人Tim-3基因克隆及其转基因细胞的构建

目的克隆人Tim-3基因,并构建含有该目的基因的重组真核表达载体,获得稳定表达人Tim-3分子的L929基因转染细胞。方法采用RT-PCR方法从人外周血T淋巴细胞中克隆出Tim-3基因,通过双酶切（XhoI,Sa-lI）装入真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染L929细胞,72 h后加入G418进行筛选,挑选出能稳定表达Tim-3蛋白的L929细胞株。结果构建了用于表达的含Tim-3基因的重组真核表达载体,经脂质体转染L929细胞,继而经RT-PCR和流式细胞术表型检测,筛选出稳定表达人Tim-3蛋白的L929转基因细胞。结论构建了含人Tim-3基因重组真核表达载体和稳定表达人Tim-3蛋白的细胞株,为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。     

小鼠B7-H3增强体外脂多糖介导的单核细胞活化

目的利用已成功构建的小鼠B7-H3融合蛋白通过体外实验研究B7-H3对单核细胞活化及功能的调节作用。方法采用磁珠法从小鼠脾脏中分离得到CD11b＋单核细胞,经脂多糖活化后通过融合蛋白结合实验检测单核细胞表面B7-H3受体的表达;加入不同剂量小鼠B7-H3融合蛋白培养,ELISA法检测单核细胞IL-1β、TNF-α与IL-6的分泌,并通过吞噬实验分析其对单核细胞吞噬功能的影响。结果活化的小鼠单核细胞表面可能存在B7-H3的未知受体;与对照相比,小鼠B7-H3可以增加活化的单核细胞IL-1β、TNF-α与IL-6的分泌（均P〈0.01）,并增强单核细胞的吞噬能力。结论小鼠B7-H3分子在感染免疫中具有重要作用,可参与疾病的抗感染功能的发挥。     

老年原发性非小细胞肺癌患者外周血T细胞膜型和可溶性CD28的表达

Objective To explore the expression of membrane form of CD28 (mCD28) on T lymphoeytes and the serum level of soluble CD28 (sCD28) in elderly patients with primary non-small cell lung cancer (NSCLC) in order to investigate the relationship between age-related changes of CD28 and the development of NSCLC in elderly patients. Methods 63 elderly patients with NSCLC, 35 elderly patients with lung benign lesion, 30 elderly healthy donors, 30 young healthy donors, 20 young patients with lung benign lesion and 20 young patients with NSCLC were enrolled in this study. The mCD28 on T cells and the serum level of sCD28 were measured by four-color flow eytometric assay and enzyme linked immunosorbent respectively, and the relationship between CD28 and clinical characteristics of NSCLC was analysed Results The expression of mCD28 was decreased and the serum level of sCD28 was increased in elderly patients with NSCLC compared with the other groups (F= 184.25, P<0. 01 ; F= 365.40, P<0.01). The expression of mCD28 was significantly lower and the level of sCD28 was significantly higher in elderly healthy donors than those in young healthy donors and young patients with lung benign lesion (P<0. 05). There were no significantly statistical differences in expression of mCD28 and level of sCD28 between elderly healthy donors and elderly patients with lung benign lesion [(42.84±5.82)% vs. (46.09±-7.34)%, (39.38±6.02)μg/L vs. (35.84±5.02)μg/L, P>0. 05]. Logistic regression analysis showed that aging (OR=2. 432), down-regulation of mCD28 expression (OR=0. 876) and up-regulation of sCD28 level (OR= 1. 113) were the risk factors for lung cancer. In the elderly patients with NSCLC, there were significant differences in mCD28 expression and sCD28 level between stages Ⅲ-Ⅳ and stages Ⅰ-Ⅱ [(16. 51± 5.64)% vs. (24.41±8.24)%, (75.03±5.98) μg/L vs. (66.73±7.52)μg/L; t=4.497,4.794, both P <0. 01]. However, there were no significantly statistical differences among different pathological types (F=0. 609, 0. 302, both P > 0. 05). Conclusions The down-regulation of mCD28 expression and up-regulation of sCD28 level with advancing age play an important role in the oncogenesis and development of primary non-small cell lung cancer in the elderly patients.     

可溶性CD40L联合其他造血细胞生长因子体外扩增人脐血CD34+细胞

目的研究可溶性CD40L(sCD40L)对人脐血CD34 细胞体外扩增和集落形成的影响。方法用磁珠阳性分离纯化法分离脐血CD34 细胞;用造血干细胞体外悬浮培养、集落形成实验以及流式细胞仪检测等方法,观察应用sCD40L对脐血造血干细胞扩增、CD34 细胞增殖及造血集落形成的影响。结果sCD40L能显著增强干细胞因子(SCF)、白细胞介素3(IL-3)、促红细胞生成素(EPO)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对脐血干细胞总数和CD34 细胞的扩增作用,并能促进造血集落,尤其是粒细胞-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的形成。sCD40L联合其他造血细胞生长因子对脐血CD34 细胞的扩增作用在培养的第7d最显著,当sCD40L浓度为40μg/L时,CD34 细胞的扩增倍数达8.23±1.26。结论sCD40L与SCF、IL-3、EPO、GM-CSF联合应用,对人脐血造血干细胞的体外扩增更为有效。     

白细胞介素8在兔缺血再灌注脊髓损伤中的作用

目的 探讨兔缺血再灌注脊髓组织中白细胞介素8（IL-8）趋化诱导中性粒细胞（PMNL）的作用。方法 分非抗IL-8抗体组和抗IL-8抗体组，采用免疫组化和组织病理学方法，观察抗IL-8抗体使用前后再灌注脊髓组织中IL-8的表达及PMNL浸润情况。结果 再灌注12h，脊髓组织中IL-8呈强阳性表达并可见大量PMNL浸润，使用抗IL-8抗体后，组织中IL-8被清除，PMNL浸润明显减少。结论 缺血再灌注脊髓损伤中，IL-8可强烈地趋化诱导PMNI。在组织中的浸润，其在炎症反应引起的继发性损伤中发挥重要作用。     

不借助外科显微镜大鼠肾移植模型的建立

目的建立无外科显微镜下的大鼠肾移植模型。方法分别以Wistar大鼠和SD大鼠作为供受体。从腹主动脉原位灌注412肝素林格平衡液，移植时供体腔静脉与受体腔静脉、供肾动脉带有的腹主动脉瓣与受体腹主动脉行端侧吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱壁连续缝合。结果共完成68次肾脏移植手术，其中前期42次，主要是摸索手术方法和训练显微外科技术，总结围手术期处理经验。后期26次，手术时间约为2．5h。5只受鼠死亡，其余受鼠均存活超过2周，手术成功率为80．7％。结论该模型手术操作简单、便捷、直观，简化了显微外科技术的设备要求,可运用于移植相关研究。     

胃癌组织中B7-H3的表达及其与预后的关系

肿瘤免疫应答是由多种免疫细胞和分子参与并受到严格调控及制约的复杂生理过程,近年来越来越多的研究表明,一组细胞膜分子--共刺激分子（costimulatory mole-cules）,其调节性表达、相互作用及其信号传递在非常复杂的肿瘤免疫应答过程中起着极其重要的作用.B7家族作为惟一能从抗原递呈细胞（APC）单向传递信号至T细胞的共刺激分子[1],近几年已相继发现了B7RP-1（B7H、B7-H2）、B7-H1（PD-L1）、B7-DC（PD-L2）及B7-H3等新分子[2],从而使此家族的调节作用不断复杂化.B7-H3是新近克隆的B7家族成员,与其他B7家族分子有20%～27%的同源性[3],其研究才刚开始,在最新研究中发现,B7-H3能协同刺激CD4＋、CD8＋T细胞的增殖,使细胞毒T淋巴细胞（CTL）活性增加[4],被认为是一正性调控分子.B7-H3对胃癌细胞生物行为和胃癌预后的影响,目前国际上尚鲜有相关报道.     

人GL50转基因细胞的建立

ICOS/GL5 0是CD2 8/B7家族的一对新成员 ,GL5 0组成性表达在B细胞、巨噬细胞上。GL5 0 Ig能显著上调IL 4、IL 10、IFN γ等细胞因子的表达 ,但对IL 2的产生没有影响 ,ICOS/GL5 0主要在T细胞的效应阶段发挥重要的调节作用。为了进一步研究其功能 ,我们利用逆转录病毒载体系统有效介导了基因转移。将人扁桃体剪碎后获得细胞悬液 ,用Ficoll法分离外周血单个核细胞 ,用Trizol提取RNA。根据人GL5 0全长基因序列设计并合成相应引物 ,上游 5′ TAGAATTCATGCGGCTGGGCAGT ,下游 3′ CGGGATCCTCACGAGAGCAGAAGGA。…     

积雪草总苷对环磷酰胺致小鼠免疫功能低下的影响

目的 探讨积雪草总苷（TCA）对环磷酰胺（CTX）致小鼠免疫功能低下的影响。方法采用一次性腹腔注射CTX 100mg／kg制造小鼠免疫损伤模型，同时应用TCA24、12、6mg／kg 3个剂量灌胃10d进行预防性治疗，观察其对小鼠胸腺指数、脾脏指数、巨噬细胞吞噬百分率、血清溶血素水平等指标的影响。结果 TCA高剂量（24mg／kg）、中（12mg／kg）剂量对小鼠胸腺指数、吞噬百分率和血清溶血素水平有明显的增强作用，同时TCA高剂量对小鼠脾脏指数也有一定的保护作用。结论TCA对CTX致小鼠免疫功能低下有一定的预防作用。     

经颅多谱勒检测兔大脑中动脉微血栓栓子的研究

目的应用经颅多谱勒（TCD）动态检测兔血栓栓塞模型大脑中动脉（MCA）的微栓子信号（MES），观察栓子的负荷量与缺血性脑血管病（ICVD）发生的相关性。方法将实验动物随机分为3组，即A组含3—5个栓子，B组含6-10个栓子，C组为生理盐水对照组。采用自体动脉血微栓子建立兔局灶性脑缺血模型同时TCD监测MES。栓塞后6h进行磁共振成像（MRI）及兔脑组织病理观察。结果A、B组TCD均监测到MES；B组MRI的T1WI、T2WI及病理观察见梗死灶，而A组仅在弥散加权成像（DWI）见可疑小缺血灶。结论TCD实时、动态观察微栓子信号，能预测缺血性脑血管病发生的危险性，为临床及早干预治疗提供科学依据。