乌头叶面细菌、真菌DGGE分析条件的建立与优化

目的:筛选并优化适用于分析乌头叶面细菌、真菌多样性的变性梯度凝胶电泳(DGGE)实验条件。方法:采用Touch Down-PCR技术扩增乌头叶面细菌16 S r DNA V3区域和真菌18 S r DNA~5.8 S r DNA序列,利用该扩增产物对乌头叶面细菌、真菌DGGE电泳条件进行优化。采用DGGE垂直电泳法筛选凝胶变性梯度,时间间隔法优化电泳时间。结果:乌头叶面细菌DGGE最佳分析条件为变性剂梯度30%~65%(Gel 10%),电泳温度60℃,电压120 V,电泳时间7 h。乌头叶面真菌DGGE最佳分析条件为变性剂梯度25%~45%(Gel 8%),电泳温度60℃,电压120 V,电泳时间10 h。结论:利用以上优化条件能有效分离乌头叶面细菌16 S r DNA V3区及真菌18 S r DNA~5.8 S r DNA序列,为乌头叶面细菌,真菌的群落结构PCR-DGGE分析提供可靠的技术支撑。     

米花岭隧道排水对周围环境影响的调查

目的了解南昆铁路米花岭隧道排水对周围环境的影响,解决人畜饮用水安全等相关问题。方法对米花岭隧道周围环境进行实地调查,按国家标准方法对水质、土壤进行检测分析。结果隧道排水呈碱性,水中铁、锰含量超出国家标准,人畜饮水安全受到威胁;农田土壤呈碱性,农作物严重减产。结论隧道排水对周围环境存在不同程度的影响。     

一起混合型流感暴发流行的调查

１９９８年２月中旬至３月上旬，广西铁路百色地区某小学流感暴发流行，发病均为学生，罹患率为１５．６９％，以Ｈ１Ｎ１和Ｈ３Ｎ２两种亚型为主，且存在着混合感染，Ｈ３Ｎ２所引起的症状及体征较重，且易引发肺炎，支气管炎和心肌炎等并发症。     

乌头霜霉病病原菌rDNA-ITS和28S rDNA D1/D2区序列分析

目的明确四川江油地区栽培乌头霜霉病病原菌乌头霜霉Peronospora aconiti rDNA-ITS和28 S rDNA D1/D2区序列,为病害诊断和防治提供理论基础。方法从病株收集病原菌分生孢子及菌丝,提取DNA,扩增rDNA-ITS和28 S rDNA D1/D2片段序列,进行测序分析,并构建邻接(neighbor-joining,NJ)发育树分析病原菌种类。结果检测出的病原菌rDNA-ITS序列与NCBI数据库中霜霉属P.pulveracea、P.aparines相似度为94%,28 S rDNA D1/D2区序列与霜霉属P.pulveracea、P.ficariae、P.bulbocapni相似度达97%。结论分子rDNA-ITS和28 S rDNA D1/D2区序列鉴定的结论和形态学鉴定的结论一致,乌头霜霉病病原菌为霜霉科霜霉属乌头霜霉Peronospora aconiti Yu,其rDNA-ITS和28 S rDNA D1/D2区序列可用于该病原物的鉴定。     

南宁铁路地区麻疹抗体监测及分析

南宁铁路地区一直采用国家规定注射二针的麻疹疫苗免疫接种程序,麻疹疫苗的覆盖率也一直保持在95%以上的较高水平.因而这几年来的发病率维持在很低水平,为预测和防止我地区麻疹流行和最终消除麻疹,我们于1998年6月对3～6岁的儿童进行抗体水平监测,现将监结果报告如下.     

流感甲3（H3N2）和甲1（H1N1）型的临床反应的研究

１９９８年２月中旬至３月上旬，广西铁路百色地区某小学发生流感暴发流行，经病毒分离证实为混合型流感暴发流行，发病以甲１（Ｈ１Ｎ１）和甲３（Ｈ３Ｎ２）为主［１］。为此我们对甲１（Ｈ１Ｎ１）和甲３（Ｈ３Ｎ２）两种不同亚型毒株引起临床反应进行研究，结果报告如下。１　对象与方法１１　研究对象　随机抽取该时间内发病的患者双份血清３９人份，分别用流感毒株甲３型（Ａ／Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ／９／９３）（Ｈ３Ｎ２），甲１型（Ａ／Ｔａｉｗａｎ／１／８６）（Ｈ１Ｎ１）做血凝抑制试验测定血凝抑制（ＨＩ）抗体滴度。凡ＨＩ…     

乌头叶面微生物菌群变化特征及其与乌头霜霉病相关性

目的:以四川江油栽培乌头为研究对象,探索乌头叶面微生物菌群动态变化特征及其与乌头霜霉病的相关性。方法:收集不同病害等级的乌头霜霉病叶片,摇床震荡与超声结合的方法提取乌头叶面微生物,稀释平板计数法测定乌头叶面细菌,真菌数量。结果:乌头霜霉病发病情况与环境温度相关,患病乌头叶面细菌,真菌数量相较于健康乌头都有所增加,且叶面其他真菌数量随着病害程度的逐渐加重而呈现出较有规律的逐渐增加趋势。结论:乌头霜霉病在其生长期的3月末至5月末发病迅速,且日平均气温15~20℃比较适宜乌头霜霉病病原菌的生长繁殖。乌头叶面真菌数量的变化与乌头霜霉病病害程度呈正相关。     

基于HPLC特征图谱及化学计量学的苗药云实感冒合剂质量评价研究

摘要：目的:建立特征性图谱和多指标定量与化学计量学相结合的云实感冒合剂质量评价方法。方法:采用WondasilTM?C18-superb色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5μm）,以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为254 nm,柱温为30℃,进样量为10μl,流速为1.0 ml·min-1,对没食子酸、原苏木素B、鞣花酸3种成分进行含量测定和特征图谱研究,并结合药材的图谱进行化学成分归属,结合化学计量学方法对云实感冒合剂的质量进行评价研究。结果:含量测定表明没食子酸0.327 0～1.364 0 mg·ml-1、原苏木素B 0.164 0～0.620 0 mg·ml-1、鞣花酸0.016 0～0.081 0 mg·ml-1。17批云实感冒合剂的HPLC特征图谱共有模式确定了25个共有峰,其中没食子酸和鞣花酸来自于云实皮和蓝布正,原苏木素B来自于云实皮,供试品分别与云实皮、蓝布正、马鞭草、生姜药材呈现9,7,11,3个相对应的色谱峰,并且17批云实感冒合剂的特征图谱相似度大于0.97,聚类分析及主成分分析均将17批云实感冒合剂聚为3类。结论:本文建立了云实感冒合剂HPLC特征性图谱,灵敏度高,重复性好,简单方便,易操作,通过对比云实感冒合剂待测样品与云实感冒合剂HPLC特征图谱共有峰的相似度,并结合化学计量学方法,可对云实感冒合剂的质量进行整体描述和评价,并确保产品质量的均一性。     

霜霉病胁迫对乌头生理生化指标的影响

目的:探究乌头感染霜霉病后不同发病程度下与抗病相关的生理生化指标差异。方法:以田间健康和自然发病下感染霜霉病的不同病级乌头叶片为材料,测定其可溶性糖、叶绿素含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性以及丙二醛(MDA)的含量。结果:随着病级的上升,乌头叶片内叶绿素含量不断下降;可溶性糖总体为上升-下降-上升-再下降的"M"型变化趋势;0级健康乌头叶片的SOD活性最低,病情最为严重的4级叶片SOD活性最高且与其他几级差异显著(P<0.05);POD、PPO以及PAL的活性均呈升高-降低-升高的"N"型变化趋势;而乌头叶片内MDA含量随着病级的上升而递增。结论:乌头感染霜霉病后不同发病程度下与抗病相关的生理生化指标具有显著差异。     

乌头霜霉病病原物分子检测方法的建立

目的:建立乌头霜霉病病原菌快速分子检测方法,为乌头种苗检疫及栽培环境土壤安全性评价提供依据。方法:使用真菌DNA提取试剂盒提取病原菌DNA,采用真菌核糖体内转录间隔区(ITS)通用引物ITS1/ITS4,对病原菌的r DNA-ITS区间序列进行扩增,将聚合酶链式反应(PCR)产物回收纯化并进行序列测定,并将测得的ITS序列同Gene Bank中搜索到的相关ITS序列进行比较,运用DNAMAN比对出特异序列片段,利用特异序列片段通过Primer Premier 5.0设计并筛选特异性引物,建立乌头霜霉病病原菌快速PCR检测方法。结果:从Primer Premier 5.0设计的8对引物中筛选出了灵敏度高、特异性强的引物对L1A/L1B,该引物能够从乌头霜霉病病原菌DNA扩增出670 bp的具有检测价值的明亮条带,利用该引物也能够检测出乌头种苗、成株以及栽培土壤是否存在乌头霜霉病原菌。结论:筛选出的引物对L1A/L1B能够快速、简便、有效地检测出乌头霜霉病病原菌,建立的方法能用于对乌头种苗霜霉病的提前检测或检疫。