槌果藤对局灶节段肾小球硬化鼠模型的治疗作用及作用机制的初步探讨

目的：探讨槌果藤对局灶节段肾小球硬化大鼠模型的治疗作用及作用机制。方法：通过左肾切除并阿霉素尾静脉注射的方法建立FSGS模型。按不同灌胃给药浓度将动物分为75g/L组（A组）、150g/L组（B组）、300g/L组（C组）、600g/L组（D组）,另两组分别为安慰剂对照组（E组）和假手术组（F组）。造模后4周给药,疗程4周。各组动物于治疗前后均分别测定24h尿蛋白定量、血常规、肾功能、谷丙转氨酶（ALT）、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、胆固醇（TC）水平。治疗后取D、E、F组肾组织抽提总RNA,杂交高密度cDNA芯片并分析结果。结果：各槌果藤煎剂组治疗后24h尿蛋白水平均较治疗前显著下降,其中又以D组下降程度最为显著（P〈0.05）。同时各治疗组治疗后血浆白蛋白均较治疗前有显著上升,血胆固醇、肌酐、尿素氮水平均较治疗前有显著降低,而各治疗组治疗前后血红蛋白、白细胞总数、血小板数和谷丙转氨酶水平均无统计学差异（P〉0.05）。基因芯片检测结果显示与E组比较,D组有包括转化生长因子-β1（TGF-β1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）受体、足细胞相关蛋白（Podocin）、纤维连接蛋白等与FSGS发生发展密切相关的基因表达具有统计学差异。结论：本实验中不同浓度的槌果藤煎剂对FSGS大鼠模型均有减少尿蛋白的作用,其中以600g/L组为最强。观察期内各组均未发现骨髓抑制、肝损害等副反应。槌果藤可能通过下调TNF-α受体、EGF受体、TGF-β1、PDGF、纤维连接蛋白、肾特异性膜蛋白、足细胞相关蛋白Podocin以及ILK的基因表达,上调锌指蛋白216以及硒蛋白的表达等起到免疫调节、抗氧化、抗纤维化作用,其确切作用机制需要进一步研究。     

OX-LDL诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞TGF-β与Fn基因表达的影响及水蛭素的干预作用

目的：研究氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞转化生长因子（TGF-β）、纤连蛋白（Fn）基因表达的影响以及水蛭素的干预作用，探讨炎症状态下肾硬化发生的病理机制和水蛭素的有效作用。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞，将OX—LDL诱导活化的大鼠腹腔巨噬细胞转入细胞培养小室，或采集其条件培养基与肾小球系膜细胞共培养；水蛭素干预组在分层共培养系统的培养有系膜细胞的下层培养液中加入水蛭素。浓度分别为2.5U／ml、5．0U／ml、10U/ml。逆转录-聚合酶链扩增反应（RT—PCR）检测肾小球系膜细胞TGF-β、Fn的基因表达。结果：OX—LDL刺激后，大鼠腹腔巨噬细胞上清液中IL-1浓度明显升高；无论是活化的巨噬细胞还是其奈件培养基均能上调TGF-β和Fn mRNA的表达，但以分层共培养作用最为显著；水蛭素在一定浓度下可显著下调T（再一p和Fn的基因表达。结论：（1）在分层共培养条件下，OX—LDL诱导活化的巨噬细胞与系膜细胞处于一个整体系统中，巨噬细胞不仅可通过分泌细胞因子等病理产物，而且两种细胞还可能通过相互作用增强对系膜细胞增殖和TGF-β和Fn分泌等的促进作用。（2）水蛭素可能通过抑制病理条件下硬化因子和细胞外基质的基因表达起到干预肾硬化的作用。     

复方积雪草对FGS鼠肾细胞因子mRNA表达影响的实验研究

目的：观察复方积雪草的抗肾纤维化作用及其对FGS实验鼠肾细胞因子mRNA表达的影响。方法 BALB／C小鼠尾静脉一次性注射阿霉素诱导FGS肾炎模型，以复方积雪草制剂灌胃治疗4周。分别观察尿蛋白和肾脏病理化，同时提取肾组织总RNA，通过逆转录掺入荧光素，再与细胞因子表达谱基因芯片杂交，并行扫描分析。结果：复方积雪草治疗组蛋白尿较模型明显减轻，同时实验鼠肾小球硬化的病理明显改善：芯片检测证实，复方积雪草可下调PDGF-α、PDGF-β、PDGF受体、VEGF、IL-9、IL-7R2、MIP、c-myc、Jun等细胞因子mRNA的表达，上调GM—CSF的表达。结论：复方积雪草具有抗肾纤维化作用，其作用效应可能是通过对多种细胞因子mRNA共同调控的结果。     

复方积雪草胶囊对肾小球硬化症大鼠肾组织细胞外基质的影响

目的:探讨复方积雪草胶囊对局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)大鼠肾组织细胞外基质(ECM)的影响.方法:建立单侧肾切除合并阿霉素静脉双次注射大鼠FSGS模型,采用半定量病理分析法观察复方积雪草胶囊对肾组织ECM的影响,并生化检测尿蛋白、血脂、肾功能的变化.结果:FSGS大鼠经复方积雪草胶囊治疗8周后,肾组织ECM积聚减少(P＜0.01),血脂、肌酐、尿素氮和尿蛋白较模型组明显降低(P＜0.05～0.01),疗效优于尿毒清组.结论:复方积雪草胶囊可以抑制肾组织ECM积聚,改善肾功能,防治肾纤维化.     

OX-LDL诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:采用细胞共培养方法,研究氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞增殖的影响.方法:用OX-LDL刺激大鼠腹腔巨噬细胞,ELISA测定上清液中IL-1浓度鉴定巨噬细胞活化程度;用普通培养皿和细胞共培养皿分别将活化巨噬细胞上清液和活化巨噬细胞与大鼠肾小球系膜细胞共培养;用MTT法和流式细胞检测细胞周期测定细胞增殖.结果:OX-LDL刺激后大鼠腹腔巨噬细胞上清液中IL-1浓度明显升高;无论是活化的巨噬细胞还是其上清液均能明显促进系膜细胞增殖,但以共培养组最为显著.结论:在细胞共培养状态下由于脂质诱导活化的巨噬细胞及其上清液可能通过促进系膜细胞增殖导致肾脏损伤.     

三七皂苷改善狼疮肾炎小鼠激素耐药状态及脂代谢紊乱的作用研究

目的探讨三七皂苷改善狼疮肾炎小鼠激素耐药状态及脂代谢紊乱的作用机制。方法36只狼疮肾炎小鼠分成6组（每组6只）：狼疮肾炎小鼠（A组）、激素耐药模型（B组）、尾静脉注射沉默信息调节因子（SIRT）1-siRNA（C组）、尾静脉注射SIRT1-siRNA阴性对照（D组）、腹腔注射低剂量三七皂苷（E组）、腹腔注射高剂量三七皂苷（F组）,后5组先利用甲强龙灌胃法建立激素耐药模型,后4组再予相应药物干预;另取6只正常健康小鼠为G组。分别于实验前、中（第4周）、后（第8周）检测小鼠尿糖水平;实验结束时取小鼠血样本检测生化指标,ELISA法检测小鼠血C反应蛋白（CRP）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）水平,流式细胞术检测腹主动脉内皮细胞凋亡率;采用免疫共沉淀检测过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ与SIRT1的相互作用。结果实验第4、8周B组小鼠尿糖水平较G组明显升高（均P＜0.05）,C、E、F组小鼠尿糖水平也有一定程度的升高（均P＜0.05）。A、B组小鼠血肌酐（Scr）水平较G组明显升高（均P＜0.05）,C、E、F组较A、B组均明显降低（均P＜0.05）。A、B、C、D、F组小鼠血脂水平较G组均明显升高（均P＜0.05）,且以A、B组升高最为明显（均P＜0.05）。G组小鼠CRP水平较其余6组均明显降低（均P＜0.05）,C、E、F组较A、B组均明显降低（均P＜0.05）。G组小鼠腹主动脉内皮细胞不表现为凋亡,而A、B、D组小鼠腹主动脉内皮细胞凋亡率较高（均P＜0.05）。C、E、F组小鼠肝组织PPARγmRNA表达较A、B组均明显升高（均P＜0.05）,SIRT1mRNA表达均明显降低（均P＜0.05）。PPARγ、SIRT1免疫共沉淀结果提示存在PPARγ-SIRT1反馈环路。结论三七皂苷能调控PPARγ-SIRT1反馈环路,从而起到改善狼疮肾炎激素耐药状态和脂代谢紊乱的双重效应。     

茶多酚对链脲菌素诱导糖尿病大鼠肾损伤的防治作用

目的 :研究茶多酚对糖尿病 (DM)大鼠肾损伤的防治作用。方法 :采用链脲菌素 (STZ)腹腔注射致大鼠 DM模型 ,通过茶多酚及苯那普利治疗 ,对比观察尿蛋白排泄 ,内生肌酐清除率 (Ccr) ,血、尿内皮素- 1 (ET- 1 ) ,肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)及肾病理。结果 :茶多酚有类似苯那普利减轻 DM大鼠尿量增多及Ccr增高的幅度 (P<0 .0 0 1 ) ,减少尿蛋白排泄 (P<0 .0 1 ) ,降低尿 ET- 1 (P<0 .0 1 )水平的作用 ,并能降低DM大鼠血甘油三脂水平。肾病理损害较模型组明显减轻 (P<0 .0 0 2 )。结论 :茶多酚对 STZ诱导 DM大鼠肾损伤具有防治作用     

IgG亚型在鉴别膜性肾病病因中的意义

IgG亚型分4类,生物学活性各不相同,参与免疫反应的途径亦不同.部分学者已证实IgG1和IgC3主要通过,Th1细胞分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-β发挥细胞毒作用;而IgG4主要通过Th2系统激活B细胞参与免疫反应[1].膜性肾病(MN)按病因分两类,明确者为继发性MN,未明确者均归为特发性MN(IMN).     

狼疮性肾炎复发风险的中西医结合预测研究

目的分析狼疮性肾炎(LN)患者中医证候积分、常规实验室指标以及尿血管细胞黏附因子-1(VCAM-1)、尿骨膜蛋白(Periostin)水平,寻找早期预测复发的风险因素。方法纳入在浙江省立同德医院门诊及病房的LN患者60例,其中30例处于活动期(设为活动组),30例处于缓解期(设为非活动组)。同时纳入20名健康志愿者作为对照组。对30例非活动组患者继续进行为期2年的随访观察,以8周为1次随访周期。记录中医证候积分、系统性红斑狼疮疾病活动度积分(SLEDAI)、英国狼疮评定组(BILAG)积分,ELISA法检测尿VCAM-1及尿Periostin水平,相关性检验采用Spearman相关性分析,根据是否出现肾脏活动绘制ROC曲线,分析VCAM-1和Periostin对肾脏复发的诊断效能,并找出其截断值。结果 (1)活动组患者尿VCAM-1及尿Periostin水平均高于非活动组(P0.01),且非活动组高于对照组(P0.01)。(2)尿VCAM-1与尿RBC、24 h尿蛋白定量、SLEDAI、BILAG积分、中医证候积分、ANA滴度呈正相关(P0.05),与血ALB呈负相关(P0.01)。尿Periostin与24 h尿蛋白定量、SCr、SLEDAI积分、BILAG积分及中医证候积分呈正相关(P0.05),与血ALB呈负相关(P0.01)。(3)根据尿VCAM-1的ROC曲线,其诊断狼疮肾炎疾病活动的特异性66.7%,敏感性96.7%。根据尿Periostin的ROC曲线,特异性36.7%,敏感性96.7%。(4)30例非活动组患者2年出现临床复发共13例(43.3%),临床复发前16、8周,尿VCAM-1及尿Periostin阳性比例明显高于未复发患者(P0.05,P0.01)。存在风湿内扰证候的患者更易出现肾脏疾病复发(P0.01)。维持期服用羟氯喹及采用中西医结合治疗的患者更不易出现肾性复发(P0.05)。结论尿VCAM-1及尿Periostin与狼疮肾炎疾病活动度密切相关并可早期预示LN肾性复发。风湿内扰证候与肾脏疾病复发密切相关。维持期服用羟氯喹及中药对预防复发具有一定作用。