丹参酮ⅡA-甘草酸自组装纳米胶束的制备及体外抗脑胶质瘤评价

  目的  将丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA, Tan ⅡA)封装于甘草酸(Glycyrrhizic acid, GL)中自组装得到胶束, 考察其制备工艺并对产物进行表征, 同时进行体外抗胶质瘤细胞活性评价。  方法  采用薄膜分散法制备载丹参酮ⅡA-甘草酸自组装胶束(Tan ⅡA-GL/Micelle, TGM)。测定TGM的粒径、多分散系数以及Zeta电位；透射电子显微镜观察TGM的形态特征；高效液相色谱法测定TGM的包封率；透析袋法考察TGM的药物释放情况。倒置荧光显微镜考察TGM体外跨血脑屏障(Blood-brain barrier, BBB)的能力; 定量考察细胞摄取的具体机制; MTT法考察游离Tan ⅡA、游离GL和TGM分别对鼠源性脑胶质瘤细胞GL261的细胞毒性; 流式细胞仪检测游离Tan ⅡA、游离GL及TGM对GL261的细胞凋亡作用。  结果  薄膜分散法是制备载丹参酮ⅡA-甘草酸自组装胶束的最佳工艺方法; TGM粒径约为(121.87±5.85)nm, Tan ⅡA包封率为(88.54±14.27)%, 呈类球形形态, 制剂均一稳定; 可在5 h左右释放包载药物。TGM具有良好的跨BBB能力; 脑胶质瘤细胞摄取自组装胶束的机制为通过网格蛋白介导的胞吞来进行制剂的摄取; 对于脑胶质瘤细胞GL261具有良好的细胞毒性; 细胞凋亡实验结果表明, TGM相较于Free TanⅡA、Free GL组显著提高细胞凋亡水平, 促细胞凋亡率分别由12.28%、13.32%上升至31.16%。  结论  GL与Tan IIA通过自组装形成了纳米胶束，有效克服TanⅡA生物利用度低、水溶性差等缺点。TGM可有效跨越BBB，通过网格蛋白介导的胞吞途径被脑胶质瘤细胞摄取，具有良好的细胞毒性与促细胞凋亡能力。      

儿童中药制剂常用剂型及共性技术应用研究现状及思考

目前儿童中药制剂剂型选择、辅料优选、工艺设计、包装装置等成人化倾向比较普遍, 导致给药剂量不准、患儿用药顺应性差, 药物有效性和安全性难以保证, 药品不良反应事件频发。因此, 研究开发符合儿童用药特点的制剂, 突破儿童制剂关键技术迫在眉睫。分析了口服液、糖浆剂、颗粒剂等常用剂型, 探讨其在儿童中药制剂中的应用情况, 并针对儿童中药制剂中存在的药物溶解度低、服用口感差、给药剂量不准确等问题, 探讨增溶、掩味和定量给药等共性技术的特点及应用, 以期为儿童中药制剂的研发奠定基础并提供依据。      

抑癌基因p15对人胆管癌细胞增殖影响与基因治疗适合靶点选择的相关性(英)

背景:对于胆管癌的治疗目前临床缺乏有效的诊治手段,抑癌基因替代疗法正逐步成为一种新型的、重要的抗肿瘤措施。P15作为一种重要的抑癌基因,发现可抑制肝癌细胞生长。但是对于其在胆管癌中的作用的相关研究尚在探索阶段,本研究为预防人胆管癌的发生提供一个理论框架。目的:通过构建稳定高表达抑癌基因p15的人胆管癌细胞模型,研究p15对胆管癌细胞增殖的影响。设计:完全随机,设立实验对照组,开放性实验研究。地点和对象:实验地点在南京医科大学生化与分子生物学研究室,研究对象为人胆管癌细胞系。干预:以稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型为实验组,稳定表达空载体的细胞模型为对照组。将抑癌基因p15的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中的EcoRⅠ/XbaⅠ位点,构建成p15真核表达质粒pcDNA3p15;通过脂质体法将pcDNA3p15质粒转染人胆管癌细胞系QBC939,经G-418筛选,获得稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的细胞模型,并经Western分子杂交分析证实。主要观察指标:观察实验组和对照组细胞增殖速率、细胞克隆形成能力、细胞周期、c-Fos蛋白表达水平的差异结果:与对照组相比,p15高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到明显抑制;克隆形成实验结果表明,高表达p15人胆管癌细胞所形成的克隆明     

胸苷磷酸化酶在瘢痕疙瘩中表达的初步研究

由于胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase，TP，E．C．2.4.2．4)的酶促产物2-脱氧核糖有促血管生成的活性，也曾被称为血小板衍化内皮细胞生长因子(PD—ECCF)，其在体内的主要生物学活性是特异性地催化胸苷生成胸腺嘧啶和1-磷酸-2-脱氧核糖，为核酸补救合成途径提供原料，从而保证体内核酸代谢池的稳定。TP／PD—ECCF在许多肿瘤组织中均有异常的高表达，是促进肿瘤血管生成和肿瘤转移的一个重要因素，并在肿瘤的临床检测和治疗中有着潜在的应用价值。本研究通过逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)和免疫组化在核酸及蛋白水平检测TP在瘢痕疙瘩组织中的表达情况，以探讨其在瘢痕疙瘩发病机制中的可能作用。     

服用肌酸对肌肉运动能力的影响

目的 研究增加肌酸摄入量后肌肉组织中肌酸和肌酸激酶（ｃｒｅａｔｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ,ＣＫ）含量的变化,探讨补充肌酸对肌肉工作能力的影响。方法 小鼠饲养１周后,取得肌肉提取液,用联乙酰－α奈酚反应测定法和逆向反应肌酸比色法分别测定肌酸和ＣＫ的含量。结果 实验组和对照组肌酸和ＣＫ含量经ｔ检验（Ｐ〈０．０１）,差异显著。结论 增加肌酸摄入量,能改善肌肉生化基础,增强组织细胞代谢能力。     

三氧化二砷抗肿瘤作用机制及其药物递送系统的研究进展

传统中药矿物药三氧化二砷具有显著的治疗作用，已被美国食品药品监督管理局（FDA）批准用于治疗急性早幼粒细胞白血病，近年来还发现其具有良好的治疗实体瘤的效果。其抗肿瘤机制主要包括促进细胞凋亡、抑制Hedgehog信号通路、逆转耐药性以及抑制血管生成等。然而三氧化二砷的体内靶向性较差、肾脏清除速率快、以及高剂量对正常组织的不良反应，限制了其对实体瘤的治疗应用与临床转化。新型药物递送系统在传统纳米制剂的基础上，提高了药物在肿瘤部位的聚集、控制释放以及诊断等能力，在精准治疗、提高生物利用度和降低毒副作用等方面具有重要意义。对三氧化二砷的抗肿瘤机制及抗肿瘤新型药物递送系统的研究进展进行总结和分析，以期为三氧化二砷抗肿瘤的深入研究和临床应用提供思路。     

p15对人胆管癌细胞增殖影响的实验研究及机理的初步分析

目的　通过构建稳定高表达抑癌基因 p15的人胆管癌细胞模型 ,研究p15对胆管癌细胞增殖的影响。 方法　将抑癌基因p15的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体 pcDNA3 neo中的EcoRⅠ /XbaⅠ位点 ,构建成p15真核表达质粒 pcD NA3 p15 ;通过脂质体法将pcDNA3 p15质粒转染人胆管癌细胞系QBC93 9,经G 418筛选 ,获得稳定高表达 p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的对照细胞模型 ,并经Western分子杂交分析证实。结果　与对照组相比 ,p15高表达的人胆管癌细胞QBC93 9的增殖受到明显抑制 ;流式细胞光度术表明 p15同时阻遏细胞由G1 期向S期及G2 期向M期的转换。结论　Western免疫印迹分析结果表明 ,癌基因c myc的蛋白水平表达下降可能是p15抑制细胞增殖的分子机理之一。     

抑癌基因p15对人胆管癌细胞增殖影响与基因治疗适合靶点选择的相关性

背景 对于胆管癌的治疗目前临床缺乏有效的诊治手段,抑癌基因替代疗法正逐步成为一种新型的、重要的抗肿瘤措施. P15作为一种重要的抑癌基因,发现可抑制肝癌细胞生长.但是对于其在胆管癌中的作用的相关研究尚在探索阶段 ,本研究为预防人胆管癌的发生提供一个理论框架. 目的 通过构建稳定高表达抑癌基因 p15的人胆管癌细胞模型,研究 p15对胆管癌细胞增殖的影响. 设计完全随机,设立实验对照组,开放性实验研究. 地点和对象 实验地点在南京医科大学生化与分子生物学研究室 ,研究对象为人胆管癌细胞系. 干预以稳定高表达 p15的人胆管癌细胞模型为实验组,稳定表达空载体的细胞模型为对照组.将抑癌基因 p15的 cDNA构建到高效真核表达的质粒载体 pcDNA3- neo中的 EcoRⅠ / XbaⅠ位点 ,构建成 p15真核表达质粒 pcDNA3p15;通过脂质体法将 pcDNA3p15质粒转染人胆管癌细胞系 QBC939,经 G- 418筛选 ,获得稳定高表达 p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的细胞模型,并经 Western分子杂交分析证实. 主要观察指标观察实验组和对照组细胞增殖速率、细胞克隆形成能力、细胞周期、 c- Fos蛋白表达水平的差异 结果与对照组相比 ,p15高表达的人胆管癌细胞 QBC939的增殖受到明显抑制;克隆形成实验结果表明,高表达 p15人胆管癌细胞所形成的克隆明显少于对照组所形成的克隆 (P< 0.01);流式细胞光度术表明 p15同时阻遏细胞由 G1期向 S期及 G2期向 M期的转换; Western免疫印迹分析结果表明,高表达 p15抑癌基因的细胞癌基因 c- Fos的蛋白水平下降约为对照组的 40%. 结论 p15高表达明显抑制了人胆管癌细胞的生长 ,并且基因 c- myc的蛋白水平表达下降可能是 p15抑制细胞增殖的分子机理之一.     

p15、p16对人胆管癌细胞增殖影响的实验研究

目的 研究抑癌基因p15、p16对人胆管癌细胞的生长抑制作用。方法 将抑癌基因p15、p16的cDNA构建到真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中形成p15真核表达质粒pcDNA3 p15及p16真核表达质粒pcDNA3 p16。通过脂质体法将重组质粒pcDNA3 p15,pcDNA3 p16质粒分别转染人胆管癌细胞系QBC939，获得稳定高表达p15或p16的人胆管癌细胞模型。用MTT法测定细胞生长曲线，流式细胞光度术测定细胞生长周期。结果 p15、p16高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到抑制，p15、p16均明显阻遏细胞由G1期向S期的转换。结论 抑癌基因p15、p16均参与了细胞周期的阻抑作用。     

IκB-α基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的：克隆ＩκＢ－α基因，构建ＩκＢ－α的真核表达载体。方法：ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＩκＢ－α的ｃＤＮＡ，然后将其克隆入真核表达载体ｐＳｈｕｔｔｌｅ，并转入大肠杆菌ＪＭ１０９。结果：通过ＰＣＲ和重组质粒酶切分析等方法，筛选出重组阳性克隆。结论：此重组质粒可用于真核表达等进一步研究。