结核分枝杆菌mRNA在利福平快速药敏试验中的初步应用

目的　建立一种Mycobacteriumtuberculosis(结核分枝杆菌 ,MTB)mRNA快速敏感的检测方法并初步探讨其在利福平快速药敏试验中的应用。方法　用超声粉碎和Tripure试剂提取MTB总RNA ,针对α抗原 85B的特定编码序列建立MTBmRNA的RT PCR检测方法 ;观察MTB在含 1、2、4 μg/ml利福平的液体培养基中生长时 ,85BmRNA的动态改变 ,确定快速检测利福平耐药菌株的最佳药物浓度和时间点 ,比较RT PCR和快速培养法对 2 0株临床分离菌株利福平耐药性检测的差异性。结果　 85BmRNA的RT PCR最低检测下限为 10 0 0个细菌。 85BmRNA的动态结果表明 ,在 4 μg/ml利福平中培养 2 4h为最佳药物浓度和时间点。RT PCR和快速培养法对 2 0株临床菌株利福平药敏试验检测结果无显著差异 (χ2 =0 .5 ,P >0 .0 5 ) ,但前者能显著缩短药敏检测周期。结论　检测结核分枝杆菌mRNA的RT PCR方法可望应用于利福平快速药敏试验     

流式细胞术快速鉴定ABO血型亚型

目的 建立流式细胞术快速鉴定ABO血型亚型的实验方法。方法 用荧光素(FITC)标记多人份人源抗-A、抗-B,与受检RBC上的相应抗原结合,利用流式细胞仪快速、特异地分辨每个细胞(生物颗粒)获得细胞的散点图,以RBC设定“门”,用Cell quest verl 2.2软件分析,对照管作“mark”,得测定管阳性细胞的百分率。结果 A型RBC其抗A-FITC百分率为97.40％±0.62％,抗B-FITC百分率为0.40％±0.15％;B型RBC其抗A-FITC百分率为0.42％±0.14％,抗B-FITC百分率为98.36％±0.55％。阴性细胞的x±s=0.43％±0.13％,阳性界值>0.85％(>x±3s)。11例ABO亚型FCM测定结果与血清学方法确认的结果完全一致。结论 流式细胞术鉴定ABO亚型的方法,较之常规的血清学方法,具有简便、快速、结果客观、重复性好之优点。     

对苯唑青霉素处于边缘敏感的金黄色葡萄球菌调查分析

对甲氧西林处于边缘敏感的金黄色葡萄球菌(borderline methicillin-susceptible sta phylococcus aureus:BSSA)国外已进行广泛的研究[1],国内未见报道.本文报道23株BSSA临床情况.     

南京地区鲍曼不动杆菌喹诺酮类药物耐药基因突变的研究

目的 调查南京地区鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药情况,并研究其耐药机制。方法 在南京地区的医院随机收集了73株鲍曼不动杆菌,历时9个月。定量肉汤稀释法测定菌株对左氧氟沙星、环丙沙星和加替沙星3种喹诺酮类药物的MIC,PCR扩增gyrA基因和parC基因并进行酶切分析,选取部分PCR扩增产物进行测序。结果 鲍曼不动杆菌对左氧氟沙星耐药率为39．7％（29／73）;对环丙沙星耐药率为76.7％（56／73）;对加替沙星耐药率为32．9％（24／73）。对3种喹诺酮类药物均耐药的有16株,占21．9％。PCR—RFLP显示,对gyrA基因,耐药株有80．4％（45／56）不能被Hinf Ⅰ酶切,敏感株100％（17／17）被Hinf Ⅰ酶切;对parC基因,耐药株73．2％（41／56）不能被Hinf Ⅰ酶切,敏感株有88.2％（15／17）被Hinf Ⅰ酶切。测序结果：耐药株中的gyrA和parC基因存在突变,敏感株中则不存在突变,并在耐药株中发现gyrA和parC基因新的点突变,Genbank号分别为DQ270238和DQ270239。结论 南京地区鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物耐药情况严重,其耐药与gyrA和parC基因突变有关。     

荧光定量PCR检测鼻咽部脱落细胞内EBV-DNA

目的 建立荧光定量PCR（FQ－PCR）检测鼻咽部脱落细胞中EBV－DNA的方法。方法 以患者鼻咽部脱落细胞内DNA作为样本，以EB病毒基因序列中EBNA1（核抗原1）基因片段作为扩增的靶DNA，同时从人β－珠蛋白DNA片段作为内参照，合成了两对引物，并设计了两个特异的荧光探针，优化了FQ－PCR反应体系，同时对这两个片段进行扩增，每一标本得到两个Ct值；CtE和Ctβ，得到单位细胞EB病毒的相对量。结果 临床标本29例中，阳性22例，阴性7例，临床资料证实阳性者全部为鼻咽癌（NPC），阴性者全部为非鼻咽癌。结论 建立的FQ－PCR检测鼻咽部脱落细胞中EBV－DNA的方法，能反映单位细胞病毒的复制情况，可用于NPC的筛查，并可能应用于该病的风险评估和疗效观察。     

下呼吸道感染产ESBLs肺炎克雷伯菌基因型分析

目的了解引起下呼吸道感染产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药性及ESBLS和AmpC基因型，指导临床合理用药。方法收集产ESBLs肺炎克雷伯菌36株，用纸片扩散法进行药敏性试验，表型筛选法检测出同时产AmpC酶的菌株，PCR法检测ESBLs和AmpC酶的基因型。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南全部敏感，对所测试的其他药物最小同程度耐约。36株产ESBLs肺炎克雷伯菌中，20株扩增出CTX—M—Ⅲ群基因，15株扩增出TEM基因，SHV和OXA基因各1株，ACT-1（MIR-1）和DHA-1（DHA-2）各4株，12株细菌同时携带2种以上的基因型。结论本院下呼吸道感染患营中分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌主要携带CTXM和TEM基因型，少数携带ACT、DHA、SHV和OXA基因型，可介导对口内酰胺类药物的耐药。本研究未对TEM和SHV基因型作进一步分析。     

Eu标记RT-PCR检测丙型肝炎病毒RNA

目的 采用一种新的铕螯合物BHHCT，制备高灵敏度荧光标记物，建立检测丙型肝炎病毒（HCV）RNA的方法。方法 采用柱层析纯化的方法抽提血清中HCV RNA。以5′端带有生物素的引物进行RT－PCR Tth酶一步法扩增，通过固定于微孔板上的捕获探针与带有生物素的PCR扩增产物杂交后，利用标记有铕的链霉亲合素与生物素的特异性结合，将铕连接到待测核酸上，在特定波长的激光光激发下发出荧光，进行检测。结果 铕标记检测法与酶标法的变异系数、敏感性、特异性分别为10．43％、100％，100％与16．25％，94％，100％。结论 Eu标记RT－PCR Tth酶一步法检测HCV RNA，具有敏感、特异、快速、重复性好、不受环境因素影响和无溴乙锭污染等优点，可望取代酶标法及电泳法。     

克林沙星在体内外的抗菌活性

目的：对克林沙星的抗菌活性进行研究。方法：克林沙星的最小抑菌浓度（ＭＩＣ）检测采用试管肉汤稀释法,其半数有效量（ＥＤ５０）的检测通过对感染小鼠的试验性治疗来实现。结果：克林沙星对嗜麦芽窄食单胞菌以外的全部实验菌的ＭＩＣ９０为０．０３～２．０ｍｇ．Ｌ＾－１,低于单次口服克林沙星２００ｍｇ在血浆中的峰浓度（２．５ｍｇ．Ｌ＾－１）;克林沙星的ＭＩＣ值为环丙沙星的１／８～１／２,ＥＤ５０为环丙沙星的１＝３     

伴有肝功能异常的肺结核的化学治疗

目的　临床常见肺结核伴有肝功能异常而导致治疗困难 ,为此探索选用肝毒性最小的化疗方案。方法　采用 2 [左旋氧氟沙星 (LOFX)·帕星肼 (PSNZ)·乙胺丁醇 (E)·链霉素 (S)或阿米卡星 (AMK) ]/12～ 16 [LOFX·PSNZ·E]方案治疗伴有肝功能异常的菌阳肺结核 2 0例 ,自身对照 ,动态观察痰菌、X线胸片及肝功能变化。结果　 2 0例皆较顺利地完成了预定疗程 ,肝功能好转或恢复正常 ,痰菌涂片均在 2个月内阴转 ,原来X线胸片所见显著好转 (12 /2 0 ) ,无恶化者 ,仅 1例残留空洞 ,痰菌培养仍阳性 ,该菌株对异烟肼 (H)、利福平 (R)、PSNZ皆耐药。结论　 (1)对处于乙型肝炎活动期或有乙型肝炎病史者选用抗结核药需要慎重。 (2 )以LOFX·PSNZ为主的治疗方案基本适用于伴有肝功能异常的肺结核     

多重耐药大肠埃希菌接合性质粒与转座子遗传标记

目的调查多重耐药大肠埃希菌中接合性质粒与转座子的分布状况。方法从患者尿液标本中分离多重耐药大肠埃希菌60株,采用聚合酶链反应(PCR)法分析接合性质粒遗传标记traAt、rbC和转座子遗传标记ISEcp1I、S26t、np513。结果 5种基因在60株多重耐药大肠埃希菌中均有检出,traAt、rbCI、SEcp1I、S26t、np513阳性率分别为81.7%(49/60)、70.0%(42/60)、76.7%(46/60)、83.3%(50/60)、38.3%(23/60)。有58株菌至少检出1种基因,各菌株基因阳性数1~5种不等,共可分为17种阳性基因模式。其中,15株菌同时检出5种基因,22株菌同时检出4种基因,12株菌同时检出3种基因,5株菌同时检出2种基因,4株菌仅检出1种基因。结论本组大肠埃希菌中接合性质粒与转座子的阳性率高,多重耐药的表型可能与携带接合性质粒和转座子、插入序列导致耐药基因高表达相关。耐药基因水平转移是导致医院感染病原菌耐药性快速传播的常见机制。