组蛋白去甲基化酶JARID1B的表达纯化及酶活力分析

 目的 筛选能够大量表达、方便纯化且具有酶活性的组蛋白去甲基化酶JARID1B(jumonji AT rich interactive domain 1B)的截短体。方法 通过Bac to Bac系统制备含目的基因的杆粒(bacmid),转染Sf9昆虫细胞获得重组病毒基因组,并感染Hi5昆虫细胞表达目的蛋白,用Ni NTA亲和层析,离子交换层析和分子筛纯化目的蛋白。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometer,MALDI TOF)分析截短体的酶活力。结果 去除C 端两个PHD结构域的截短体JARID1B1 825能够在昆虫细胞Hi5中得以大量表达(1L细胞含10 mg蛋白),经Ni NTA亲和层析,阴离子交换层析和分子筛三步纯化,获得纯度大于90%的目的蛋白,MALDI TOF质谱分析显示JARID1B1 825仍拥有去组蛋白甲基化修饰的酶活性。结论 筛选到了能够大量表达、方便纯化且具有酶活性的JARID1B的截短体,对其后续的功能研究和药物开发具有重要的意义。     

吲哚美辛自微乳肠溶胶囊的处方设计及体外溶出度评价

目的制备吲哚美辛自微乳肠溶胶囊,并考察其体外溶出度。方法考察吲哚美辛在不同油、乳化剂及助乳化剂中的溶解度;根据溶解度的结果,采用正交设计试验和伪三元相图进行处方优化,筛选得到吲哚美辛自微乳的最佳工艺;将吲哚美辛自微乳装入肠溶胶囊中考察溶出度。结果吲哚美辛自微乳的处方组成为:吲哚美辛∶油酸乙酯∶吐温-80∶PEG-400的质量比为0.03∶0.135∶0.225∶0.09。制备得到的微乳粒径为21.97 nm,分散系数为0.180。吲哚美辛自微乳在pH 5.0磷酸盐缓冲溶液中,60 min时溶出度超过50%;吲哚美辛自微乳肠溶胶囊在pH 7.2磷酸盐缓冲溶液中,60 min时溶出度超过80%。结论自微乳剂能够改善吲哚美辛的溶解性,吲哚美辛自微乳剂在pH 5.0、pH 7.2磷酸盐缓冲溶液中的溶出均较好,吲哚美辛自微乳肠溶胶囊的制备工艺简单,具有良好开发应用前景。     

手足口病脑炎患儿T淋巴细胞亚群研究

目的 探讨手足口病(hand-foot-and-mouth disease,HFMD)脑炎患儿的T淋巴细胞亚群与普通HFMD患儿的区别.方法 回顾性分析2010年1～10月北京佑安医院收治的21例普通HFMD患儿和17例HFMD脑炎患儿的临床资料及T淋巴细胞亚群检测结果.结果 普通HFMD组的住院天数、最高体温较脑炎组显著降低[(6.86±3.34)d vs.(9.47±1.84)d,(38.66±0.50)℃vs.(39.05±0.55)℃;P均＜0.05].普通HFMD患儿的外周血T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数分别为(2829±1463)个/μl、(1700±880)个/μl和(939±624)个/μl;脑炎HFMD患儿分别为(2453±990)个/μl(t=0.902,P=0.373)、(1296±566)个/μl(t =1.635,P=0.111)和(995±550)个/μl(t =0.292,P=0.772).结论 T淋巴细胞及其亚群检测对于HFMD脑炎的辅助诊断价值有限.     

HIV慢性感染者CD8~+T淋巴细胞及其各亚群细胞增生、消亡情况的观察

目的探讨HIV-1慢性感染者(病程>12个月)CD8+T淋巴细胞及其各亚群:纯真CD8+T细胞(TN)、中心记忆CD8+T细胞(TCM)、效应记忆CD8+T细胞(TEM)和效应记忆CD8+T细胞RA(TEMRA)的增生、消亡情况。方法观察23例未经抗病毒治疗、病程大于12个月的HIV-1感染者以及16例健康对照者,通过流式细胞仪分析,根据CD45RO,CD27表达情况,CD8+T细胞分为TN(CD45RO-CD27+)、TCM(CD45RO+CD27+)、TEM(CD45RO+CD27-)和TEMRA(CD45RO-CD27-)。以Ki-67抗原的表达代表细胞的增生,AnnexinV检测阳性代表细胞的消亡,比较HIV-1慢性感染者和健康者CD8+T细胞及其各亚群增生消亡的情况;并把HIV-1慢性感染者按CD4+T细胞计数200个/mm3以及350个/mm3为观察点分成3组,比较3组间的CD8+细胞及其各亚群增生消亡的情况。结果健康组(n=16)CD8+细胞各亚群检出率为TN34.92%±12.68%、TCM25.44%±10.36%、TEM14.64%±10.58%和TEMRA25.00%±12.59%;与之相比HIV-1慢性感染组(n=23)检出率为TN17.14%±8.03%(t=5.368,P=0.000)、TCM31.40%±14.02%(t=-1.448,P=0.156)、TEM20.17%±13.17%(t=-1.393,P=0.172)和TEMRA31.48%±15.16%(t=-1.405,P=0.168)。CD8+T细胞增生率为:健康组0.15%±0.09%,感染组1.33%±0.90%(z=-4.655,P=0.000);健康组消亡率为8.74%±4.73%,感染组24.08%±13.72%(z=-4.169,P=0.000)。HIV-1慢性感染者按CD4+T细胞计数分成CD4≤200个/mm3组(A组,n=5)、CD4计数200～350个/mm3组(B组,n=12)和CD4≥350个/mm3组(C组,n=6),3组间各亚群组成比中TN所占比例在A组明显减少,而CD8+T细胞各亚群的增生率、消亡率在3组间差异没有统计学意义。结论①与健康对照组相比,HIV-1慢性感染者CD8+T细胞及其各亚群消亡率增加,增生率也相应大幅增加,细胞进入高速更新的状态;②HIV-1慢性感染者CD8+TN亚群的检出率明显下降,并在CD4≤200个/mm3组降至最低,CD8+TN资源随病情进展不断耗竭。     

免固定与钉枪钉合腹腔镜下经腹腹膜前补片植入术治疗腹股沟疝的疗效比较

经腹腹膜前补片植入术（TAPP）已经成为腹腔镜下腹股沟疝修补术的标准术式之一[1]。腹腔镜下腹股沟疝治疗具有损伤小、疼痛轻、出血少、恢复快、不易损伤神经等优点[2]。目前,临床上TAPP术中植入的补片主要为聚丙烯补片与3DMAX补片,两种补片的固定方式有较大差异。本研究比较免固定3DMax补片与钉枪钉合聚丙烯补片在腹腔镜下TAPP中的疗效进行比较,报告如下。     

腹腔镜胃癌根治手术中的团队配合

目的探讨团队配合在腹腔镜胃癌根治手术中的重要性及技巧。方法对2008年1月-2008年10月32例腹腔镜胃癌根治临床的临床资料进行分析。主刀医生及扶镜助手,第一助手在相应的手术区域,采用基本固定的配合模式,分别完成胃结肠韧带、脾胃韧带、肝胃韧带的离断,小网膜囊的完整切除及各组淋巴结的清扫,并在体腔外完成病灶的切除,消化道的重建。结果32例均在腹腔镜下完成手术,远近端胃癌根治性切除术时间250-390 min,平均325 min。全胃根治性切除300-450 min,平均347min。术中出血量：远、近端胃癌根治性切除术50-250 ml,全胃根治性切除术60-350 ml,术中均未输血。所有标本切缘均阴性,清扫淋巴结13-35枚,平均21枚。术后排气时间24-72 h,平均38 h。进流质时间2-5 d,平均2.8 d。27例术后随访1-8个月,未见复发和转移,未发生切口和穿刺口种植。结论密切的团队配合是顺利完成腹腔镜胃癌根治手术的必要条件,对缩短手术时间,减少术中出血及保证根治效果具有重要意义。     

湖南省13个监测点60岁及以上老人肥胖指标与高血压及血脂异常的切点研究

目的 探讨体质指数(body mass index,BMI)、腰围(waist circumference,WC)、腰高比(waist-to-height ratio,WHtR)三类肥胖指标判定的肥胖率分别与湖南省13个监测点60岁以上老人高血压、血脂异常的相关性,预测高血压及血脂异常患病风险的能力。 方法 采用具有省级代表性的中国慢性病与危险因素调查数据,通过受试者工作特征曲线分析,确定湖南省老年人不同肥胖指标预测高血压及血脂异常适宜的BMI、WC、WHtR切点。 结果 湖南省13个监测点60岁以上老年人超重肥胖率(BMI≥24)为42.91%,中心性肥胖率为31.26%,WHtR≥0.5的肥胖率68.97%。以高血压为因变量绘制受试者工作特征曲线,显示男、女性WHtR的曲线下面积相对较高,其切点值分别为0.50、0.53;以血脂异常为因变量,结果显示BMI的曲线下面积最高,其切点值分别为21.40、22.06。 结论 评价肥胖的不同指标对高血压及血脂异常的预测效果不同,其中腰高比在预测老年人高血压中的效果最好;BMI是诊断老年人血脂异常的最佳简易指标。     

湖南省赫山区老年人失能现况及影响因素分析

目的调查湖南省赫山区65岁以上老年人日常生活活动能力现状及影响因素,为制定干预措施、养老服务规划提供理论依据。方法采用多阶段随机抽样的原则,分别抽取赫山区2个街道(村)共460名65岁以上老年人,对其进行问卷调查。评估基本生活自理能力(basicactivities of daily living,BADL)和工具性日常生活活动能力(instrumental activities of daily living,IADL)。使用χ^(2)检验分析不同特征老年人群失能率差异,采用多因素logistic回归模型分析老年人BADL和IADL失能的影响因素。结果赫山区65岁以上BADL总体失能率为13.76%,IADL总体失能率47.82%。BADL损失率排前3位的项目依次是洗澡、穿衣、上厕所;IADL损失中搭乘公共交通受损率最高(34.06%),其次是使用电话、食物烹调。多因素分析结果显示:年龄越大,BADL、IADL损失的可能性越高;近1年未跌倒(OR=0.429,95%CI:0.182~1.010)、无慢性病(OR=0.136,95%CI:0.056~0.332)是BADL发生的保护因素,而初中以上文化程度(OR=0.418,95%CI:0.217~0.806)、近1年未跌倒(OR=0.313,95%CI:0.137~0.717)、无慢性病(OR=0.250,95%CI:0.141~0.443)是IADL失能的保护因素。结论湖南省益阳市赫山区65岁以上老年人失能率较高。高龄、跌倒、患有慢性病是BADL损失发生的危险因素,高龄、较低的文化程度、跌倒、患慢性病是IADL损失的危险因素,对该地区老年人日常生活活动能力进行有针对性地干预十分必要。     

浏阳市成年人群糖尿病患病及影响因素分析

目的 了解浏阳市成年人群糖尿病患病情况并探讨患病的影响因素。方法 对浏阳市成年人开展调查（问卷调查、体格检查及采血）,分析该市成年人群糖尿病患病情况,通过Logistic回归分析患病的影响因素。结果 共调查59 916人,平均年龄（51.6±10.5）岁。其中男性26 375人,女性33 541人。浏阳市成年人群糖尿病患病率为3.5%,多因素Logistic回归结果提示年龄为40~49、50~59、60~69、70~79岁（OR=2.058、4.044、4.832、4.596）、职业为行政管理或技术人员（OR=1.616）、离退休、家务及待业等其他人员（OR=2.212）、有糖尿病家族史（OR=3.059）、超重（OR=1.682）、肥胖（OR=2.359）、中心型肥胖（OR=2.801）是浏阳市成年人群糖尿病患病的危险因素;每周饮茶（OR=0.702）、经常（OR=0.613）/偶尔（OR=0.502）吃新鲜水果是浏阳市成年人群糖尿病患病的保护因素。结论 应针对浏阳市成年人群糖尿病患病危险因素,继续开展糖尿病防治工作,做好健康教育与宣传工作。     

富含中链脂肪酸和蛋白的肠内营养对恶性梗阻性黄疸手术病人肠屏障功能的影响

目的 :观察富含中链脂肪酸和蛋白的肠内营养(Nutrison MCT)和普通肠内营养混悬液(Nutrison MF)两种肠内营养混悬液对恶性梗阻性黄疸手术病人肠粘膜屏障功能的影响。方法 :将82例需手术的恶性梗阻性黄疸病人随机分为MCT组(40例)和MF组(42例)。病人入院后予口服营养制剂。术后胃肠功能恢复后自空肠营养管逐步使用肠内营养直至全量肠内营养治疗5 d,5 d后根据个体情况逐步停止肠内营养。测定入院后第2天、术前1天、全量用药5 d后两组病人血浆内毒素水平和二胺氧化酶(DAO)活性,以及尿液乳果糖与甘露醇(L/M)比值。结果 :两组病人入院后2天和手术前1天相比,血浆内毒素水平、DAO活性和尿L/M比值的差异均无统计学意义。两组病人术后全量用药5天后内毒素水平、二胺氧化酶(DAO)活性和尿L/M比值均较术前降低,且MCT组较MF组降低更明显。结论 :Nutrison MCT相比Nutrison MF可以更早的改善恶性梗阻性黄疸手术病人肠粘膜屏障功能。