP+(0.05、0.1、0.25、0.5、1.0和2.0 mmol/L)处理24、48和72 h;应用MTT比色法检测不同浓度MPP+处理后在24、48和72 h各组细胞的活力;应用台盼蓝除外法计数活细胞检测1.0 mmol/L MPP+处理后48 h各组细胞的死亡率。结果三组SH-SY5Y细胞对MPP+的敏感性不同,其中ATRA与TPA序贯分化细胞的敏感性最强,未分化的细胞其次,而单纯ATRA分化的细胞敏感性最弱。结论不同分化状态的SH-SY5Y细胞对MPP+敏感性不同,ATRA与TPA序贯分化的细胞可能更适合于神经毒性和实验性帕金森病(PD)的研究。     

6-羟基多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型中Peroxiredoxin6表达的研究

目的 应用蛋白质组学技术研究6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)模型中Peroxiredoxin6(Prx6)的表达变化.方法 在建立6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型的基础上,分别提取6-OHDA实验组和对照组孵育24h的细胞总蛋白,应用荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)技术获得蛋白点的差异表达信息,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定出差异蛋白质.结果 DIGE分析发现实验组有一个表达明显上调的差异蛋白质点(P<0.01),经质谱分析鉴定确认为Prx6.结论 6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞的帕金森病模型中Prx6表达上调,提示PD中有氧化应激存在,Prx6上调及氧化应激可能与PD的发病机制有关.     

脑梗死人群NOS1基因多态性与脂代谢的相关性

目的 探讨脑梗死患者神经元型一氧化氮合酶基因(NOS1)多态性与脂代谢的相关性.方法 本研究共纳入605例脑梗死患者.以位于NOSI基因的rs9658281和rs2682820位点为遗传标记,采用聚合酶链式反应一限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术检测NOSl基因的基因型.应用氧化酶法测定入组患者血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆同醇(HDL-c)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)的水平.结果 脑梗死患者nNOS基因rs9658581的等位基因频率与1℃呈显著性相关(X2=4.583,P=0.032).携带G等位基因个体的总胆固醇水平(TC)明显高于携带A等位基因的个体.结论 脑梗死患者Tc的水平与NOSI基因rs9658581多态性可能有关.     

蛋白质组学技术对PC12细胞的热休克蛋白的鉴定

目的 使用蛋白质组学技术鉴定大鼠肾上腺皮质细胞瘤细胞系PC12细胞内的热休克蛋白质.方法 提取PC12细胞的蛋白质,建立固相pH梯度双向电泳图谱,应用图像扫描仪及ImageMaster 2D Elite分析软件获得蛋白质点的数字化和匹配性信息,挑选匹配良好的高峰度蛋白点,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析,鉴定.结果 用二维电泳技术分离,并用MALDI-TOF-MS 成功鉴定出5个PC12细胞的热休克蛋白.结论 PC12 细胞蛋白质组中热休克蛋白胶图位点的建立,为探讨HSP在神经系统疾病发病中的作用奠定了基础,并提供了新的候选治疗靶点.     

蛋白酶体抑制剂诱导的PD细胞模型中p47表达及磷酸化水平研究

目的探讨蛋白酶体抑制剂(PSI)作用于PC12细胞后细胞总蛋白及其磷酸化水平的变化。方法收集实验组(PSI,10μmol/L)和对照组[二甲基亚砜(DMSO)]细胞总蛋白,进行双向电泳,应用Pro-Q Diamond磷酸化蛋白凝胶染色技术获得蛋白点磷酸化水平的差异信息,运用MALDI-TOF质谱鉴定出差异蛋白质。结果差异蛋白点2、3均为p47,为2个同功体,蛋白酶体抑制剂干预后二者磷酸化水平均增加。结论 p47表达上调及磷酸化水平增高与蛋白酶体抑制剂诱导的异常蛋白聚集及空泡形成有关,p47可能参与帕金森病的发病机制。     

丙戊酸干预SH-SY5Y细胞的差异蛋白表达

实验采用双向荧光差异凝胶电泳法发现了丙戊酸处理SH-SY5Y细胞有3种差异蛋白表达,这3种蛋白均与细胞内氧化应激有关,其中真核翻译起始因子4A亚基1蛋白和三磷酸腺苷6V亚基1B2亚单位蛋白表达下调,而核内不均一性核糖核蛋白K表达上调。进一步采用基质-辅助激光解析/电离-飞行时间质谱以及蛋白免疫印迹方法鉴定并验证了其中1种蛋白--真核翻译起始因子4A亚基1。说明丙戊酸可通过调节真核翻译起始因子4A亚基1蛋白的表达来进行抗氧化作用。     

NT4-NAP融合基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

神经营养因子作为神经保护剂用于治疗中枢神经系统变性疾病已得到了广泛关注，但因其均为大分子蛋白质而难以通过血脑屏障的特点限制了临床应用。近年来小分子肽被认为可能成为它的替代品。活性依赖性神经保护蛋白(activity-dependent neuroprotective protein，ADNP)是一种由血管内皮肠     

蛋白酶体抑制诱导的PC12细胞帕金森病模型

目的探讨蛋白酶体抑制剂对PC12细胞的作用以及用该药物制作帕金森病(PD)模型的可能性。方法用不同浓度蛋白酶体抑制剂PSI作用于PC12细胞24、48、72 h后,以MTT法检测细胞活性,荧光染色检测凋亡细胞百分率,HE染色观察细胞形态变化,透射电镜观察细胞超微结构变化。结果不同浓度PSI作用于PC12细胞24 h时,细胞存活率无变化;作用48~72 h时,1~20μmol/L PSI使细胞存活率分别降至47.03%~58.98%和19.58%~34.72%;凋亡细胞由1.15%升至5.27%。HE染色显示经PSI处理的PC12细胞胞浆内有嗜酸性包涵体出现,透射电镜下细胞呈凋亡的超微结构特点。结论PC12细胞蛋白酶体受抑模拟了PD的两大病理特点,蛋白酶体功能异常可能是PD的发病因素之一,短期抑制PC12细胞的蛋白酶体功能可作为PD的细胞模型。