防己黄芪汤对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β1、BMP-7的影响

目的：研究防己黄芪汤对肾组织转化生长因子β1（TGF-β1）、骨形态发生蛋白-7（BMP-7）影响,进一步探讨其祛风化湿的作用机制。方法：采用大鼠单侧输尿管结扎（UUO）模型,予防己黄芪汤低、中、高剂量干预,设蒙诺对照组。肾组织切片染色观察病理,免疫组织化学方法、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β1、BMP-7蛋白及基因表达水平。结果：防己黄芪汤干预组大鼠的肾间质纤维化有所改善,与模型组比较,其肾组织TGF-β1表达下降、BMP-7表达上调。结论：防己黄芪汤下调UUO大鼠肾组织TGF-β1、上调BMP-7的表达,可能是其改善肾间质纤维化、发挥祛风化湿作用的机制之一。     

尿转化生长因子-β1及Ⅳ型胶原与肾内微癥积的相关性研究

目的:通过无创检测方法早期发现肾内微型癥积.方法:对98例肾活检的患者进行中医辨证分型:检测血/尿TGF-β1、尿ColⅣ、Scr、Ccr、24 h尿蛋白排泄;时肾组织运用CMIAS计算机病理图像分析系统作半定量测定;观察尿TGF一岛、ColIV水平,与肾硬化程度、中医辨证间的相关性.结果:(1)肾病患者尿TGF-β1、ColⅣ明显高于健康人(P<0.01).(2)尿TGF-β1、COlⅣ与肾小球基质基底膜面密度、肾间质纤维化程度、间质浸润细胞数呈正相关(P<0.05),与尿ColⅣ呈负相关(P<0.05).随着硬化程度加重尿TGF-β1、ColⅣ水平逐级增高.(3)尿TGF-β1、COlⅣ分别与Scr正相关,与Ccr负相关(P<0.01);与血TGF-β1、24 h尿蛋白定量无关.(4)在轻度肾硬化组,Scr和Ccr尚正常时尿TGF-β1、ColⅣ已高于正常组(P<0.01),尿ColⅣ敏感程度要高于尿TGF-β1和Ccr.(5)98例肾脏病患者的中医辨证以脾肾气虚型为主,占66.3%,以传统"四诊"辩为兼瘀血证者仅占8例(8.16%),肾硬化均属于重度,肾功能已减退,尿TGF-βColⅣ水平显著高于无瘀血证者.结论:尿TGF-β1、ColⅣ能早于Scr和Ccr的异常反映肾硬化及硬化程度.不受血TGF-β1和24 h尿蛋白定量的影响,可以作为监测肾硬化及其进展的一项无创性早期标志性指标,以尿ColⅣ更为敏感;同时揭示肾微癥积的病因为正虚邪郁,中医传统的宏观辨证加上微观辨证可明显提高辨证的准确性,尿TGF-β1、ColⅣ可以作为中医微观辨证的一项量化指标早期诊断肾内微癥积,监测病情的动态变化,指导早期应用消癥散积中药防治肾硬化.     

防己黄芪汤对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及足细胞病变的影响

目的：探讨防己黄芪汤对蛋白尿及其发生原因——足细胞病变的影响。方法：采用阿霉素肾病大鼠造成肾病综合征模型。以防己黄芪汤、2倍剂量防已黄芪汤、防已黄芪去甘草汤灌胃。于14d、28d、42d测24h尿蛋白定量;实验42d取血、取肾,检测血生化,观察肾组织病理改变,免疫组织化学法、Western-blotting、RT-PCR检测肾组织nephrin、podoein蛋白及基因水平。结果：模型组大鼠蛋白尿明显增加,伴血Alb下降;与模型组比较,防己黄芪汤组大鼠尿蛋白定量在实验14d、28d、42d明显减少。2倍剂量防己黄芪汤组、防己黄芪去甘草汤组大鼠尿蛋白定量在42d明显减少。模型组大鼠nephrin蛋白表达上调,药物干预后表达明显下降;模型组podoein蛋白和基因表达下调,药物干预后表达明显增加。结论：防己黄芪汤明显改善阿霉素肾病大鼠蛋白尿,这可能与其对足细胞关键结构nephrin、podoein表达的调节有关。     

尿转化生长因子-β1及Ⅳ型胶原与肾内微型癥积的相关性研究

目的：通过无创检测方法早期发现肾内微型癥积。方法：对98例肾活检的患者进行中医辨证分型;检测血／尿TGF-β1、尿ColⅣ、Scr、Ccr、24h尿蛋白排泄;对肾组织运用CMIAS计算机病理图像分析系统作半定量测定;观察尿TGF-β1、ColⅣ水平,与肾硬化程度、中医辨证间的相关性。结果：（1）肾病患者尿TGF-β1、ColⅣ明显高于健康人（P〈0．01）。（2）尿TGF-β1、ColⅣ与肾小球基质基底膜面密度、肾间质纤维化程度、间质浸润细胞数呈正相关（P〈0．05）,与尿ColⅣ呈负相关（P〈0．05）。随着硬化程度加重尿TGF-β1、ColⅣ水平逐级增高。（3）尿TGF-β1、ColⅣ分别与Scr正相关,与Ccr负相关（p〈0．01）;与血TGF-β1、24h尿蛋白定量无关。（4）在轻度肾硬化组,Scr和Ccr尚正常时尿TGF-β1、ColⅣ已高于正常组（P〈0．01）,尿ColⅣ敏感程度要高于尿TGF-β1和Ccr。（5）98例肾脏病患者的中医辨证以脾肾气虚型为主,占66．3％,以传统“四诊”辨为兼瘀血证者仅占8例（8．16％）,肾硬化均属于重度,肾功能已减退,尿TGF-β1、ColⅣ水平显著高于无瘀血证者。结论：尿TGF-β1、ColⅣ能早于Scr和Ccr的异常反映肾硬化及硬化程度,不受血TGF-β1和24h尿蛋白定量的影响,可以作为监测肾硬化及其进展的一项无创性早期标志性指标,以尿ColⅣ更为敏感;同时揭示肾微癥积的病因为正虚邪郁,中医传统的宏观辨证加上微观辨证可明显提高辨证的准确性,尿TGF-β1、ColⅣ可以作为中医微观辨证的一项量化指标早期诊断肾内微癥积,监测病情的动态变化,指导早期应用消瘕散积中药防治肾硬化。     

葛根素对淋巴细胞P-糖蛋白表达的影响及降低激素耐药的作用

目的：探讨葛根素对淋巴细胞P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达的影响及降低糖皮质激素耐药的作用,为提高糖皮质激素耐药患者的临床疗效提供新的思路和方法。方法：取健康志愿者静脉血10ml,密度梯度离心法分离淋巴细胞,贴壁培养去除单核细胞。予小剂量甲基泼尼松龙（2μg/ml）诱导细胞耐药,用非细胞毒浓度（80μg/ml）的葛根素干预,MTT试验检测激素耐药倍数和葛根素逆转倍数,流式细胞术检测淋巴细胞P-gp和200μg/ml甲基泼尼松龙刺激24h后AnnexinⅤ。结果：小剂量甲基泼尼松龙刺激72h可诱导淋巴细胞P-gp显著升高,甲基泼尼松龙耐药倍数为2.45±0.42。葛根素干预可显著降低耐药细胞P-gp,使甲基泼尼松龙对细胞的半数抑制率IC50显著降低,对激素耐药的逆转倍数为1.55±0.30;葛根素干预可使甲基泼尼松龙诱导细胞的AnnexinⅤ显著增高。葛根素独立干预无显著诱导细胞凋亡作用。结论：葛根素干预可显著降低淋巴细胞糖皮质激素耐药性,显著增强激素诱导淋巴细胞凋亡的作用。葛根素显著下调P-gp表达的作用可能是其降低激素耐药的重要机制之一。     

葡萄糖对SVAREC细胞P-糖蛋白转运和表达的影响

目的探讨葡萄糖对内皮细胞SVAREC膜转运蛋白P-糖蛋白的底物转运和表达的影响。方法 1.用含10％胎牛血清的DMEM培养液将SVAREC细胞传入24孔板,等细胞贴壁后将细胞分成4组,分别换以下条件刺激,A组:低葡萄糖(5.5mmoL/L);B组:高葡萄糖(25mmol/L);c组:低葡萄糖(5.5mmol/L)+Verapamil(10~(-4)Mol);D组:高葡萄糖(25mmol/L)+Verapamil(10~(-4)/Mol);每组都同时用不同浓度的秋水仙碱(0;12.5;25;50ug/ml)刺激72小时,以MTT法测定细胞的耐受性。2.按上述方法将细胞传入培养皿中,待细胞贴壁后,分别换葡萄糖浓度为5.5mmol/L,25mmol/L和50mmol/L的DMEM培养液继续培养72小时,提取细胞膜蛋白,Westem-blot检测P-糖蛋白的蛋白表达。结果高糖处理的细胞对秋水仙碱(P-糖蛋白的转运底物)细胞毒的耐受性明显低于低糖处理的细胞,在秋水仙碱浓度为25ug/ml时,差异最为显著(P<0.01),Verapamil(P-糖蛋白转运的特异抑制剂)共处理的低糖组细胞对秋水仙碱的耐受性显著降低(秋水仙碱浓度为25ug/L时,P<0.01),而Verapamil处理后的高糖和低糖组细胞对秋水仙碱的耐受性无显著性差异。Westem-blot结果显示5.5mmol/L葡萄糖刺激的细胞P-糖蛋白蛋白表达明显高于25mmoL/L和50mmoL/L葡萄糖刺激的细胞,而25mmol/L和50mmol/L之间没有显著差异。结论高糖能够降低内皮细胞P-糖蛋白对其底物的转运和表达,增加其底物秋水仙碱在细胞中的积累,使细胞的耐受性下降。     

寡核苷酸微阵列法检测高血压患者血管紧张素转换酶基因多态性的临床应用

目的　了解血管紧张素转换酶(ACE)的单核苷酸多态性 (SNPs)与高血压的相关性。方法　制备一种基于PCR 序列特异寡核苷酸探针法 (PCR SSOP)原理的寡核苷酸阵列芯片,用于对ACE基因的多个SNPs位点(C5467T,A9596G,A11860G,intron16上 287bpI/D)的同步检测, 并采用该芯片测定了 50名健康者和 80例高血压患者ACE基因的多态性谱。结果　高血压患者ACE基因A11860G的基因型分布为(AA: 24;AG: 10;GG: 46),与健康者的基因型分布 (AA: 15;AG: 18;GG: 17)相比较差异有统计学意义 (χ2 = 11 39,P< 0 01);高血压患者ACE基因I/D的基因型分布为 (II: 37;ID: 12;DD:31),与健康者的基因型分布(II: 23;ID: 5;DD: 22 )相比较差异有统计学意义 (χ2 =12 87,P< 0 01);而C5467T、A9596G的基因型分布在两组人群中未见差异有统计学意义。结论　ACE基因A11860G和I/D一样可能与高血压发生、发展密切相关;ACE寡核苷酸基因芯片技术实现了对ACE基因的多个SNPs多态性位点的同步检测,方法简单、操作方便。     

HBV感染血清标记物与HBV-DNA定量结果分析

我国约有1.2亿慢性HBsAg携带者,每年约有30万人死于慢性乙型肝炎相关性疾病,且患者也是居高不下.临床对乙肝患者的检测手段也多种多样.其中最常用的是乙肝两对半和HBV-DNA定量检测.因乙肝两对半的检测方法有限,且其组合模式也多种多样,常导致临床诊断困难.而荧光定量PCR法检测HBV-DNA不仅准确度高,且定量的数据能反映体内乙肝病毒复制的程度,因此,我们对本院300例不同HBV感染模式的患者与HBV-DNA定量结果进行了对比分析.     

阿霉素肾病大鼠肾小管间质损害及益气血祛风湿方的干预作用

目的：探讨益气血祛风湿方对阿霉素肾病肾小管间质损伤的有效治疗作用,为临床应用提供实验室理论依据。方法：采用阿霉素一次性尾静脉注射诱导的肾病模型,造模2周后用益气血祛风湿方或黄芪当归水煎剂等干预治疗。实验于第6周末处死大鼠,留取肾脏。采用HE染色观察肾组织病理改变;RT-PCR测定肾组织中TGF-β1基因表达;采用免疫组化技术检测肾小管间质MCP-1、TGF-β1的蛋白表达。结果：肾脏病理结果显示,模型组大鼠肾小管上皮浊肿、严重的空泡变性;肾小管不同程度扩张;可见较多蛋白管型;肾间质出现小灶性～灶性炎细胞浸润和灶性纤维化。各治疗组大鼠肾小管扩张、浊肿及间质炎细胞浸润等病理改变均较模型组减轻,肾间质纤维化程度也显著低于模型组。模型组大鼠肾组织和小管间质TGF-β1表达均显著增多,MCP-1阳性表达也显著增加,各治疗组肾小管间质中的MCP-1、TGF-β1表达较模型组显著降低,益气血祛风湿方组作用显著优于芪归治疗组。结论：益气血祛风湿方可显著改善肾小管间质的炎症损伤和纤维化程度,机制可能与其显著降低肾小管间质炎症因子和促纤维化细胞因子表达的作用有关。     

大黄素对脂多糖所致肾脏炎症的抑制作用

目的探讨大黄素对脂多糖（LPS）诱导的肾小管上皮细胞（TECs）免疫炎症的抑制作用。方法原代培养的BALB/C小鼠肾小管上皮细胞,模型组用100 ng/mL的LPS诱导,干预组在LPS诱导的同时,分别用0.1、0.2、0.4μg/mL浓度的大黄素干预,于24 h后分别提取细胞总RNA及蛋白。用流式细胞术检测TEC TLR4膜蛋白水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测样受体（TLR）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白介素-6（IL-6）mRNA的表达。结果正常肾小管上皮细胞可见TLR4表达,用100 ng/mL LPS刺激后TLR4 mRNA的表达由（0.25±0.22）上调至（0.62±0.11）,且TNF-α、IL-6因子表达亦分别上调6.4倍和2.1倍,与正常组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。不同浓度大黄素干预后则TLR4、TNF-α、IL-6 mRNA表达较模型组下降2.0～5.7倍,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,下降程度与大黄素浓度相关,部分存在一定的量效依赖关系。结论大黄素能够下调LPS诱导的肾小管上皮细胞TLR4的表达,并减少下游炎症因子TNF-α及IL-6的激活,从而减轻肾脏局部免疫炎症反应、保护肾功能。