齐多夫定血药浓度测定及药动学

目的:建立反相高效液相色谱法,研究齐多夫定在健康人体内的药动学。方法:Hypersil C18柱(5μm,4.6mm×200mm),流动相:甲醇-水(30∶70),检测波长:266nm。9名健康志愿者单剂量口服300mg齐多夫定胶囊后,体内血药浓度采用3P97程序统计方法处理。结果:在确定的色谱分离条件下,血浆样品中齐多夫定无杂质干扰,且峰面积与相应浓度之间呈良好的线性关系。人体药动学参数Cmax(2 045±582)μg.L-1,tmax(0.56±0.22)h,消除半衰期t1/2ke为(1.29±0.16)h,V/F为(196.1±59.5)L,AUC0-t为(3 365±914)μg.h.L-1,AUC0-∞为(3 506±923)μg.h.L-1。结论:本法操作简便快速,定量准确可靠,适用于齐多夫定的人体药动学研究。     

利拉鲁肽通过调节microRNA-375对胰岛细胞凋亡的影响

目的:观察利拉鲁肽通过微小RNA-375(microRNA-375,miR-375)对db/db小鼠胰岛细胞凋亡的影响,探讨其可能作用机制,为临床应用提供药效学依据。方法:20只8周龄雄性db/m小鼠为正常对照组,皮下注射等量的生理盐水。40只8周龄雄性db/db小鼠随机分为2组,每组20只:糖尿病对照组的db/db小鼠皮下注射等量生理盐水;利拉鲁肽组的db/db小鼠皮下注射利拉鲁肽300μg·kg~(-1)·d~(-1)。给药8周后,检测各组小鼠体重(BW)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,并进行腹腔注射葡萄糖耐量实验(IPGTT)和胰岛素耐量实验(ITT);苏木精-伊红(HE)染色检测胰岛组织病理学变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测胰岛凋亡情况;Western blot法检测胰岛凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平;实时荧光定量PCR检测胰岛miR-375的表达水平。小鼠胰岛β细胞系MIN-6分为对照组(等量溶媒孵育)、miRNA-375 mimic组和miRNA-375 mimic+利拉鲁肽组,MTT实验检测细胞活力,Western blot法检测各组细胞caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平。结果:整体实验中,与对照组相比,利拉鲁肽组BW、FBG、FINS、TC、TG及LDL-C含量明显降低(P0.05);胰岛数量较模型组增多,体积较大,细胞结构明显改善;胰岛细胞凋亡减少;利拉鲁肽组的Bcl-2表达明显增高,caspase-3和Bax的表达显著下降(P0.05);胰岛组织miR-375的水平显著降低(P0.01)。细胞实验中,经miRNA-375 mimic处理24 h后,MIN-6细胞活力显著降低,Bcl-2表达减少,而caspase-3和Bax的蛋白水平显著增加(P0.05),给予利拉鲁肽组治疗后,MIN-6细胞活力明显上升,Bcl-2表达明显增高,caspase-3和Bax的蛋白水平显著下降(P0.05)。结论:利拉鲁肽可以抑制糖尿病胰岛β细胞的凋亡,其机制可能与调控胰岛组织中miR-375的表达有关。     

miR-141过表达增强人食管癌细胞的放射敏感性

目的 研究miR-141对食管癌细胞放射敏感性的影响及可能的作用机制。方法 将miR-141 mimic或miR-对照转染到食管癌KYSE-150细胞中,分别使用qRT-PCR和Western blot技术检测miR-141和增殖相关蛋白Ki67、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。CCK-8,流式细胞术及克隆形成实验检测放射处理后细胞的放射敏感性变化。结果 随放射剂量的增加,食管癌细胞中miR-141表达逐渐降低（t=2.57~8.96,P<0.05）。miR-141过表达抑制了细胞的增殖和克隆形成能力,促进了KYSE-150细胞凋亡,使得放射敏感性增高（t=3.24,P<0.05）。此外,与对照组相比,miR-141过表达显著抑制KYSE-150细胞中的Ki67和Bcl-2蛋白表达（t=6.56、8.24,P<0.01）,并促进Bax蛋白表达（t=3.24,P<0.01）,进一步证实了miR-141增强食管癌细胞的放射敏感性。结论 miR-141通过调控细胞增殖和凋亡相关蛋白表达增强食管癌细胞的放射敏感性。     

细胞因子IL-33对肿瘤微环境的影响及其抗肿瘤作用

目的 探讨细胞因子IL-33对肿瘤微环境的影响及其抗肿瘤作用.方法 将70只小鼠分为对照组10只、干预组30只、模型组30只,其中干预组和模型组皮下接种H22细胞,造模饲养一周后干预组给予重组小鼠IL-33蛋白皮下注射,干预两周后比较小鼠肿瘤大小、血清IL-2、IL-4、IL-I0、IL-12p40、IFN-γ浓度、肿瘤微环境当中Th1型免疫应答以及瘤体OPN、TGF-β表达情况.结果 采用IL-33干预后,干预组小鼠肿瘤体积显著小于模型组,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比较,模型组IL-2、IL-12p40、IFN-γ显著降低(P＜0.05),IL-4显著升高(P＜0.05);干预组IL-2、IL-12p40、IFN-γ显著升高(P＜0.05),IL-4以及IL-10显著降低(P＜0.05);模型组与干预组各项血清指标比较差异有统计学意义(P＜0.05);干预组小鼠肿瘤肿瘤中浸润的CD45+免疫细胞百分比显著高于模型组小鼠(P＜0.05);干预组小鼠肿瘤肿瘤中浸润的CD45+免疫细胞百分比显著高于模型组小鼠(P＜0.05),且干预组小鼠肿瘤中CD8+T、NK细胞百分比均显著高于对照组(P＜0.05);干预组小鼠瘤体组织中OPN、TGF-β蛋白表达均较模型组有所降低.结论 细胞因子IL-33可明显抑制肿瘤的生长,调节肿瘤微环境中Th1/Th2免疫应答,且抑制肿瘤中TGF-β、OPN蛋白的表达,具有着潜的抗肿瘤作用,为肿瘤的免疫治疗提供了新的方向.     

RP-HPLC法测定强筋健骨片中马钱子碱和士的宁的含量

目的：建立强筋健骨片中马钱子碱和士的宁的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为ODSC18（250mm×4．6mm,5μm）;流动相为0．01mol·L-1庚烷磺酸钠与0．02mol·L-1磷酸二氢钾等量混合（用10％磷酸调节pH值为2．8）一乙腈（79：21）;流速1．0ml·min-1,检测波长260nm。结果：马钱子碱和士的宁分别在0．0126—0．1260,0．0155～0．1550mg·ml-1的进样浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系;相关系数分别为0．9997,0．9999,平均回收率分别为98．43％（RSD为0．58％,n=6）、99．32％（RSD为0．32％,n=6）。结论：本方法简便可行,灵敏度高,重复性好,可用于强筋健骨片的质量控制。     

注射用氨曲南与奥硝唑氯化钠注射液的配伍稳定性考察

目的：研究氨曲南与奥硝唑氯化钠注射液配伍的稳定性。方法：采用RP—HPLC测定6h内氨曲南和奥硝唑的含量,同时观察配伍液外观变化及监测PH值变化。结果：氨曲南与奥硝唑氯化钠注射液配伍后,氨曲南色谱峰出现肩峰,配伍液1小时即呈现颜色变化。结论：氨曲南与奥硝唑氯化钠注射液的配伍液稳定性差,不宜配伍使用。     

康艾注射液和苦参素注射液在大鼠体内的药代动力学

目的：研究康艾注射液（复方）和苦参素注射液（单方）中氧化苦参碱在大鼠体内的药代动力学,考察康艾注射液中多种成分对氧化苦参碱体内过程的影响。方法：SD大鼠尾静脉注射给药,给药剂量为200mg&#183;Kg^-1（按氧化苦参碱计）,心脏采血,采用高效液相色谱法测定血清中氧化苦参碱和其活性代谢物苦参碱的浓度。药-时数据采用3P97软件进行处理。结果：康艾注射液和苦参素注射液中氧化苦参碱及苦参碱在大鼠体内的药动学均符合二房室模型。     

青霉素过敏病人血清特异性IgE与IgG、IgG3、IgG4

目的：IgE抗体在青霉素过敏反应中的地位已得到公认,IgG抗体的作用也日益受到重视。IgG分为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4四种亚类。IgG与过敏反应的关系至今尚未明确,可能与其亚类有关。为探讨IgG及其亚类在青霉素过敏反应中的作用,分析与特异性IgE抗体的关系,以期为青霉索过敏反应的诊断及防治提供理论依据。方法：采用放射免疫吸附试验（RAST）检测青霉素过敏病人血清中8种抗原决定簇（BPO—PLL、BPA—PLL、PVO-PLL、PVA-PLL、APO—PLL、APA-PLL、AXO—PLL、AXA-PLL）特异性IgE抗体。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测青霉素过敏病人血清中8种特异性IgG、IgG3和IgG4抗体。结果：164例过敏病人中,IgG、IgG3和IgG4的阳性率分别为28．05％、13．39％、12．80％。其中,迟发过敏反应组的IgG3阳性率显著高于速发过敏反应组（P〈0．05）。皮试阴性组的IgG阳性率显著高于皮试阳性组（P〈0．01）,并且皮试阴性用药后出现过敏症状组的IgG阳性率显著高于皮试阳性同时出现过敏症状组（P〈0．05）。IgG在主要抗原决定簇中的阳性率显著高于次要抗原决定簇（P〈0．01）。     

慢性荨麻疹患者血清中特异性IgG抗体检测

1对象和方法 荨麻疹55（男33,女22）例均为门诊就诊患者,平均年龄48.5（12-70）岁。符合文献[1]诊断标准。正常对照组65（男33,女32）例;平均年龄46.3（12-53）岁,无荨麻疹、湿疹及其他过敏性疾病史。取受试者前臂静脉血5mL,离心分离血清,置于-30℃冰箱保存备用。实验方法：血清特异性IgG抗体的测定采用ELISA间接法,     

HPLC法测定仙乐雄胶囊中淫羊藿苷的含量

目的:建立仙乐雄胶囊中淫羊藿苷含量的测定方法.方法:采用HPLC法,ODS C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水(30:70)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长270 mm.结果:淫羊藿苷在(5.35-85.60)μg·ml-1的进样浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为98.06%(RSD=0.44%,n=6).结论:本方法操作简便、灵敏、准确,可用于仙乐雄胶囊的质量控制.