益气养阴活血利水法联合康柏西普对非增殖期糖尿病视网膜病变患者视网膜电图的影响

目的:观察益气养阴活血利水法联合康柏西普对非增殖期糖尿病视网膜病变(NPDR)患者视网膜电图(ERG)的影响。方法:60例(82眼)NPDR患者,采用随机数字表法分为两组,对照组30例(40眼)玻璃体腔注射康柏西普,每月1次,治疗组30例(42眼)在对照组的基础上加用益气养阴活血利水中药口服治疗。治疗3个月后,观察两组患者BCVA、ERG,OCT检测两组患者CMT情况。结果:两组患者治疗前后不同时间BCVA、暗适应及明适应ab波振幅、CMT差异有统计学意义(P<0.05),治疗后不同时间两组患者BCVA、明暗适应ab波振幅、CMT相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:益气养阴活血利水法联合康柏西普较单纯康柏西普治疗能更好的减轻NPDR患者视网膜水肿,提高视力、暗适应及明适应a、b波振幅,降低CMT。     

黄芩苷联合TRAIL对人肺癌细胞株A549增殖、凋亡的影响

目的:观察黄芩苷联合TRAIL对人肺癌细胞株A549增殖、凋亡的影响。方法:采用2mg/L、4mg/L、8mg/L黄芩苷和100ng/mLTRAIL单用或联用处理肺癌细胞株A549。利用MTT法检测各组细胞增殖,倒置荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法及Western blot法检测Survivin、X连锁凋亡抑制蛋白基因(XIAP)、死亡受体4(DR4)及死亡受体(DR5)mRNA及蛋白相对表达量。结果:相比较于对照组,黄芩苷和TRAIL单用或联用均能呈浓度依赖性抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡(P0.05),而黄芩苷和TRAIL联用比单用时细胞抑制率及凋亡率更高(P0.05)。相比较于对照组,黄芩苷组和TRAIL组A549细胞数明显降低,漂浮细胞数增多,Survivin及XIAP mRNA及蛋白表达量显著降低,DR5mRNA及蛋白表达量显著升高(P均0.05),而DR4mRNA及蛋白表达无明显差异。与黄芩苷组或TRAIL组比较,联用组A549细胞数明显降低,漂浮细胞数增多,Survivin及XIAP mRNA及蛋白表达量显著降低,DR5mRNA及蛋白表达量显著升高(P均0.05),而DR4mRNA及蛋白表达无明显差异。结论:黄芩苷联合TRAIL可协同抑制肺癌细胞株A549增殖,并促进凋亡,其作用机制可能与两者联用能增加死亡受体DR5的表达,进而抑制Survivin和XIAP蛋白表达有关。     

自噬介导的雷公藤甲素提高西妥昔单抗对SW480细胞治疗效果的实验研究

目的观察雷公藤甲素联合表皮生长因子受体单克隆抗体西妥昔单抗对人结直肠癌细胞SW480细胞株生物学行为的影响。方法雷公藤甲素、西妥昔单抗单独或联合作用于SW480细胞株, MTT法、细胞克隆实验检测细胞增殖抑制率;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测雷公藤甲素诱导细胞自噬性凋亡标记物p62、LC3-Ⅱ;雷公藤甲素及西妥昔单抗单独和联合作用细胞后,Western blot分析上皮间质转化(EMT)标记物E-cadherin、Vimentin以及mTOR、Snail、Twist蛋白水平。结果雷公藤甲素及西妥昔单抗对SW480细胞的增殖抑制作用均呈剂量依赖性,两药联用可明显抑制SW480细胞增殖;雷公藤甲素诱导SW480细胞p62蛋白下调,LC3-Ⅱ上调,发生自噬性凋亡;雷公藤甲素单药组、联合用药组均能明显抑制SW480细胞发生EMT,其标记分子E-cadherin蛋白上调,Vimentin蛋白下调,关键分子Snail、Twist表达下调。结论雷公藤甲素联合西妥昔单抗抑制SW480细胞增殖和转移具有明显协同作用,雷公藤甲素通过抑制mTOR通路,可以诱导细胞自噬性凋亡,自噬介导的雷公藤甲素抑制肿瘤细胞EMT可能是逆转西妥昔单抗耐药的机制。     

CPEB4在透明细胞性肾细胞癌中的表达及其对细胞株增殖、凋亡和侵袭力的影响

目的研究CPEB4在透明细胞性肾细胞癌中的表达及其对细胞株增殖、凋亡和侵袭力的影响。方法选取我院于2016年3月～2018年3月进行透明细胞性肾细胞癌患者80例作为研究组,并选择我院同期收治的肿瘤周围正常肾组织50例为对照组,观察两组患者CPEB4表达相关情况。结果研究组CPEB4表达高于对照组,且对照组细胞存活率高于研究组,迁移距离低于对照组,差异有统计学意义(P 0.05)。对照组CPEB4阳性率为10.00%,Ⅳ组患者阳性率最高为100.00%,随着级别升高患者阳性率随之升高,淋巴结转移者CPEB4表达高于未转移,Ⅲ～Ⅳ期CPEB4表达高于Ⅰ～Ⅱ期。研究组男女性别之间CPEB4表达差异无统计学意义(P 0.05)。结论 CPEB4在透明细胞性肾细胞癌中表达较高,对细胞株增殖侵袭较强,有利于后期诊断治疗,明确患者治疗意义,在临床中具有重要意义,值得应用。     

芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用

目的探讨芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用。方法获取手术切除的人增生性瘢痕组织以及局部皮瓣转移修复后剩余的正常皮肤,提取成纤维细胞。通过MTT试验检测不同浓度的芒柄花黄素对成纤维细胞增殖的作用,应用流式细胞术对芒柄花黄素处理后的成纤维细胞周期进行分析。通过Annexin V-FITC/PI双染色法和Hoechest 33258染色观察成纤维细胞的凋亡情况。通过Western blot与RT-PCR试验,检测芒柄花黄素对细胞周期蛋白Cyclin D1和凋亡调节蛋白Bcl-2的作用。结果与对照组比较,芒柄花黄素对正常皮肤成纤维细胞的增殖影响较小,对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,且药物浓度越高、作用时间越长,抑制作用越强。成纤维细胞大部分阻滞于G_1期,S期的细胞减少,细胞周期的进程受到阻断。芒柄花黄素能够通过抑制细胞周期蛋白Cyclin D1来影响细胞周期的进程,将细胞周期阻滞于G_1期;通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达诱导成纤维细胞的凋亡,从而实现对细胞生长的抑制作用。结论芒柄花黄素能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖并诱导其凋亡,可考虑用于增生性瘢痕的预防与临床治疗。     

miR-140-5p靶向HDAC4调控人骨肉瘤细胞MG-63增殖

目的探讨microRNA-140-5p (miR-140-5p)能否通过抑制组蛋白脱乙酰基酶4(Histone deacetylase 4,HDAC4)基因调控人骨肉瘤细胞MG-63增殖。方法 qRT-PCR法检测miR-140-5p在骨肉瘤细胞系MG-63及成骨细胞系hFOB1.19中的差异表达;Western blot和qRT-PCR法检测miR-140-5p对HDAC4蛋白和mRNA表达的影响;CCK8法检测miR-140-5p对人骨肉瘤细胞MG-63增殖的变化;荧光素酶报告基因实验检测miR-140-5p能否特异性结合于HDAC4基因的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)。结果荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-140-5p可特异性结合于HDAC4基因的3′UTR;Western blot及qRT-PCR检测结果显示,miR-140-5p能抑制HDAC4的蛋白及mRNA表达;CCK8法结果显示,过表达miR140-5p可明显抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖。结论 miR-140-5p可抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖,且这种抑制效应与其特异性结合于HDAC4基因的3′UTR,下调HDAC4的表达有关。     

miR-142-5p通过影响上皮间质转化抑制肺腺癌H1650细胞的侵袭与迁移

目的：探讨肺腺癌组织中miR-142-5p的表达及其对H1650细胞增殖、侵袭、迁移及上皮间质转化（epithelieal-mesenchymal transition，EMT）的影响及其作用机制。方法：收集2014年1月至2015年1月在河北医科大学第四医院胸外科行肿瘤切 除并经病理证实的107例肺腺癌患者的癌组织及其癌旁组织标本，以及人肺腺癌细胞系H1650、HCC827、 A549、 H1975、PC9和人 支气管上皮细胞BEAS-2B， 用qPCR实验检测肺腺癌组织及细胞中miR-142-5p的表达水平及其与患者临床特征的关系。分别用 miR-142-5p模拟物（mimics）、miR-阴性对照质粒（miR-NC）转染H1650细胞后， 用CCK8、细胞划痕愈合和Transwell侵袭实验分 别检测H1650细胞的增殖、侵袭和迁移能力。使用生物信息学工具预测miR-142-5p的靶基因，通过双荧光素酶报告基因实验验 证miR-142-5p对靶基因的调控作用，Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶5（cyclin-dependent kinase 5，CDK5）及EMT 相关蛋白的表达水平。结果：肺腺癌组织及细胞系中miR-142-5p表达水平显著低于癌旁组织及BEAS-2B细胞（均P<0.01）；107 例肺腺癌组织中， 61例（57.01%）低表达miR-142-5p，其表达水平与患者的TNM分期、淋巴结转移密切相关（均P<0.01）。转染 miR-142-5p模拟物后， H1650细胞中miR-142-5p高表达，细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低（均P<0.05或P<0.01）。生物信息 学工具预测CDK5是miR-142-5p的靶基因，经双荧光素酶报告基因验证，miR-142-5p可显著降低H1650细胞中CDK5的表达水 平，显著提高E-cadherin表达，降低N-cadherin和Snail的表达水平（均P<0.01）。结论：miR-142-5p在肺腺癌组织和细胞中呈低表 达状态，其通过下调CDK5表达影响EMT抑制H1650细胞的侵袭与迁移能力。     

阿帕替尼通过抑制HMGA2增强顺铂对胃癌的抗瘤作用

目的：探讨阿帕替尼（apatinib，APA）联合顺铂（cisplatin，DDP）对胃癌（gastric carcinoma，GC）细胞增殖、侵袭和迁移 能力的影响及其分子机制。方法：收集2016年1月到2019年6月武威市人民医院手术切除的50例GC患者的癌及癌旁组织标 本，以及GC细胞系MGC803和SGC7901， 用qPCR检测组织中HMGA2和细胞中增殖、迁移及侵袭相关mRNA的表达水平。采 用脂质体转染技术， 将pcHMGA2转染MGC803和SGC7901细胞，经分别用不同浓度的DDP和APA处理，分为NC、pcHMGA2、 pcHMGA2+DDP及pcHMGA2+DDP+APA组， 用Western blotting检测GC细胞中HMGA2蛋白的表达水平，MTT、Transwell小室 法分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：HMGA2 mRNA在GC组织中表达水平高于癌旁组织（P<0.05），且高表达组 GC患者的生存率显著降低（P<0.01）。DDP 显著抑制 MGC803 和 SGC7901 细胞的增殖、侵袭和迁移能力（均P<0.01）； DDP+APA组MGC803和SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著低于DDP组（均P<0.01）；APA显著增强DDP对GC细胞 HMGA2表达的抑制作用（均P<0.01）；APA通过下调HMGA2表达增强DDP对GC的抗肿瘤性。结论：APA能促进DDP对GC的 抗瘤作用，其分子机制可能是增强DDP对HMGA2表达的抑制作用有关。     

蓝莓花青素对人胃腺癌BGC-823细胞增殖、侵袭的影响及机制研究

目的:探讨蓝莓花青素(BA)对人胃腺癌BGC-823细胞增殖、侵袭的影响及相关机制。方法:低、中、高剂量实验组与对照组人胃腺癌BGC-823细胞分别以25、50、100μg/mL BA与等量生理盐水处理,分别处理12 h、24 h、48 h。采用噻唑蓝(MTT)与流式细胞仪检测人胃腺癌BGC-823细胞增殖与凋亡;采用Transwell小室实验与免疫细胞化学法检测人胃腺癌BGC-823细胞侵袭与P53、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。结果:干预48 h时,对照组、低、中、高剂量实验组人胃腺癌BGC-823细胞P53与Caspase-3蛋白阳性细胞百分比分别为(11.12±1.01)%,(24.31±2.18)%,(47.56±2.91)%,(66.49±5.14)%与(15.04±1.23)%,(28.22±3.09)%,(69.36±5.42)%,(86.52±6.15)%。实验组胃腺癌BGC-823细胞增殖抑制率随BA浓度增大而逐渐升高;与对照组比较,低、中、高剂量实验组人胃腺癌BGC-823细胞凋亡率、P53与Caspase-3蛋白阳性细胞百分比均显著升高,侵袭率降低,呈浓度依赖性(均P0.05)。结论:BA可有效抑制胃腺癌BGC-823细胞增殖,诱导其凋亡,并降低侵袭能力,其机制可能与上调P53与Caspase-3蛋白表达有关。