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目的 体外诱导非肥胖糖尿病(NOD)小鼠CD4+ CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的产生并检测其免疫抑制功能.探讨外源性白细胞介素(IL)-2在诱导方案中的作用.方法 分选NOD小鼠童贞T细胞(Naive T),利用Anti-CD3、Anti-CD28刺激,同时给予转化生长因子-β1(TGF-β1)和白细胞介素-2(IL-2),共同培养5 d,收获诱导性Treg(iTreg),经流式细胞仪检测其表型.利用体外T细胞增殖体系,对比NOD小鼠天然Treg(nTreg),评价iTreg的免疫抑制能力.将诱导方案中的IL-2撤除以观察其作用.结果 TGF-B1联合IL-2能诱导NOD小鼠Naive T转化为iTreg,较对照组有统计学意义[(41.33±3.21)%比(8.00±3.00)%,P《0.05].iTreg可有效抑制T细胞增殖,其能力与nTreg的差异元统计学意义[(40.33±1.03)%比(38.33±3.06),P》0.05].外源性IL-2有利于iTreg的产生[(41.33±3.21)%比(15.00±1.00)%,P《0.05].结论 TGF-β1联合IL-2可在体外诱导Naive T转化为具有免疫抑制功能的Treg. 相似文献
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目的 探究Galectin-9(即T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3 ligand,Tim-3L)的真核定位与功能,及其对同种异基因排斥反应的影响.方法 PCR扩增Galectin-9片段,插入到pEGFP-N1质粒,转染中国仓鼠卵巢癌细胞系(CHO)行G418筛选,分选增强型绿色荧光蛋白(EGFP)阳性细胞.免疫组化检测Galectin-9的表达,Alamar Blue法检测稳定转染Galectin-9的CHO细胞及其新鲜培养上清对脾细胞增殖的影响,ELISA检测IL-2水平.给予BALB/c→C57BL/6心脏移植受鼠Galectin-9蛋白100μg×7 d.结果 Galectin-9表达于细胞浆,稳定转染Galectin-9-EGFP的CHO细胞上清抑制淋巴细胞增殖和IL-2的产生.上述效应可被Tim-3-Fc融合蛋白逆转.Galectin-9干预的心脏移植物中位生存时间明显延长[(22.7±1.2)d,(7.2±0.4)d)].结论 真核细胞中Galectin-9可通过分泌形式负调节同种异基因免疫;Galectin-9有望成为新型的抗排斥药物. 相似文献
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目的:构建缝隙连接蛋白connexin 43(CX43)特异性shRNA重组腺病毒载体,为应用基因沉默技术从转录后水平进行基因治疗研究奠定基础。方法:合成CX43发夹样shRNA的DNA单链一对和对照单链scramble一对,退火后将其克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因的穿梭质粒pAd shRNA/H1,得到pAd shRNA/H1-CX43和pAd shRNA/H1-scramble。分别酶切及DNA测序鉴定后,经Pme I线性化后转化入BJ5187-AD-1感受态细菌,在细菌内进行同源重组构建含目的基因的重组腺病毒质粒载体。用Pac I酶切鉴定重组菌。将Pac I酶切重组的两种腺病毒质粒载体后,经脂质体转化293细胞进行包装得到重组的腺病毒颗粒,并通过293细胞绿色荧光表达反应重组腺病毒表达情况。将重组的腺病毒Ad-Cx43 shRNA和对照病毒Ad-scramble shRNA分别感染大鼠原代培养的星形胶质细胞,并检测星形胶质细胞CX43的表达。结果:证实穿梭质粒的以及重组腺病毒质粒均构建正确,腺病毒质粒转染293细胞后48 h即可见绿色荧光蛋白表达,10 d后全部细胞表达绿色荧光,并有半数细胞飘起,收获病毒感染培养星形胶质细胞后48 h,均有绿色荧光表达,经感染Ad-Cx43 shRNA的星形胶质细胞CX43的表达明显低于感染对照病毒Ad-scramble shRNA的星形胶质细胞。结论:成功构建表达大鼠CX43特异性发夹状shRNA的重组腺病毒载体,将为应用基因沉默技术研究CX43在神经系统疾病尤其是缺血性脑损伤中的作用提供依据。 相似文献
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目的 观察过继输注调节性T细胞(Treg)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠自发性糖尿病发生的影响.方法 分选NOD小鼠天然调节性T细胞(nTreg),并诱导Na(i)ve T细胞转化为CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(iTreg),分别输注予4周龄的雌性NOD小鼠,观察糖尿病的发生情况,并确定细胞输注后Treg在体内的分布、检测血清中TGF-β1、IL-10及IL-4的表达以探讨Treg的作用机制.结果 对照组小鼠13周龄时即100%自发性发生糖尿病,而输注iTreg和nTreg分别能延缓糖尿病的发生时间至24周龄和25周龄,与对照组比较差异有统计学意义(P>0.05).Treg细胞输注后主要分布在胸腺,iTreg在体内能促进TGF-β1、IL-10及IL-4表达的上调[血中浓度分别为(543.00±26.51)、(107.67±12.66)、(93.33±12.58)ng/L],与对照组比较差异有统计学意义[(60.67±15.82)、(20.67±6.03)、(30.67±5.51)ng/L,P<0.05].结论 在体外诱导生成的调节性T细胞可延缓NOD小鼠糖尿病的发生,其机制与上调具有免疫抑制效应的细胞因子相关. 相似文献
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目的编制适合中国精神分裂症患者的焦虑症状评估量表,并进行信度和效度检验。方法以29项精神分裂症患者中常见的焦虑症状作为初测量表,对上海市精神卫生中心的154例精神分裂症住院患者进行评估,间隔2周后对其中50例患者进行重测。使用项目分析及探索性因素分析初步建构精神分裂症焦虑症状评估量表,并进行验证性因子分析。使用Pearson相关系数计算各条目、各因子与总分的相关以及检验精神分裂症焦虑症状评估量表与HAMA和PANSS量表间的校标关联效度并检验重测信度。通过t检验对量表的区分效度进行检验。用组内相关法(intraclass correlations coefficient, ICC)计算评估者间一致性信度;Cronbach’s α系数计算内部一致性信度。结果精神分裂症焦虑症状评估量表包括20个条目,探索性因素分析得到表现和感知的焦虑、对周围环境的焦虑、神经症样症状、激越、躯体性焦虑5个因子,解释总方差的65.56%,验证性因子分析证实该模型(χ2/df=2.128,GFI=0.829,CFI=0.876,RMSEA=0.086)拟合度较好。各条目与总分的相关系数为0.33~0.81,各因素与量表总分的相关系数为0.54~0.91,均呈显著相关(P<0.01),具有较好的结构效度。量表总分与HAMA及其躯体性焦虑因子、精神性焦虑因子、PANSS量表焦虑抑郁因子均显著相关(P<0.01),具有较好的校标关联效度。无焦虑症状组和焦虑症状组在量表各维度上及总分上的差异均具有统计学意义(P<0.01),说明量表均有较好的区分效度。评定者间一致性系数为0.98(P<0.01);Cronbach’s α系数均>0.6,具有较好的内部一致性;间隔2周的重测相关系数在0.729~0.967(P<0.01),具有较好的重测信度。结论精神分裂症焦虑症状评估量表具有较好的信度和效度,可用于中国精神分裂症患者焦虑症状的筛查和评估。 相似文献
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目的构建并鉴定携带核转录因子KB(nuclearfactoκB,NF—κB)特异性启动子的Flagp27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFPp27,转染经H202干预的人脐静脉内皮细胞(humanumbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB—IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EGFP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。 相似文献
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目的:观察人工合成大麻素HU210对体外培养中脑腹侧被盖(VTA)区星形胶质细胞谷氨酸释放的影响,并探讨抑制星形胶质细胞谷氨酸释放的药物治疗途径。方法:体外培养大鼠VTA脑区星形胶质细胞,RT-PCR及免疫荧光染色检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及大麻素受体1(CB1R)的表达。将培养的星形胶质细胞分为4组:对照组(培养基中只加入0.2%DMSO),HU210组(培养基中加入3μM HU210),HU210+AM281组(培养基同时加入3μM HU210及3μM AM281)和HU210+Riluzole组(培养基同时加入3μM HU210及3μM Riluzole),各组4孔。干预30 min后,采用谷氨酸检测试剂盒观察各组星形胶质细胞培养基中谷氨酸浓度。再培养VTA脑区星形胶质细胞,分为对照组(培养基中只加入0.2%DMSO)和Riluzole组(培养基中加入3μM Riluzole),干预30 min后,利用Western Blot印迹分析Riluzole干预后谷氨酸转运体-1(GLT-1)表达水平的变化。结果:RT-PCR及免疫荧光染色显示,星形胶质细胞内有广泛CB1R的表达。与对照组比较,HU210组星形胶质细胞谷氨酸的释放显著增加(P<0.01),HU210+AM281组及HU210+Riluzol组星形胶质细胞谷氨酸的释放较HU210组均显著降低(P<0.01);且HU210+Riluzol组星形胶质细胞的GLT-1表达较对照组升高(P<0.05)。结论:HU210可能通过激活星形胶质细胞的CB1R促进星形胶质细胞释放谷氨酸。Riluzole可能通过升高星形胶质细胞的GLT-1的表达,逆转HU210所致的谷氨酸释放。 相似文献
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目的:构建并鉴定含小鼠CXCL12基因和EGFP基因的重组腺病毒载体,并观察其表达。方法:利用腺病毒载体系统Adeno-X,通过质粒抽提、电泳、酶切、连接、转化等基因工程技术,构建重组腺病毒质粒pAdeno-CXCL12-EGFP;酶切、PCR鉴定;利用293细胞包装pAdeno-CXCL12-EGFP,荧光倒置显微镜观察EGFP的表达。结果:成功构建重组腺病毒质粒pAdeno-CXCL12-EGFP,转染pAdeno-CXCL12-EGFP的293细胞内可见EGFP表达。结论:利用腺病毒载体系统Adeno-X成功构建含CMV启动子的CXCL12和EGFP基因的腺病毒载体。 相似文献
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目的:利用蛋白组学二维差异性凝胶电泳(2-D DIGE)和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)联合电喷射离子化质谱(ESI/MS)技术寻找慢性移植肾失功患者血清生物标志物.方法:血清样本分成4组,慢性移植物失功组(CGD组)、移植后长期肾功能稳定组(SRF组)、急性排斥组(AR组)和健康对照组(N组).血清样本经多重亲和排除柱去除高丰度蛋白处理后,使用2-D DIGE技术找到差异蛋白点.切下这些差异蛋白点,胰蛋白酶消化,经RP-HPLC-ESI/MS分析鉴定,在另一独立样本中对鉴定出的差异蛋白Galectin-7进行ELISA验证.结果:在CGD组患者血清中差异表达的蛋白共有39个,质谱鉴定出22个,包括栽脂蛋白A-I前体,补体C4-A前体,Galectin-7等.ELISA结果提示CGD组患者血清中Galectin-7的表达较SRF组和N组有明显增高.结论:找到的这些差异蛋白具有不同的生物功能,为大样本、多中心的验证奠定了基础.Galectin-7可能是CGD的血清标志物,并对CGD的发病机制和治疗策略提供新的思路. 相似文献
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目的:观察健脾化瘀解毒复方的临床疗效,探讨其对炎症因子及免疫屏障的影响。方法:选取2014年1月—2016年9月医院诊治的60例慢性复发型活动期或慢性持续型轻中度的溃疡性结肠炎患者,随机分为对照组30例和观察组30例,对照组给予美沙拉嗪颗粒4 g/d,口服,观察组予以健脾化瘀解毒复方口服2次/d,连续治疗3个月,比较两组治疗前后血沉(ESR)、血清降钙素原(PCT)、疾病活动指数(DAI)及肠镜下黏膜病变的变化,酶联免疫法(ELISA)检测血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)及黏膜地址素细胞黏附分子(MAd CAM-1)的水平。结果:治疗前两组患者ESR、PCT、DAI、肠镜下黏膜病变及血清中IL-6、IL-8、IL-10、MAd CAM-1无统计学差异(P0.05)。与治疗前相比,两组治疗后ESR、PCT、DAI显著降低(P0.01),血清中IL-6、IL-8、MAd CAM-1表达明显降低(P0.01,P0.05),而血清中IL-10表达显著升高(P0.01);与对照组相比,观察组ESR、DAI明显降低(P0.01,P0.05),血清中IL-6显著降低、IL-10显著升高均具有统计学差异(P0.05);且两组患者黏膜充血水肿、糜烂、溃疡均有显著好转(P0.01,P0.05),健脾化瘀解毒复方在改善黏膜充血水肿、糜烂方面较美沙拉嗪具有更明显优势(P0.05)。结论:健脾化瘀解毒复方具有明显的修复肠道黏膜、减轻肠道炎症的作用,其机制可能与调节肠道黏膜屏障,提高肠道局部免疫能力有关;在调节IL-6、IL-10平衡方面其作用优于美沙拉嗪。 相似文献