70株鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶基因型检测

目的调查和研究南京地区70株鲍曼不动杆菌耐药性及β内酰胺酶基因型。方法用KB法测定临床分离的70株鲍曼不动杆菌对5种抗生素的耐药性，采用PCR法检测β-内酰胺酶耐药基因型。结果70株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮／舒巴坦耐药率为7．1％，头孢吡肟和头孢他啶的耐药率分别为61．4％和64．3％，头孢唑啉和头孢呋肟的耐药率均在80．0％以上；有40株菌检测到TEM型β-内酰胺酶基因，且均对头孢吡肟等抗生素耐药，2株为GES型，1株是VEB型，未检出CARB、DHA和PER基因。结论南京地区鲍曼不动杆菌以TEM型为主，其对β-内酰胺类的高耐药率与TEM型基因有直接的关系。     

阿莫西林/克拉维酸钾(14:1)咀嚼片与分散片在健康人体的生物等效性

目的研究阿莫西林克拉维酸钾(14∶1)咀嚼片、分散片与普通片的生物等效性。方法用三制剂、三周期(周期间隔为5天)三交叉试验方法,18名健康男性志愿者分别口服受试或参比制剂1片(每片含阿莫西林600mg,克拉维酸钾42.9mg)。用微生物学方法测定血浆中药物浓度。结果咀嚼片、分散片及普通片的主要药动学参数分别为:阿莫西林AUC0-8h分别为(22.48±4.5),(22.16±3.79)和(22.51±4.31)mg·h·L-1;Cmax分别为(9.079±1.86),(8.822±1.84)和(8.6892±1.13)mg·L-1。克拉维酸钾的AUC0-8h分别为(1.11±0.455),(1.204±0.45)和(1.23±0.505)mg·h·L-1;Cmax分别为(0.553±0.260),(0.613±0.241)和(0.602±0.206)mg·L-1。结论咀嚼片、分散片与普通片具有生物等效性。     

利福平等6种抗结核药物的体外抗菌活性比较

了解和比较利福平等６种抗菌药物对结核分枝杆菌的体外抗菌活性,采用琼脂稀释法测定了单药和不同组合药物对临床分离的３０株结核分枝杆菌的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）。结果利福平（ＲＦＰ）、异烟肼（ＩＮＨ）、帕司烟肼（ＰＳＮ）、吡嗪酰胺（ＰＺＡ）、链霉素（ＳＭ）、左氧氟沙星（ＬＶＬＸ）的ＭＩＣ５０分别为２０、〈０．０６、〈０．０６、８、５、０．５ｍｌ／Ｌ,不同组合药物的ＭＩＣ值比单药均下降２～８倍。结论：依照药敏试验结果,选择敏感的化疗方案,是处理耐药菌株病例的最佳对策。     

重症监护病房下呼吸道感染铜绿假单胞菌耐药监测

铜绿假单胞菌(PA)是重症监护病房下呼吸道感染最常见的病原菌之一[1],中国重症监护病房病原菌耐药监测显示PA对亚胺培南(IPM)的耐药率由1994年的6%上升到2003年的22%[2].PA本身的耐药机制复杂,由于抗生素的广泛使用,导致临床上多种药物耐药菌呈逐年上升趋势,极大的限制了医生选择药物的范围.因此,了解地区性PA耐药情况是临床有效抗感染的较佳途径.我们就2004年1月～2007年12月南京医科大学第一附属医院ICU中的下呼吸道感染患者痰培养的PA进行耐药现状的分析.     

下呼吸道感染非发酵菌的流行情况和耐药现状

目的 总结我院2004年下呼吸道感染住院患者非发酵菌的流行情况及耐药现状。为临床合理应用抗菌药物提供指导依据。方法 收集2004年我院下呼吸道感染住院患者痰培养结果为非发酵菌的数据，用WHONET5软件统计分析。结果 2004年我院下呼吸道感染住院患者痰培养非重复阳性标本共1367份，革兰阴性菌684株；非发酵菌321株（占所有病原体的23．5％，占革兰阴性菌的47％），其中，铜绿假单胞菌152株，占47％；不动杆菌属共106株，占33％；嗜麦芽寡养单胞菌28株，占9％；洋葱假单胞菌17株，占5％。铜绿假单胞菌对哌拉西林／三唑巴坦敏感率最高．对亚胺培南、阿米卡星、头孢他啶尚敏感；不动杆菌属对亚胺培南、哌拉西林／三唑巴坦和头孢哌酮／舒巴坦较敏感；嗜麦芽寡养单胞菌、洋葱假单胞菌对左氧氟沙星、哌拉西林／三唑巴坦和头孢哌酮／舒巴坦较敏感。结论 下呼吸道感染病原体中非发酵菌占据越来越大的比例，减少医源性感染、合理选用抗菌药物对提高治愈率至关重要。     

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药性及耐药基因型分析

目的:了解南京地区鲍曼不动杆菌耐药特点及分析碳青霉烯酶、金属β-内酰胺酶基因型。方法:K-B法测定临床分离的73株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美洛培南的耐药性;PCR检测碳青霉烯酶(OXA)、金属β-内酰胺酶(IMP和VIM)耐药基因,并对OXA基因进行测序。结果:73株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美洛培南耐药率均为10.9%;8株耐药菌中3株是IMP型,2株是VIM型,4株是OXA型,其中有1株菌含有OXA及IMP两种基因型。4例OXA型标本经测序,在Genbank中进行同源性比对,均为OXA-23亚型。结论:目前南京地区鲍曼不动杆菌的耐药性与其携带OXA-23、IMP和VIM基因相关。     

Eu标记RT-PCR检测丙型肝炎病毒RNA

目的 采用一种新的铕螯合物BHHCT，制备高灵敏度荧光标记物，建立检测丙型肝炎病毒（HCV）RNA的方法。方法 采用柱层析纯化的方法抽提血清中HCV RNA。以5′端带有生物素的引物进行RT－PCR Tth酶一步法扩增，通过固定于微孔板上的捕获探针与带有生物素的PCR扩增产物杂交后，利用标记有铕的链霉亲合素与生物素的特异性结合，将铕连接到待测核酸上，在特定波长的激光光激发下发出荧光，进行检测。结果 铕标记检测法与酶标法的变异系数、敏感性、特异性分别为10．43％、100％，100％与16．25％，94％，100％。结论 Eu标记RT－PCR Tth酶一步法检测HCV RNA，具有敏感、特异、快速、重复性好、不受环境因素影响和无溴乙锭污染等优点，可望取代酶标法及电泳法。     

大肠埃希菌获得性耐药基因检测及指标聚类分析

目的 调查大肠埃希菌45种获得性耐药基因和7种可移动遗传元件遗传标记基因的存在状况,以及获得性耐药基因和可移动遗传元件遗传标记基因的相关性.方法 收集南京医科大学第一附属医院2006年3月-2008年10月患者尿液标本中分离的大肠埃希萄共60株,采用聚合酶链反应(PCR)法分析45种β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类获得性耐药基因和7种整合子、转座子、插入序列、接合性质粒遗传标记基因,并用指标聚类分析(SPSS法),分析β-内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类获得性耐药基因与整合子、转座子、插入序列、接合性质粒遗传标记基因的相关性.结果 60株大肠埃希菌共检测到10种获得性耐药基因(包括3种β-酰胺类获得性耐药基因、6种氨基糖苷类获得性耐药基因、1种喹诺酮类获得性耐药基因);且7种可移动遗传元件遗传标记基因均有检出,包括1种整合子基因遗传标记基因、4种转座子和插入序列基因遗传标记基因、两种接合性质粒遗传标记基因,其余35种基因均未检测到;SPSS法将上述阳性检出基因分成A和B两大簇群.结论 大肠埃希菌对抗菌药物的耐药表型与获得性耐药基因相关,且可移动遗传元件的水平转移使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播;获得性耐药基因与可移动遗传元件遗传标记基因的指标聚类分析显示,在A簇群中,aadA5与intⅠ 1、CTX-M-55与ISEcp1、TEM-1与IS26较为相关,并有可能位于携带traA、trbC性毛基因的接合性质粒上,在B簇群中,aac(6')-Ⅰb与Tn21较为相关.     

产CTX-M-55-like型β-内酰胺酶同时伴膜孔蛋白ompC基因新突变等多株大肠埃希菌新菌株的发现

目的:调查大肠埃希菌(Escherichia coli,ECO)尿液分离株中β-内酰胺酶和膜孔蛋白ompC基因的存在和变异情况。方法:收集南京医科大学第一附属医院2006年1月～2008年10月患者尿液标本中分离到的ECO菌共60株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析21种β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白ompC基因。结果:在60株ECO菌中,TEM基因阳性51株(85.0%),经测序比对均为TEM-1-like;OXA-1群基因阳性6株(10.0%),经测序比对均为OXA-30-like;CTX-M-1群基因阳性38株(63.3%),经测序比对均为CTX-M-55-like。膜孔蛋白ompC基因经测序比对60株中有6株(10.0%)无突变,其余54株均有突变(突变率90.0%),其中6株经BLASTn比对确认为新的突变类型。结论:产CTX-M-55-like型β-内酰胺酶和膜孔蛋白ompC基因是本组ECO菌对β-酰胺类抗菌药物产生耐药的重要原因。6株ompC基因新的突变类型中,3株为同时携带TEM-1-like、CTX-M-55-like基因的新菌株;2株为携带了TEM-1-like基因的新菌株;1株...     

基于PBL教学的临床微生物检验课程新型考核体系的构建与实践

近年来,PBL教学已逐步应用于医学教育。南京医科大学医学检验系自2007年起在临床微生物检验课程中进行了PBL教学的尝试和探索,并进一步建立了基于PBL教学的新型考核体系,从PBL教学考核、理论考核和实验考核三个方面多层次地考核学生的学习能力和学习效果。本文介绍了临床微生物检验课程中应用该新型考核体系的具体方法、应用体会,以及实施过程中存在的问题和思考。