体内诱导耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌膜蛋白质组学研究

Objective To investigate the role of outer membrane protein in clinical isolated car-bapenem resistance Acinetobacter baumannii. Methods Carbapenem resistance and sensitive strains were collected from the same patient. After MIST and REP-PCR analysis, carbapenemases were detected by isoe-lectric focusing. Different expressed membrane proteins were identified by two-dimension electrophoresis and mass spectrometry analysis. We also used efflux pump inhibitor PAβN(Phe-Arg-β-naphthylamide) to con-firm the phenotype. Results Carbapenem resistance and sensitive strains were attributed to the same pat-tern. At positions of P17.6 and P19.0, two β-lactamases were expressed in two investigated strains, no cabapenemases were detected. Six differential expressed membrane proteins were identified, a 34 × 103 membrane protein that was confirmed by efflux pump inhibitor PAβN experiment (imiponem MIC decreased from far above 32 μg/ml to 8μ/ml) and OprD and CarO. Conclusion Up-regulation of exported protein accompanied with down-regulation of OprD and CarO other than carbaponemases are responsible for carbap-enem resistance in A. baumannii.     

伴抗中性粒细胞胞质抗体的感染性心内膜炎患者临床特点分析

目的 分析临床感染性心内膜炎(IE)抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)阳性和阴性患者的临床特点.方法 对39例确诊为IE的患者,采用ELISA法检测血清ANCA,根据检测结果将患者分为ANCA阳性组和阴性组.回顾性分析患者的临床特点(一般情况、易感因素、临床表现、实验室检测指标和受累瓣膜等),并比较两组患者各项指标的差异.结果 39例IE患者中,13例ANCA阳性,阳性率达33.3％,均为PR3-ANCA阳性;26例为ANCA阴性患者.37例患者为自然瓣膜心内膜炎,其中34例有器质性心脏病,3例无基础心脏疾病.ANCA阳性组和阳性组间各种易感因素发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).患者的主要临床表现包括贫血(66.7％)、脾脏肿大(38.5％)、肾病变(28.2％)、关节肿痛(23.1％)、下肢水肿(17.9％)等,其中ANCA阳性组患者下肢水肿发生率明显高于阴性组(38.5％ vs7.7％)(P＜0.05).实验室检测指标显示,所有患者出现C反应蛋白(CRP)水平升高现象,89.7％的患者红细胞沉降率(ESR)加快,66.7％的患者血红蛋白(Hb)水平下降,53.8％的患者出现蛋白尿,50.0％的患者出现血尿,但两组间各项指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).37例患者进行了血培养,其中15例(40.5％)血培养阳性,ANCA阳性组血培养阳性率高于阴性组(69.2％vs 25.0％)(P＜0.05).共分离出17株致病菌,其中14株为链球菌.ANCA阳性组3例患者死亡,其中2例被误诊为ANCA相关小血管炎(AAV);阴性组无死亡病例.结论 ANCA在IE中有一定的阳性率,临床上将IE误诊为AAV存在一定的比例.因此,IE伴ANCA阳性的现象应引起临床高度重视.     

肝移植患者术后感染细菌分布及耐药性比较

目的探讨肝移植术后感染的主要病原菌及与全院的耐药性比较。方法采用Phoenix-100全自动微生物鉴定/药敏系统鉴定病原菌,按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）的纸片扩散法进行耐药性、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）检测,再用WHONET5.1软件进行数据统计分析。结果革兰阳性球菌（表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和粪肠球菌）占前3位,用Fisher确切概率记算法肝移植病房的革兰阴性杆菌耐药率明显高于全院,ESBLs、MRS检出率为73.2%和76.1%。结论肝移植患者术后感染中革兰阳性球菌占优势;肝移植病房的革兰阴性杆菌耐药率明显高于全院;ESBLs、MRS检出率高,提示术后感染患者细菌的高耐药性。     

双纸片法检测葡萄球菌中可诱导的克林霉素耐药

目的了解我院葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药性及可诱导克林霉素耐药发生率。方法Kirby-Bauer法检测2004年5—7月我院268株葡萄球菌对14种抗菌药物的耐药性，双纸片法检测可诱导克林霉素耐药。结果替考拉宁和万古霉素抗菌活性最强，136株金黄色葡萄球菌中有124株为红霉素耐药，其中115株为持续性克林霉素耐药，7株为可诱导性克林霉素耐药。132株凝固酶阴性葡萄球菌中有106株为红霉素耐药，其中67株为持续性耐药，16株为可诱导性克林霉素耐药。结论临床微生物实验室须加强可诱导克林霉素耐药的检测，以指导临床合理使用抗生素。     

环丙沙星高耐淋病奈瑟球菌基因分析

目的了解淋病奈瑟球菌DNA旋转酶A亚单位（gyrA）和拓扑异构酶Ⅳ C亚单位（parC）基因突变与淋病奈瑟球菌耐氟喹诺酮类药物的关系。方法收集2002年9月-2003年8月临床分离淋病奈瑟球菌48株，用琼脂稀释法检测8种抗菌药物对其的MIC，并用Nitrocefin纸片检测B内酰胺酶，PCR检测37株环丙沙星高耐淋病奈瑟球菌喹诺酮耐药决定区（QRDR）相关gyrA和parC基因并进行DNA测序分析。结果细菌对青霉素、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、四环素、左氧氟沙星、环丙沙星和大观霉素耐药率分别为60．4％、0％、0％、0％、70．8％、50％、95．8％和0％。其中环丙沙星高耐菌株37袜（MIC≥4mg／I。），占77．1％。48株淋病奈瑟球菌中B内酰胺酶阳性有18株，阳性率37．5％。对37株环丙沙星高耐菌株进行gyrA和parCPCR检测均阳性，10株PCR产物（分别为gyrA基因和parC基因）进行DNA测序，均发现成单或双位点突变，突变率为90％。结论青霉素、四环素、环丙沙星已不能作为治疗淋病的常规用药。gyrA和parC基因突变在淋病奈瑟球菌对氟喹诺酮类药物耐药中起着重要作用。     

鲍曼不动杆菌多重耐药机制研究进展

鲍曼不动杆菌是医院感染重要条件致病菌。近年来,鲍曼不动杆菌感染日益增多,仅次于金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌,并且呈现多重耐药现象,已引起临床医生和微生物工作者的高度关注。鲍曼不动杆菌耐药机制包括染色体基因突变,外膜孔蛋白改变,药物主动外排系统和产生灭活酶等。细菌耐药基因通过接合性质粒、转座子、整合型噬菌体、整合子的水平传递等发生传递。我们就鲍曼不动杆菌多重耐药机制,尤其是整合子与鲍曼不动杆菌多重耐药性的有关研究作一详细综述。一、整合子与鲍曼不动杆菌的多重耐药性1.整合子的概念、结构、分类整合子-基因盒系统于…     

纸片药敏试验对铜绿假单胞菌β-内酰胺类耐药表型的分析

目的用纸片药敏试验分析仁济医院临床分离的铜绿假单胞菌对8-内酰胺类抗菌药物的耐药表型。方法根据Vedel建立的方法，采用8种药敏纸片的药敏试验结果对147株铜绿假单胞菌的B-内酰胺类抗菌药物耐药表型进行分析。结果147株铜绿假单胞菌有13种不同B-内酰胺类抗菌药物的耐药表型，仁济医院西部外科、风湿和肾脏等病区有3种以上的不同耐药表型存在。结论铜绿假单胞菌耐药机制复杂，Vedel所建立的表型分析方法可方便有效的分析铜绿假单胞菌临床分离株的B-内酰胺类抗菌药物耐药表型。     

检测常见酵母菌耐药性的纸片法和微量稀释法比较

目的用纸片法和微量稀释法检测痰液标本分离酵母菌的耐药性并比较两者符合率，试找出一种适用于临床实验室的简便方法。方法采用丹麦ROSCO公司抗真菌药敏纸片法检测痰液标本分离的86株常见酵母菌对5种抗真菌药物的敏感性，同时用法国生物梅里埃公司ATBFUNGUS2念珠菌药敏板条测定4种抗真菌药物的最小抑菌浓度，对结果进行分析。结果两性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑2种方法完全符合率分别为95．3％、95．3％和88．4％，未出现一种方法敏感而另一种方法耐药的严重错误现象；对86株痰液标本分离常见酵母菌的耐药性进行分析，两性霉素B、制霉菌素和氟胞嘧啶的敏感率高，分别为95．4％、98．8％、95．3％，伊曲康唑的耐药率最高（15．1％）。结论纸片法和微量稀释法相比有很好的一致性，且抗真菌药敏纸片种类多，便于随时根据临床所需增加单个药敏结果，易于在各临床实验室开展。酵母菌唑类抗真菌药物的耐药现象日益严重，应加强酵母菌的耐药性监测。     

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌基因的研究

目的了解碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌耐药性、同源性及产β-内酰胺酶基因型.方法收集我院和香港威尔斯亲王医院临床分离鲍曼不动杆菌共214株,用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MICs).用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和REP-PCR分析12株对碳青霉烯类耐药菌株基因同源性,等电聚焦电泳检测其β-内酰胺酶和聚合酶链反应(PCR)检测β-内酰胺酶基因.结果 214株鲍曼不动杆菌中有12株对替卡西林、哌拉西林、替卡西林/克拉维酸(MICs≥128 μg/mL)、头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮(MICs,32 ～＞64 μg/mL)、亚胺配南、美罗培南(MICs,8 ～＞64 μg/mL)和阿米卡星/舒巴坦(MICs,16 ～ 64 μg/mL)耐药,只有哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、利氟沙星和环丙沙星对12株鲍曼不动杆菌有50%以上的抑菌效果(MICs分别为64 ～＞128 μg/mL、8 ～ 32 μg/mL、0.12 ～ 8 μg/mL和0.5 ～ 64 μg/mL).PFGE分型9株菌株为A型,3株为B型,REP-PCR结果与PFGE结果一致.12株碳青霉烯类耐药菌株均携带pIs 5.8、6.9和7.2三种β-内酰胺酶和OXA-23基因,11株上海菌株中检测出PER-1型基因和3株菌株检测到TEM-相似基因.12株菌株中未能检测到OXA-24基因.结论本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致,该流行株呈多重耐药,11株菌株均产OXA-23型碳青霉烯酶和PER-1型β-内酰胺酶及部分产TEM-相似基因.     

Agilent2100分析仪在鲍曼不动杆菌同源性分析中的应用

目的Agilent2100分析仪在基因组外非编码重复序列片段的聚合酶链反应（REP-PCR）同源性分析中的应用并评估该系统。方法应用REP设计引物并进行PCR扩增,用Agilent2100分析仪DL7500 Labchip芯片进行产物分析。结果51株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌中,耐药菌株分为4大型别（A、B、C、D）,其中A型共48株,分别为A1型33株,A2型13株,A3型和A4型各1株;B、C、D型各1株;18株碳青霉烯类敏感菌株中,有2株与A1型别一致,其他菌株型别都不一致。结论基于REP-PCR的Agilent2100同源性分析具有快速、易于操作、高重复性和高分辨率、结果定量处理和多种形式输出等优点,可作为临床同源性分析鉴定和分型的一线工具。