含人p27基因的重组腺病毒的构建及鉴定

目的:构建并鉴定含有人p27基因和EGFP基因的重组腺病毒载体,并观察其表达.方法 利用腺病毒载体系统Adeno-X,通过质粒抽提、电泳、酶切、连接、转化等多种基因工程技术,构建重组腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP;酶切、PCR鉴定重组腺病毒质粒;利用293细胞包装重组腺病毒载体PAd-p27-EGFP,通过荧光倒置显微镜观察EGFP的表达.结果:经酶切和PCR鉴定,成功构建重组腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP,利用脂质体转染人293细胞后,转染腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP可见EGFP表达和细胞致病效应(CPE).结论:利用腺病毒载体系统Adeno-X成功构建含CMV启动子的Flag-p27和EGFP基因的腺病毒载体,为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功之间的关系,并为寻找慢性移植物失功的基因治疗的途径奠定基础.     

CD25单克隆抗体在临床肾移植中的应用

人源化CD25单克隆抗体（daclizumab,xenapax)和人-鼠嵌合型CD25单克隆抗体（Busilisimab,simuleel)是两种新型的免疫抑制剂，它能特异性的作用于激活的T细胞IL-2受体α链，通过竞争性的与IL-2受体结合，拮抗IL-2与其受体结合所介导的T细胞增殖。     

胰、肾同期联合移植治疗糖尿病合并尿毒症40例

目的 报告40例胰、肾同期移植(SPK)治疗糖尿病合并尿毒症的结果 及经验.方法 共40例糖尿病合并尿毒症病人接受SPK,平均年龄为(45.8±8.2)岁.供肾先植入左侧髂窝.供胰植入右下腹腔,移植胰动脉与右侧髂外动脉端侧吻合,移植胰静脉与右侧髂外静脉端侧吻合.其中胰液膀胱引流术式2例,改进的胰液空肠引流术式38例.移植肾平均冷血时间为(7.13士2.02)h,移植胰平均冷缺血时间为(9.95±2.01)h.术后早期采用皮质激素+霉酚酸酯+他克莫司(36例)/环孢素A(2例)+抗淋巴细胞球蛋白(ALG)或抗CD25抗体四联诱导治疗,以后改为三联维持.结果 受者、移植肾和移植胰6个月存活率均为97.5%,1年存活率均为94.8%,受者、移植胰和移植肾3年存活率分别为94.8%、84.3%和84.3%.39例停用胰岛素,平均停用胰岛素时间为(6.87士6.80)d,空腹血糖平均恢复正常时间为(13.68士9.05)d.术后3周口服糖糖耐量试验、胰岛素和C肽释放试验显示移植胰功能完全正常.血淀粉酶恢复正常时间平均为(10.24±7.72)d.肾功能延迟恢复(IX;F)8例,血肌酐恢复正常时间平均为(52.75±20.01)d,其余30例血肌酐恢复正常时间平均为(8.03±7.39)d.术后主要外科并发症为移植胰伤口感染、胰十二指肠一空肠出血和移植肾周出血,3例(7.9%)因并发症再次手术,未发生与胰液引流术式相关的并发症如胰漏、肠漏、腹腔脓肿及肠梗阻等.结论 (1)SPK是治疗糖尿病合并尿毒症的有效方法 ;(2)改进的胰液空肠引流术式更简化、安全,更符合生理.     

小鼠galectin-9可通过分泌形式诱导Tim-3~-T细胞凋亡

目的 构建小鼠galectin-9重组腺病毒pAd-gal-9,探讨galectin-9的真核表达定位以及galectin-9诱导T细胞凋亡与Tim-3表达的关系.方法 常规分子克隆方法 结合LR反应构建腺病毒重组质粒pAd/CMV/V5-DEST-gal-9,以Pac I线性化后,用脂质体2000体外转染293A细胞,8 d后反复冻融细胞3次收集含病毒上清,并以此上清感染293A细胞大量扩增病毒pAd-gal-9.CsCI密度梯度离心法纯化病毒,96孔板法梯度感染293A细胞测定病毒滴度,然后感染CHO细胞,用免疫组化、Western blot和流式细胞仪分析galectin-9的表达水平和定位;以新鲜培养的上清或固相化的细胞分别与外周淋巴结细胞进行培养,AnnexinV/PI法检测T细胞凋亡情况,对比凋亡细胞比例与Tim-3~+ T细胞的比例.结果 重组腺病毒构建及表达成功,免疫组化表明galectin-9在CHO胞质表达;Westernblot证实galectin-9表达;流式分析表明胞内染色组galectin-9平均荧光强度显著高于表面染色组,病毒感染CHO表面染色组与空白对照组galectin-9平均荧光强度无明显区别;新鲜培养的上清可以明显诱导T细胞发生凋亡,显著高于Tim-3~+ T细胞的比例.结论 重组腺病毒pAd-gal-9构建成功,体外感染pad-gal-9的CHO分泌galectin-9诱导T细胞凋亡可以不依赖Tim-3的表达.     

精神分裂症患者家庭功能和婚姻质量研究

目的 评估已婚精神分裂症患者家庭婚姻状况,探讨家庭婚姻质量与患者康复情况的关系。方法采用家庭功能评定（FAD）、Olson婚姻质量问卷（ENRICH）评估59例精神分裂症患者及其配偶的家庭婚姻情况。结果精神分裂症患者在沟通、角色、情感反应、情感介入、行为控制及总的家庭功能得分均明显高于常模（P＜0.001）,情感反应（P＜0.05）、情感介入（P＜0.01）、行为控制（P＜0.05）分量表得分在不同文化程度分组中差异存在统计学意义。女性患者（P＜0.01）及男性配偶（P＜0.001）性格相容性低于常模。个人与社会表现量表（PSP)得分与家庭功能中的角色（P＜0.05）、情感反应（P＜0.01）、情感介入（P＜0.05）的影响呈负相关。结论患者家庭功能在6个维度存在障碍。女性患者及其配偶婚姻质量较差。患者的社会功能亦与家庭婚姻状况关系密切,提高患者家庭婚姻质量也能改善社会功能,有利于疾病控制。     

CD8+CD28-NRP-1+ T细胞在肾移植手术后患者外周血中的比例变化及意义

用流式细胞仪分别检测不同功能状态下肾移植术后患者体内的CD8+CD28-NRP-1+ Ts细胞和CD8+CD28- Foxp3+ Ts细胞,通过比较两类细胞的阳性表达率初步探讨它们之间的表达关系和意义.选取正常健康人10例,移植肾功能稳定的长期存活者24例,慢性移植物肾病者20例,急性排斥者15例,取受试者外周静脉血,分离单个核细胞,利用流式细胞仪检测CD8+CD28-NRP-1+ Ts细胞和CD8+CD28- Foxp3+ Ts细胞在CD8+CD28-T细胞群中的比例.结果表明组间比较得出,CD8+CD28-NRP-1+ Ts细胞和CD8+CD28-Foxp3+ Ts细胞比例在四组之间均有统计学差异(P＜0.05).其中在长期存活组表达量最高,其CD8+CD28-NRP-1+ Ts细胞和CD8+CD28- Foxp3+ Ts的比例分别为16.15%±1.49%和11.90%±2.73%,其次为正常健康人(13.83%±2.38%、9.44%±2.03%),然后为慢性移植物肾病组(8.03%±2.67%、5.26%±0.65%),而急排组最低(3.34%±1.73%、2.36%±1.14%),并且四组间这两种细胞呈同一变化趋势且前者的变化幅度大于后者.组内比较显示,CD8+CD28-NRP-1+ Ts细胞比例均高于CD8+CD28- Foxp3+ Ts细胞(P＜0.05).CD8+CD28-NRP-1+ Ts细胞可以从整体水平上反映肾移植术后患者的免疫状态,它比CD8+CD28- Foxp3+ Ts细胞更能全面的反映术后患者的预后情况.     

X射线对体外培养星形胶质细胞增殖的影响及机制研究

目的：观察X射线照射对培养星形胶质细胞（AS）增殖的影响,为X射线的广泛应用提供理论依据。方法：将体外培养80%汇合的AS,在AS无血清培养基继续培养48h后分为对照组和放疗组,对照组更换含10%FBS的DMEM-F12培养基,放疗组更换含10%FBS的DMEM-F12培养基,并同时给与X射线照射,利用western印迹分析各组PCNA、p53、cyclinE的表达。结果：X射线照射后能降低S期细胞比率,呈剂量依赖性,但并不增加AS的凋亡率。通过对AS无血清培养48h后,大部分细胞周期同步于G0期,对照组更换培养基后12h出现PCNA、cyclinE表达水平增高;放疗组p53表达水平较对照组显著增高,PCNA、cyclinE表达水平较对照组显著降低。结论：X射线照射可以通过调控细胞周期有效抑制AS的增生。     

多系统萎缩的昼夜节律异常

正多系统萎缩(multiple system atrophy,MSA)是一种罕见的、致命的神经退行性疾病,成人发病,缓慢起病,逐渐进展。临床表现为自主神经功能障碍、帕金森综合征和小脑性共济失调等多个系统功能障碍的不同组合~([1])。近年来多个研究发现MSA患者在血压心率、尿量、皮质醇分泌、胃肌电以及睡眠等方面存在昼夜节律异常,这些昼夜节律异常可能对MSA临床症状特点的分析判断,对MSA发病机制的深入理解有所帮助。在此综述中,将简述MSA患者的昼夜节律异常。1.多系统萎缩机制多系统萎缩是一种特殊的神经胶质变性疾病,其神经病理     

器官移植的血栓性并发症

器官移植术后的血栓性并发症是造成移植物失功能和患者死亡的重要原因。如肝移植术后肝动脉血栓(HAT)的发生率目前已经小于5％，但由它导致的死亡率占了原位肝移植术后患者的55％，占需要再次移植患者的80％。欧洲器官移植中心的大样本统计：。肾移植的手术后血栓性并发症大约在     

Neuropilin-1在CD4+ CD25+ T细胞上的表达

目的 探讨neuropilin-1(NRPl)在外周血中CIM+ CD25+ T细胞上的表达以及意义.方法 收集肾移植术后长期存活、慢性移植物肾病和急性排斥患者以及健康成年人的外周血,分离外周血淋巴细胞,用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞中CD4+ CD25+ T细胞上NRPl和Foxp3的阳性细胞的百分比.结果 各组CD4+ CD25+ T细胞NRPl的表达率差异有统计学意义(P＜0.05);各组CD4+ CD25+ T细胞Foxp3的表达率差异亦有统计学意义(P＜0.05).长期存活组CD4+ CD25+ T细胞上NRP1和Foxp3表达率分别为19.6%±3.84%、50.19 ±3.90%,显著高于对照及慢性移植物肾病和急性排斥组(P＜0.05);急性排斥组的CD4+ CD25+ T细胞NRP1和Foxp3表达率最低4.64%±1.26%、17.24%±5.29%.各组CD4+ CD25+ T细胞NRP1表达变化趋势与Foxp3变化趋势相同.结论 NRP1在长期存活组的外周血淋巴细胞中CD4+ CD25+ T细胞的表达上调,在急性排斥组时表达下调,且其在各组的表达变化趋势与Foxp3的表达变化趋势是一致的,这就提示CD4+ CD25+ NRP1+ 细胞是一群调节性T细胞,即NRP1是CD4+ CD25+ Treg的一个重要的表面标志.