Rap2c基因真核表达质粒的构建与表达

目的：为了探讨Rap2c基因与肺癌发生的关系,克隆人Ras家族小G蛋白Rap2c的cDNA,构建其真核表达质粒并在人肺癌细胞株A549和H1299中表达。方法人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA,经逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）逆转录成cDNA,PCR扩增Rap2c,酶切后插入pcDNA3．1（＋）构建真核表达质粒 pcD-NA3．1（＋）-Rap2c,采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染A 549和H 1299细胞,Western blot 检测其目的基因表达。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3．1（＋）-Rap2c成功构建,Werstern blot 检测到 A549和H 1299细胞有相应蛋白表达。结论成功构建人Rap2c基因真核表达质粒,为后续研究奠定了基础。     

JCI体系中医疗设备风险管理的实践和探讨

本文介绍了JCI体系下医疗设备风险管理的过程,首先采用特定风险分析工具完成医疗器械的风险等级划分及风险等级分析。然后,根据风险分析结果进行风险管理计划的制定并进行实施。由医疗器械管理部门采集数据、实施监控,必要时实施医疗器械报废甚至召回。以实施的结果和经验来进一步完善该管理计划,促使风险管理计划的持续改进,逐步实现医疗器械“安全、有效”的管理目标。     

Meares检查法诊断价值的探讨

目的 探讨Ｍｅａｒｅｓ检查法诊断慢性前列腺炎的价值。方法 对７７例慢性前列腺炎患者用Ｍｅａｒｅｓ法行细菌定位，并于初段尿（ＶＢ１）前取尿道拭子Ⅰ、中段尿（ＶＢ２）后取尿道拭子Ⅱ行细菌培养。对其中４０例行经会阴前列腺空刺取前列液培养细菌。结果 拭子Ⅰ、Ⅱ细菌的符合率９６％，拭子Ⅱ、前列腺液细菌符合率８８％。用Ｍｅａｒｅｓ法不能避免细菌污染前列腺液，该法诊断价值值得怀疑。     

125I偶联反义核酸对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用

目的观察125I偶联Ki67基因反义核酸(ASODNs)对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用.方法合成ki67基因ASODNs,氯胺-T法125I偶联ASODNs(125I-ASODNs).BALB/c种系裸鼠接种人肾癌786-0细胞.125I-ASODNs治疗组12只瘤体注射125I-ASODNs 0.1 ml(7.4 MBq/L、10 nmol),ASODNs治疗组12只瘤体注射ASODNs 0.1 ml(10 nmol),连续4 d.治疗后第3、6、12 d每组分别处死小鼠4只,取瘤组织检测肿瘤体积,免疫组化、Western blot技术检测Ki67表达,免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡率.结果125I-ASODNs组治疗后3、6、12 d小鼠肿瘤体积分别为(51.8±13.7)、(76.1±22.9)、(636.9±73.8)mm3,与ASODNs处理组(70.3±18.9)、(185.7±37.7)、(868.9±128.2)mm3比较,差异有统计学意义(P<0.01);Ki67抗原表达率分别为(16.5±2.1)、(20.8±1.0)、(28.6±2.4)%,ASODNs组为(26.8±2.3)、(29.2±1)、(33.6±2.6)%,Ki67蛋白量比分别为(54.8±2.6)、(58.6±2.9)、(63.9±3.5)%,与ASODNs组(72.6±5.1)、(79.7±3.4)、(85.7±4.4)%比较差异有统计学意义(P<0.01);肿瘤细胞凋亡率分别为(22.6±2.0)、(24.9±2.0)、(27.7±2.2)%,与ASODNs组(15.1±1.6)、(17.8±1.9)、(18.3±2.3)%比较差异有统计学意义(P<0.01).结论125I-ASODNs比ASODNs具有更强的抑制裸鼠肾癌移植瘤生长及促进凋亡作用.     

Ki67基因短发夹状RNA表达载体对肾癌细胞生长的抑制作用

目的研究针对Ki67基因的短发夹状RNA(shRNA)表达载体pSilencer-Ki67对人肾癌细胞生长的抑制作用。方法将pSilencer-Ki67转染人肾癌786-0细胞,24、48、72、120、144 h后分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测Ki67 mRNA、蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,原位末端标记法检测细胞凋亡。结果pSilencer-Ki67转染后48 h 786-0细胞Ki67mRNA表达(34．1±1．7)%、蛋白表达(42．6±1．7)%降低最明显,与空质粒对照组[(97．7±0．9)%、(97．3±1．6)%]比较差异均有统计学意义(P＜0．01)。pSilencer-Ki67处理后48 h细胞增殖抑制率(76．7±3．2)%最高,72 h凋亡细胞阳性率(74．3±5．9)%最高,与空质粒对照组[(7．0±0．5)%、(8．4±1．1)%]比较差异有统计学意义(P＜0．01)。pSilencer-Ki67的这些作用可持续144 h。结论pSilencer-Ki67能有效、持续抑制人肾癌786-0细胞生长,有望成为肾癌基因治疗的有效工具。     

表达端粒酶逆转录酶siRNA的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用

Objective To investigate the antitumor effect of oncolytic adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene for renal cancer therapy. Methods Nude mice were divid-ed randomly into 4 groups (8 mice/group),and were treated by intratumoral injections of ZD55-hTERT ( an oncolytic adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene) ,ZD55-EGFP ( an on-colytic adenovirus) and Ad-hTERT (replication-defective adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene) with three consecutive daily at 7 × 108 pfu/day or treated with PBS as a control. The expression of E1A and hTERT, and apoptosis of tumor xenografts were assessed by immunohistochemi-cal technique at the 7th day after injections. The tumor volume was measured at the 50th day after injec-tions. Results The tumor volume in ZD55-hTERT treatment group ( 124.1±27.5) was significantly less than that in ZD-EGFP (499.8±77.1 ) and Ad-hTERT ( 609.0±102.5 ) treatment groups. The E 1A pos-itive expression in ZD55-hTERT treatment group was significantly higher than that in Ad-hTERT treatment group. The hTERT positive expression in ZD55-hTERT treatment group was significantly lower than that in Ad-hTERT treatment group. ZD55-hTERT treatment of tumor xenografts resulted in an increased apoptotie cell death as compared with ZD55-EGFP and Ad-hTERT treatment. Conclusion The antitumor effect of ZD55-hTERT was more potent than oneolytie adenovirus ZD55-EGFP and Ad-hTERT.     

阴囊温度升高与男性不育的关系

对２２例生育，４４例精索静脉曲张（ＶＣ）患者，１７例特发性无精子症（ＩＡ）患者行远红外阴囊测温，并对无精子者行睾丸活检。结果发现：（１）ＶＣ患者阴囊温度显著高于生育者（Ｐ〈０．００１）而低于ＩＡ（Ｐ〈０．００１）。（２）ＶＣ精液正常者阴囊温度与生育者无差异而显著低于ＶＣ精液异常者（Ｐ〈０．０１）。（３）ＩＡ与ＶＣ合并精子症阴囊温度无显著差异。（４）阴囊温度升高使生精细胞减少，精子成熟障碍，特别是Ｓ     

转染增殖细胞核抗原肽表位融合白细胞介素-18基因的树突状细胞对T细胞增殖的影响

目的 观察转染增殖细胞核抗原(PCNA)肽表位、白细胞介素(IL)-18融合基因的树突状细胞(DCs)对T淋巴细胞增殖的诱导作用.方法 实验分为DCs组、空载体组、PCNA肽表位基因转染组、PCNA肽表位融合IL-18基因转染组共4组,分别将空质粒(pIPES-EGFP)、PCNA肽表位质粒[pIPES-EGFP-PCNA(6)]和PCNA肽表位融合IL-18基因质粒[pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18]通过脂质体转染DCs.每组按照DCs∶T淋巴细胞1∶1、1∶10、1∶20、1∶40、1∶80的比例分为4个浓度梯度,将DCs与T淋巴细胞共培养.采用CCK-8法检测T细胞增殖.结果 各组DCs均能刺激T淋巴细胞增殖,DCs∶T为1∶10时,转染pIPES-EGFP-PCNA(6)/IL-18的DCs刺激指数为2.62,优于DCs组(1.70)、空载体组(1.78)和pIPES-EGFP-PCNA(6)组(1.93).结论 转染pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18的DCs刺激T淋巴细胞增殖的作用最强,DCs:T为1∶10时最佳.

Abstract：

Objective To investigate the proliferation activity of T lymphocytes induced by dendritic cells modified by proliferating cell nuclear antigen (PCNA)-Epitope and interleukin (IL)-18 genes.Methods The experiment was divided into four groups, including DCs group, empty vector group, PCNAEpitope transfection group and PCNA-Epitope plus IL-18 gene group, and every group was assigned to four EGFP), PCNA-Epitope plasmid [pIRES-EGFP-PCNA(6)] and plasmid loaded PCNA-Epitope and IL-18 gene [pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18] were transfected into peripheral blood-derived dendritic cells, then cocultured with T lymphocytes respectively. T lymphocytes proliferation was determined by CCK-8 assays.Results The index of stimulation of the pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18 group was 2. 62 when the ratio transfection group (1. 93). Conclusion DCs treated with the PCNA-Epitope and IL-18 gene could stimulate T lymphocytes proliferation more effectively,and the optimal rio of DCs:T was 1:10.     

表达抗G250人源性抗体腺病毒对肾癌细胞的影响

目的检测腺病毒Ad-G250表达的G250全长人源性抗体的生物学活性及其对肾癌细胞的影响。方法扩增纯化腺病毒Ad—G250、Ad—EGFP（对照病毒）。病毒感染LO-2细胞,ELISA法检测细胞培养液中抗体的表达量。收集病毒感染后的细胞上清液进行纯化,Westernblotting检测纯化抗体的相对分子质量及其与细胞表面G250抗原的结合能力。免疫组化法检测Ad—G250表达的抗体是否具有生物学活性。CCK-8法检测Ad—G250对肾癌Ketr-3及ACHN细胞增殖的影响。AnnexinV—PE／7-AAD法检测Ad—G250对‘肾癌Ketr-3及ACHN细胞凋亡的影响。结果病毒Ad—G250感染LO-2细胞后G250抗体的表达量随着感染天数的增加而增加。Westernblotting实验显示Ad—G250能够表达G250抗体的轻链和重链,电泳图上该抗体能使G250抗原阳性的Ketr-3和786-O细胞在相对分子质量58×10’附近出现反应条带,而G250抗原阴性的ACHN和HK-2细胞在相应位置无反应条带。细胞免疫组化实验显示Ketr-3细胞膜被染成棕黄色,而ACHN细胞未见着色。CCK-8实验结果显示,Ad—G250对Ketr-3细胞有抑制作用,而对ACHN细胞的抑制作用不明显;Ad—G250抑制Ketr-3细胞增殖存在浓度及时问依赖性。凋亡实验显示,Ad—G250诱导Ketr-3细胞凋亡作用和ACHN细胞相比差异具有统计学意义,Ad—G250诱导Kert-3凋亡作用和Ad—EGFP相比差异有统计学意义。结论腺病毒Ad—G250成功表达出具有生物学活性的人源性G250抗体,且Ad—G250可抑制表达G250抗原的肾癌细胞增殖,诱导其凋亡。     

血液透析数据集成采集技术的研究

研究血液透析机的内置和外置通讯设备,实现透析机系统数据集成采集,建立智能化血液透析信息系统,对于提高透析质量具有十分重要的意义。本研究实现的血液透析系统数据集成采集设备,可将透析机的各项参数实时传输到患者的透析记录中,并自动存贮数据,方便医务人员实时监测患者透析过程中的情况,免去手工记录数据的工作,从而提高工作效率。其硬件采用32位高速嵌入式处理器、大规模闪速存储技术和表面封装技术(SMT)工艺设计;软件采用实时操作系统Vmax构建应用平台,应用软件采用C语言编制,可实现与各种血液透析机数据同步的功能,并可通过专用网络向上位计算机实时传输透析机在治疗过程中的各种治疗数据和血液透析机的运行参数。实际应用表明,该血透数据集成采集技术具有成本相对较低、临床适用性好等特点,具有较好的应用前景。