PC12细胞蛋白质组学研究技术及二维电泳图谱的建立

目的：建立PC12细胞的蛋白质组学研究的技术体系,全面展示PC12细胞的蛋白质表达谱。方法：提取PC12细胞的蛋白质,建立固相pH梯度双向电泳图谱,应用图像扫描仪及ImageMaster 2D Evolution分析软件获得蛋白质点的数字化和匹配性信息,挑选匹配良好的高峰度蛋白点,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）的鉴定。结果：成功构建出PC12细胞的双向电泳图谱,并用MALDI-TOF-MS成功鉴定出19种PC12细胞的蛋白质,分属于以下6类：分子伴侣及相关功能蛋白、细胞结构/骨架蛋白、代谢相关蛋白、凋亡相关蛋白、激素结合相关蛋白和神经内分泌相关蛋白。结论：PC12细胞样品的蛋白质样品双向电泳图谱重复性良好,初步建立了PC12细胞的蛋白质组学研究技术,证明以PC12细胞为模型的神经系统疾病蛋白质组学研究的可行性。     

实验性帕金森病中PrxⅡ表达的研究

目的探讨PrxⅡ在实验性帕金森病发病中的表达。方法采用Wistar大鼠6-OHDA右侧内侧前脑束定位注射，制备实验性帕金森病动物模型。在4W后分别进行假手术组和实验组的纹状体定位分离，脑蛋白质提取，荧光差异双向凝胶电泳（DIGE）。通过Decyaer^TM分析软件进行蛋白变化比对，其中AV Ratio〉1．2或〈1.2，配对t检验P〈0．05为有意义的蛋白点意义，针对发现的差异表达的蛋白点进行质谱分析。结果DIGE分析发现表达明显提高的一个差异蛋白质点，经质谱分析确认为PrxⅡ。结论PrxⅡ在纹状体的表达明显增强，提示其在氧化应激后的帕金森病中发挥雷露保护作用。     

真性红细胞增多症并发脑血管病

真性红细胞增多症（polycythemia vera,PV）是一种罕见的以红细胞异常增生为主的骨髓增殖性疾病,其外周血红细胞显著增多,并常伴有白细胞和血小板增高。临床表现有皮肤红紫、脾大、高血压、血栓形成及出血倾向等。据文献报道,PV所致脑血管病起病隐袭、进展缓慢、临床缺乏特异性,易于误诊、漏诊。因此,提高对PV并发脑血管病的认识,做到早期诊断、合理治疗具有重要的临床意义。     

NGF诱导PC12细胞分化晚期的蛋白质组学研究

目的 研究神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化晚期的细胞蛋白质组变化,探索NGF诱导细胞分化的分子机制.方法 50 ng/ml NGF作用于PC12细胞96 h,提取细胞总蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(DIGE)获取蛋白点的差异表达信息,运用MALDI-TOF质谱鉴定出差异蛋白质.结果 NGF诱导96 h后,共有58个蛋白点发生变化,质谱鉴定出了10种蛋白.结论 本实验首次应用DIGE技术筛选NGF诱导PC12细胞分化晚期的相关蛋白,其中5种蛋白是首次在NGF诱导的PC12细胞中被报道.这些蛋白可能是NGF信号转导过程的新成员,也可以成为药物治疗的新靶点.     

帕金森病的蛋白质组学研究进展

蛋白质组学技术是后基因组时代的重要工具，其广泛应用为探索帕金森病的发病机制、寻找诊断预后指标和药物作用靶点等提供了有价值的线索。     

NGF诱导PC12细胞早期分化的DIGE分析

目的筛选神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)处理后PC12细胞分化早期相关蛋白,寻找NGF药物作用靶点,为深入进行神经保护药物的研发提供理论依据。方法在建立NGF诱导PC12细胞分化模型的基础上,分别提取NGF处理前后的细胞总蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(Differential Gel Electrophoresis,DIGE)系统获得蛋白点表达差异信息,运用MALDI-TOF质谱鉴定出差异蛋白质。结果NGF处理组有7个蛋白点发生变化;通过数据库检索,鉴定了3种结构和功能各异的蛋白。结论eEF-2、Rab GDIα和DPP与NGF诱导PC12细胞分化早期过程有关,可能是NGF的作用靶点。     

Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的蛋白质组学研究

目的 识别AD细胞模型中蛋白质组改变,在蛋白质水平上揭示Aβ的作用机制.方法 利用双向差异凝胶电泳技术(2D-DIGE)和质谱(MS)技术.探索20μmol/L浓度Aβ_(25-35)肽段作用48h后PC12细胞蛋白质组的改变.结果 2D-DIGE图像上出现约2000个蛋白点.与对照组比较,Aβ_(25-35)作用下共有29个蛋白的表达有显著差异,其中25个蛋白表达量上调及4个蛋白表达量下调超过30%.质谱鉴定出7个蛋白点,分为3类:(1)具有分子伴侣活性的蛋白:葡萄糖调节蛋白75(glucose-regulated protein75,GRP75)、热休克同源蛋白71(heat shock cognate 71 kDa protein,HSC71)、calreticulin表达量均上调.(2)细胞骨架蛋白:β-微管蛋白(tubulin beta chain 15,TBETA-15)和低分子量神经细丝蛋白(neurofilament light polypeptide,NF-L)表达量亦上调.(3)与能量代谢有关的酶:肌酸激酶B(creatine kinase-B,CKB)和醛缩酶A(aldolaseA)蛋白表达量均下调.结论 本实验首次将DIGE和MS方法应用于Aβ_(25-35)神经毒性作用机制研究,在蛋白质组水平上揭示了Aβ_(25-35)毒性作用的早期机制.     

NGF诱导PC12细胞分化早期和晚期结构蛋白的变化

目的 研究神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化早期和晚期的细胞结构蛋白质表达的变化.方法 建立NGF诱导PC12细胞分化的模型,比较NGF作用6 h和96 h的细胞蛋白质组学的变化,鉴定出其中差异表达的结构蛋白质.结果 NGF作用96 h的细胞蛋白质组,与对照组及作用6 h的细胞蛋白质组比较,有5种结构蛋白表达增高.结论 NGF诱导PC12细胞分化晚期,微管、徽丝及中间丝蛋白等构成蛋白表达增高;而分化早期的PC12细胞,没有差异表达的结构蛋白被鉴定.验证了细胞形态变化和相应的蛋白质表达有对应关系,蛋白质组学方法 可以用于探索细胞分化的机制.     

蛋白质组学技术鉴定的PC12细胞的细胞骨架蛋白

目的:使用蛋白质组学的技术手段,鉴定大鼠肾上腺皮质细胞瘤细胞系PC12细胞内的细胞骨架蛋白。方法:提取PC12细胞的蛋白质,建立固相pH梯度双向电泳图谱,应用图像扫描仪及ImageMaster 2D Elite分析软件获得蛋白质点的数字化和匹配性信息,挑选匹配良好的高峰度蛋白点,进行基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱(MALDI- TOF-MS)分析,鉴定。结果:用二维电泳技术分离,并用MALDI-TOF-MS成功鉴定出5个PC12细胞的细胞骨架蛋白。结论:PC12细胞蛋白质组中部分细胞骨架蛋白胶图位点的建立,为今后探讨这一类蛋白在神经系统疾病中的作用奠定了基础,并提供了新的侯选治疗靶点。     

雷沙吉兰(Rasagiline)对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的防护作用

目的探讨雷沙吉兰(Rasagiline)对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导PC12细胞损伤阿尔茨海默病(AD)模型的保护作用及其机制。方法不同浓度的Aβ25-35(1μmol/L,10μmol/L,20μmol/L)作用于PC12细胞48h,MTT法检测细胞存活率,选用使细胞存活率降低到64%的Aβ浓度20μmol/L。用不同浓度的雷沙吉兰(0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L)预孵育PC12细胞1h,再加入20μmol/L的Aβ共孵育48h,再测MTT活性,并用荧光染料丫啶橙和溴化乙啶染色,在荧光显微镜下计数凋亡细胞检测凋亡细胞百分率。结果Aβ在20μmol/L时使PC12细胞存活率降低至64%,与对照组差异显著,1μmol/L的雷沙吉兰可显著提高细胞存活率至85%。对照组细胞凋亡率为2%,20μmol/L Aβ作用48h后,PC12细胞凋亡率达13%,1μmol/L的雷沙吉兰使20μmol/L Aβ诱导的PC12细胞凋亡率下降到5%。结论雷沙吉兰对Aβ引起的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制Aβ诱导的凋亡有关。