乌头霜霉病病原物分子检测方法的建立

目的:建立乌头霜霉病病原菌快速分子检测方法,为乌头种苗检疫及栽培环境土壤安全性评价提供依据。方法:使用真菌DNA提取试剂盒提取病原菌DNA,采用真菌核糖体内转录间隔区(ITS)通用引物ITS1/ITS4,对病原菌的r DNA-ITS区间序列进行扩增,将聚合酶链式反应(PCR)产物回收纯化并进行序列测定,并将测得的ITS序列同Gene Bank中搜索到的相关ITS序列进行比较,运用DNAMAN比对出特异序列片段,利用特异序列片段通过Primer Premier 5.0设计并筛选特异性引物,建立乌头霜霉病病原菌快速PCR检测方法。结果:从Primer Premier 5.0设计的8对引物中筛选出了灵敏度高、特异性强的引物对L1A/L1B,该引物能够从乌头霜霉病病原菌DNA扩增出670 bp的具有检测价值的明亮条带,利用该引物也能够检测出乌头种苗、成株以及栽培土壤是否存在乌头霜霉病原菌。结论:筛选出的引物对L1A/L1B能够快速、简便、有效地检测出乌头霜霉病病原菌,建立的方法能用于对乌头种苗霜霉病的提前检测或检疫。     

手部深度烧伤创面修复方法及愈合

目的探讨手部深度烧伤后,采取不同手术方法修复创面,针对手部深Ⅱ度至Ⅳ度创面,筛选出相应的手术方法。方法对85例不同原因手部深度烧伤患者,采用皮片移植、带蒂皮瓣移植及复合皮移植等方法修复创面,术后随访6个月到5年,观察近期疗效和远期疗效,从两方面进行评估分析几种手术方法的治疗效果。结果刃厚皮片移植优良率45．6％,刃厚皮片移植术后,存在不同程度的“爪形手”、瘢痕挛缩、关节畸形等。皮瓣移植优良率100％,术后功能较好,外观优良。中厚皮片移植、全厚皮片移植及复合皮移植效果接近,优良率为90％～94％。结论皮瓣移植是修复手部深度烧伤较好方法之一,中厚皮片移植、全厚皮片移植和复合皮移植,术后经过良好的康复锻炼,手部功能得到较好恢复,尽量避免使用刃厚皮片移植修复手部创面。     

携带低氧诱导因子1αmu 和人源化海肾绿色荧光蛋白双基因真核表达载体构建及其在HEK293A细胞中的表达

背景:低氧诱导因子1能够调控多种基因共同表达,在骨缺损部位可诱导成熟的血管生成,为各种细胞的成骨分化和成骨活动提供营养支持和代谢保证,促进骨愈合,但其真核表达载体的构建及表达却少见报道.目的:实验拟构建携带低氧诱导因子1αmu(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)目的蛋白和人源化海肾绿色荧光蛋白(human renilla reniformis green fluorescent protein, hrGFP)的双基因真核表达载体,并将其转染HEK293A细胞,观测其在细胞中的表达.方法:利用PCR技术定点突变目的基因供体质粒pCMV6-XL5-HIF1α携带的人HIF1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸以及去掉其终止密码子,之后在基因序列前后添加新的酶切位点Not Ⅰ和PuvⅠ,酶切、测序检测突变情况,将正确突变的HIF1αmu定向连入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-IRES-hrGFP-1中.经测序鉴定、Pme Ⅰ酶切线性化后转化BJ5183-AD-1电感受态细胞,通过hrGFP基因荧光表达检测转染情况.结果与结论:经基因测序证实,HIF-1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸均定点突变成丙氨酸,终止密码子成功去除.经酶切鉴定及测序证实,重组腺病毒表达载体构建成功.荧光显微镜下观察表明,感染重组腺病毒的HEK293A细胞内有大量绿色荧光表达证实通过Lipofectamine 2000途径可使得重组腺病毒载体成功转染HEK293A细胞.     

尖端赛多孢子菌引起骨髓移植患者局部感染1例

由于尖端赛多孢子菌（Scedosporium apiospermum）培养和鉴定难度大,发现该菌引起的感染病例较少,本文报道了国内首例急性髓性白血病患者行自体骨髓移植后由尖端赛多孢子菌所致左侧腹股沟感染。     

指动脉静脉化在手指末节离断再植的疗效分析

目的　探讨指动脉静脉化重建手指再植血液回流的方法和疗效。 方法　应用离断手指远断端非优势侧指动脉与近断端指掌侧静脉或指侧方静脉吻合治疗手指末节离断病人18例,其中指动脉与指掌侧静脉吻合11例,与指侧方静脉吻合7例。 结果　成活16例,坏死1例,部分坏死1例。 结论　指动脉静脉化为断指再植提供了重建静脉回流的一种有效方法。     

常氧条件下同时表达突变型低氧诱导因子1α目的蛋白和人源化绿色荧光蛋白报告分子腺病毒真核表达载体的构建

背景:低氧诱导因子1能够调控多种基因共同表达,在骨缺损部位可诱导生理功能完整的新血管生成.目的:构建能够同时表达突变型低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)目的蛋白和人源化绿色荧光蛋白(human renilla reniformis green fluorescent protein,hrGFP)报告分子的新型腺病毒真核细胞表达载体.方法:对目的基因供体质粒pCMV6-XL5-HIF1α携带的人低氧诱导因子1α基因进行测序和对其序列内部限制性内酶识别位点进行分析,利用PCR(poly-merase chain reaction,PCR)技术定点突变低氧诱导因子1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸,酶切、测序检测突变情况,将正确突变后的低氧诱导因子1α基因(突变mutagenesis,突变后的HIF-1α基因写作HIF-1αmu)定向连入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-IRES-hrGFP-1中.携带HIF-1αmu基因的重组腺病毒穿梭载体经测序鉴定、Pme I酶切线性化后转化BJ5183-AD-1电感受态细胞,利用细菌内同源重组机制将HIF-1αmu和人源化绿色荧光蛋白基因连同其顺势表达元件重组入腺病毒基因组质粒,通过Pac I酶切及测序鉴定获得重组体.结果与结论:经基因测序证实,HIF-1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸均定点突变成丙氨酸.经酶切鉴定及测序证实,重组腺病毒表达载体构建成功.结果表明,成功构建了新型重组腺病毒突变型真核细胞表达载体pAd-HIF1αmu-IRES-hrGFP-1.     

携带低氧诱导因子1α~（mu）和人源化海肾绿色荧光蛋白双基因真核表达载体构建及其在HEK293A细胞中的表达

背景：低氧诱导因子1能够调控多种基因共同表达,在骨缺损部位可诱导成熟的血管生成,为各种细胞的成骨分化和成骨活动提供营养支持和代谢保证,促进骨愈合,但其真核表达载体的构建及表达却少见报道。目的：实验拟构建携带低氧诱导因子1αmu（hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α）目的蛋白和人源化海肾绿色荧光蛋白（human renilla reniformis green fluorescent protein,hrGFP）的双基因真核表达载体,并将其转染HEK293A细胞,观测其在细胞中的表达。方法：利用PCR技术定点突变目的基因供体质粒pCMV6-XL5-HIF1α携带的人HIF1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸以及去掉其终止密码子,之后在基因序列前后添加新的酶切位点NotⅠ和PvuⅠ,酶切、测序检测突变情况,将正确突变的HIF1αmu定向连入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-IRES-hrGFP-1中。经测序鉴定、PmeⅠ酶切线性化后转化BJ5183-AD-1电感受态细胞,通过hrGFP基因荧光表达检测转染情况。结果与结论：经基因测序证实,HIF-1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸均定点突变成丙氨酸,终止密码子成功去除。经酶切鉴定及测序证实,重组腺病毒表达载体构建成功。荧光显微镜下观察表明,感染重组腺病毒的HEK293A细胞内有大量绿色荧光表达证实通过Lipofectamine 2000途径可使得重组腺病毒载体成功转染HEK293A细胞。     

体素内不相干运动成像对中老年直肠癌患者同步放化疗后骨髓抑制的评估价值

目的 探讨体素内不相干运动(IVIM)成像对中老年直肠癌患者同步放化疗后骨髓抑制的评估价值。方法 26例中老年局部进展期直肠癌患者按同步放化疗期间是否发生骨髓抑制分为正常组(15例)及骨髓抑制组(11例),分析两组间骨盆骨髓IVIM成像参数的差异。结果 26例患者同步放化疗期间骨髓抑制分级0级为15例(57.7%)、1级为6例(23.1%)、2级为3例(11.5%)、3级为2例(7.7%)。骨髓抑制组同步放化疗前的灌注分数(f值)低于正常组(P<0.05),而两组标准表观扩散系数、双指数纯扩散系数值和灌注系数值同步放化疗前、后比较差异均无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示，同步放化疗前f值预测患者骨髓抑制发生的AUC为0.82[95%CI(0.65～1.00)],当同步放化疗前f值为0.391时，预测骨髓抑制发生的灵敏度为80.00%,特异度为90.90%。结论 同步放化疗前f值对中老年人局部进展期直肠癌放化疗期间骨髓抑制发生有一定预测价值。     

荧光定量PCR法应用于脊髓性肌萎缩症携带者筛查的研究

目的 通过对比TaqMan探针荧光定量PCR法与临床广泛应用的MLPA法对脊髓性肌萎缩症的检测效果,探索荧光定量PCR法用于人群致病基因携带者筛查的可行性.方法 收集2018年10月—2021年5月就诊于深圳市龙岗区妇幼保健院和广东省生殖医院的脊髓性肌萎缩症临床疑似病例、携带者及健康者的外周血标本共34例,应用TaqM...     

基于特征性成分的肾石通颗粒中金钱草投料真实性考察

目的 建立肾石通颗粒中广金钱草的掺伪检测方法。方法 以常见混伪品广金钱草中夏佛塔苷为特征性成分，采用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-PDA）法进行筛查与含量测定，色谱柱为Symmetry C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（10∶90,V/V），流速为1.0 mL/min，检测波长为340 nm，柱温为35℃。采用液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）法进行确证试验，色谱柱为Ultimate LP-C18柱（100 mm×2.1 mm,1.8μm），流动相为乙腈-10 mmol/L乙酸铵溶液（梯度洗脱），流速为0.2 mL/min，柱温为30℃；电喷雾负离子多反应监测模式，毛细管电压为3.5 kV，鞘气流速为11 L/min，辅助气流速为7 L/min，脱溶剂温度为300℃，离子传输管温度为350℃，以质荷比（m/z）563.0→353.0和563.0→383.0为特征离子对，碰撞能量为38 V和32 V。结果 夏佛塔苷进样量在0.030 8～0.615 5μg范围内与峰面积积分值线性关系良好（R2=0.999 4,n=6）；精密...