实时荧光定量PCR检测RAGE mRNA方法的建立及初步应用

目的 建立实时荧光定量PCR(RTFQ-PCR)检测人晚期糖基化终末产物受体(RAGE)mRNA的方法并研究其在食管癌组织中的表达.方法 根据Genebank提供的序列在RAGE基因外显子5和6之间设计引物,应用SYBR Green Ⅰ荧光染料,建立检测RAGE mRNA的RTFQ-PCR方法,并对其线性、特异性、灵敏度及重复性进行评价;根据标准曲线计算出食管癌及配对远端正常组织中RAGE mRNA含量,并以RAGE mRNA和18S rRNA含量的比值作为评价RAGE mRNA表达水平指标.结果 线性范围为5.0×103～5.0×109copies/ml,相关系数为-0.98,批内变异系数(CV)为0.63%～8.71%,批间CV为1.52%～12.38%.食管癌及配对远端正常组织RAGE mRNA与18S rRNA浓度的对数比值(-x±s)分别为0.638±0.068和0.334±0.329(P＜0.005),提示食管癌组织RAGE表达上调.结论 RTFQ-PCR检测RAGE mRNA的方法具有灵敏、特异、重复性好等优点,RAGE mRNA表达水平与食管癌存在一定相关性.     

负荷条件下二尖瓣环DTI舒张期部分位点波形改变的临床意义

目的探讨负荷超声心动图条件下二尖瓣环DTI部分位点舒张期波形改变的临床意义。方法观察对象共98例,入选标准是：根据负荷试验后二尖瓣环处4个DTI测量位点波形E/A〉或≤1.0改变的点位数在1-3处者。结果冠状动脉造影证实本组98例患者中56例的冠状动脉有1支以上分支的管腔狭窄≥50%,冠脉病变的发病率为57.1%。负荷条件下舒张期二尖瓣环处4个取样点DTI波形的改变可分为两组：Ⅰ组是试验前部分波形E/A≤1.0的测点,试验后转为〉1.0,即部分位点的波形向正常人转变,称之为波形改善组,共27例,冠状动脉造影阳性10例、阴性17例,分别占37.0%、63.0%;Ⅱ组是试验前部分波形E/A〉1.0的测点,试验后转为≤1.0,即部分位点的波形向异常人转变,称之为波形变差组,共71例,冠状动脉造影阳性46例、阴性25例,分别占64.8%、35.2%。结论试验后部分位点转为E/Aann≤1.0组的冠状动脉造影阳性率明显高于试验后部分位点转为E/Aann〉1.0组,DSE使得安静状态下较潜隐局部左室舒张功能的损害改变得以较明确的显示,因此,DSE条件下,二尖瓣环部分位点舒张期E/Aann的改变,尤其是出现由E/Aann〉1.0转向E/Aann≤1.0时,应提示有冠脉病变的可能性较大。     

补阳还五汤对肺纤维化中HMGB1-RAGE信号通路的调控作用

目的:观察肺纤维化中诱导免疫损伤和异常修复的高迁移率族蛋白Box-1(high mobility group Box-1 protein,HMGB1)及晚期糖基化终产物受体(receptor of advanced glycation end-product,RAGE)的表达,及补阳还五汤对HMGB1-RAGE信号通路的调控作用。方法:144只SD大鼠随机分为6组,分别为正常组,博莱霉素(BLM)模型组,补阳还五汤低、中、高剂量组(6.83,13.66,27.32 g·kg~(-1)),阳性药组(强的松,4.2 mg·kg~(-1)),动物实验采用博莱霉素气管注入法复制肺纤维化模型后,分别给予补阳还五汤高、中、低剂量和强的松灌胃,于造模后第7,14,28天分批提取样本。采用逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)法检测肺组织中的HMGB1,RAGE mRNA的表达;采用蛋白质免疫印记法(Western blot)检测HMGB1,α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle action,α-SMA)的表达。细胞实验采用含药血清药理学的实验方法,以5%,10%,15%,20%的补阳还五汤含药血清和空白血清来干预HMGB1诱导刺激的人肺成纤维细胞(HFL1),采用Western blot法检测α-SMA蛋白的表达。结果:动物实验中,与正常组比较,模型组在第28天显著上调HMGB1 mRNA(P0.01),在第7天和第14天显著上调RAGE mRNA(P0.01),在各时间点显著上调HMGB1,α-SMA(P0.01);与BLM模型组比较,补阳还五汤高剂量组在第14天和第28天显著下调HMGB1 mRNA(P0.01),在第7天和第14天显著下调RAGE mRNA(P0.01),在各时间点显著下调HMGB1和α-SMA蛋白(P0.01)。细胞实验中,与空白组比较,20%空白血清预培养加HMGB1组显著升高α-SMA蛋白(P0.01);与20%空白血清预培养加HMGB1组比较,不同剂量的补阳还五汤含药血清显著下调细胞中α-SMA蛋白(P0.01)。结论:补阳还五汤可抑制HMGB1在大鼠肺组织中和人肺成纤维细胞中所引起的RAGE,α-SMA的表达增加。提示补阳还五汤可能通过阻断HMGB1/RAGE信号通路,减少肌成纤维细胞生成,对肺纤维化的发生发展起到防治作用。     

中药复方干预非酶糖基化防治糖尿病肾病的研究进展

目的:选取有代表性的文献对非酶糖基化的终末产物(AGEs)导致糖尿病肾病的机制及中药复方干预进行综述。方法:通过数据库查阅近年的文献,并进行总结。结果:中药复方通过调控AGEs特殊受体蛋白表达、控制高血糖、降解AGEs、减少AGEs的生成、抗氧化、下调炎症反应等途径干预非酶糖基化及其终末产物的生成。结论:中药复方对防治糖尿病肾病具有重要意义。     

基于UPLC-Q-TOF-MS分析通络清脑注射剂在大鼠体内的代谢产物

目的:研究大鼠尾静脉注射通络清脑注射剂后尿液中的代谢产物,为该制剂的作用机制分析提供参考。方法:大鼠尾静脉注射通络清脑注射剂,收集0~12 h尿液,采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)分析尿液样品,流动相0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.3 m L·min~(-1),电喷雾离子源,正离子模式,扫描范围m/z 100~1 400。结果:检测并鉴定到7个原型成分(黄芩苷,栀子苷,三七皂苷R1,人参皂苷Rg1,Rb1,Rd和Re)及10个可能的代谢产物(其中4个来源于黄芩苷,6个来源于栀子苷)。10个可能的代谢产物分别为葡萄糖基化代谢物(B-M1,G-M2和G-M4),葡萄糖醛酸化代谢物(B-M2),甲基化代谢物(B-M3),水解代谢物(B-M4),去甲基化代谢物(G-M1),脱氢代谢物(G-M3)和羟基化代谢物(G-M5和G-M6),而人参皂苷类成分则暂时未能在尿液中检测到代谢产物。结论:尾静脉注射通络清脑注射剂后,大鼠尿液中能检测到黄芩苷和栀子苷的原型及不同途径的10个代谢产物,而三七总皂苷各成分则只检测到药物原型,暂时未能检测到代谢产物。     

丙酮醛与糖尿病及牙周病的相关性

丙酮醛是一种细胞的代谢产物,在糖尿病血管并发症发病机制中发挥作用而日益受到重视,并取得了一些进展.近日研究表明,丙酮醛与牙周病发病亦有密切联系.本文拟就丙酮醛与糖尿病及牙周病的相关性研究作一综述.     

舒芬太尼在口腔颌面外科手术麻醉中的应用与研究

舒芬太尼是芬太尼N-4位取代的衍生物,镇痛效果是芬太尼的5~10倍,并具有起效快、心血管系统功能稳定、无组胺释放等特点[1]。本研究将舒芬太尼用于颌面外科患者,评价其镇痛效果和安全性。1资料与方法1.1一般资料60例颌面外科择期全麻手术患者,男,36例,女24例,年龄17~66岁,,平均年龄39.4岁,ASAⅠ~Ⅱ级,既往无药物成瘾史、癫痫病史和肝肾功能损害。病种包括颌面部骨折、颌面部畸形、颌面部肿瘤、颞颌关节病等。随机分为舒芬太尼(Suf)组和芬太尼(Fen)组,每组30例。1.2麻醉方法麻醉前30min肌肉注射哌替啶1mg/kg、异丙嗪0.5mg/kg和阿托品0.01mg…     

N-乙酰半胱氨酸对脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症损伤的影响

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)是否对脂多糖(LPS)刺激的血管内皮细胞具有保护作用,为NAC用于治疗种植体周围炎、牙周炎等提供理论基础。方法:通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测不同浓度的LPS或NAC对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,以获得刺激HUVECs的最适药物浓度。添加最佳药物浓度的LPS和(或)NAC处理HUVECs 24 h,实时半定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测炎症因子白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞粘附分子-1(ICAM-1)的mRNA表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α和IL-8的蛋白表达;Western blot法检测ICAM-1和NF-κB信号通路的表达情况。结果:LPS刺激HUVECs过量表达炎症因子TNF-α、IL-8和ICAM-1。此外,LPS增加NF-κB通路的磷酸化P65(pP65)表达。然而,NAC预处理HUVECs后,显著抑制了LPS引起的TNF-α、IL-8和ICAM-1表达的增加及降低了pP65的分泌水平。结论:本结果表明NAC保护血管内皮细胞免受LPS介导的炎症损伤,从而减轻炎症反应,其潜在的机制可能与NF-κB信号通路有关。     

单纯疱疹病毒脑炎继发抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎患儿3例临床分析

目的 分析儿童单纯疱疹病毒脑炎继发抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)脑炎的临床特点、治疗及转归情况.方法 收集我科收治的3例单纯疱疹病毒脑炎继发抗NMDAR脑炎患儿临床资料,其中男2例、女1例,年龄分别为1岁9个月、10岁和4岁.结果 3例患儿均表现为抽搐起病,伴意识改变、行为异常,脑脊液单纯疱疹病毒Ⅰ型均为阳性.3例患儿予抗病毒及对症处理后病情均有好转,但分别于病程1周至1个月后病情再次加重,脑脊液NMDAR抗体均呈阳性.经积极对症治疗后,2例患儿恢复较好,1例放弃治疗后死亡.结论 单纯疱疹病毒脑炎可发展至抗NMDAR脑炎,动态检测NMDAR抗体有助于早期识别单纯疱疹病毒脑炎后自身免疫性脑炎的发生,从而进行早期干预.     

血清NT-proBNP sST2 AngⅡ水平对慢性心功能不全危险分层及预后的评估价值

目的 分析血清N-末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)、可溶性ST2受体(sST2)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平对慢性心功能不全危险分层及预后的评估价值.方法 选择2016年12月至2019年12月周口市中心医院收治的162例慢性心功能不全患者,随访6个月,根据患者是否出现终点事件分为预后不良组(n=69)和预后良好组(n=93),检测两组患者血清NT-proBNP、sST2、AngⅡ水平,比较两组患者一般资料差异,分析影响慢性心功能不全患者预后的因素,采用受试者特征曲线(ROC)分析血清NT-proBNP、sST2、AngⅡ水平对慢性心功能不全患者预后的评估价值,并比较不同血清NT-proBNP、sST2、AngⅡ水平危险分层慢性心功能不全患者生存曲线的差异.结果 预后不良组和预后良好组患者左心室射血分数(LVEF)、全球急性冠状动脉事件注册(GRACE)评分以及血清NT-proBNP、sST2、AngⅡ水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素分析显示,血清NT-proBNP、sST2、AngⅡ水平以及LVEF、GRACE评分为影响慢性心功能不全患者预后的独立危险因素;ROC曲线结果显示,NT-proBNP最佳截断值为1863.64 pg/mL,曲线下面积(AUC)为0.923(95％CI:0.883～0.962),敏感度为95.70％,特异度为80.60％;sST2最佳截断值为44.28μg/L,AUC为0.890(95％CI:0.840～0.941),敏感度为84.10％,特异度为84.90％;AngⅡ最佳截断值为1.38μg/L,AUC为0.858(95％CI:0.793～0.923),敏感度为85.50％,特异度为84.90％;Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,NT-proBNP、sST2、AngⅡ低危组患者生存时间高于高危组,差异有统计学意义(Log-Rankχ2=95.122,91.190,81.039,P<0.05).结论 慢性心功能不全患者血清NT-proBNP、sST2、AngⅡ水平显著升高,监测其水平变化对于慢性心功能不全危险分层及预后评估具有重要意义.