一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响

目的通过观察一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶（AR）活性的影响，探讨一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶的调节作用。方法采用人的网膜作为细胞来源，胰蛋白酶-EDTA消化法进行人腹膜间皮细胞（HPMC）的分离、培养，间接免疫荧光法对第二代细胞进行鉴定。第2-3代细胞用于实验。以硝普纳为一氧化氮供体，硝普纳（0．5mmol／L、1mmol／L、2mmol／L）＋1．5％葡萄糖培养液为实验组，以无一氧化氮1．5％葡萄糖培养液为对照组，观察剂量及时间对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响。应用紫外分光光度计记录NADPH在340nm处吸光值的下降表示醛糖还原酶活性。结果高糖状态下各浓度一氧化氮组醛糖还原酶活性均高于对照组，且醛糖还原酶活性随一氧化氮浓度的增加而增加；一氧化氮＋葡萄糖组醛糖还原酶活性随着时间的延长而逐渐增加。各时点一氧化氮＋葡萄糖组醛糖还原酶活性均高于葡萄糖组。结论一氧化氮以时间及剂量依赖的方式使腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性增加。     

3-磷酸甘油醛脱氢酶的修饰蛋白减轻急性肾小管坏死自由基损伤的研究

目的通过分离、纯化、鉴定及蛋白质氨基酸测序3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PD)修饰蛋白(MP),观察庆大霉素诱发大鼠急性肾小管坏死(ATN)时,MP抗自由基损伤及对肾小管上皮细胞的修复作用。方法采用Western印迹法及间接免疫荧光检测等方法对MP进行鉴定分析。纯化的MP以氨基酸自动分析仪测定氨基酸序列。将SD雄性大鼠随机分成正常对照组(腹膜内注射0.9%氯化钠溶液2 mL/d×7 d 0.9%氯化钠溶液2 mL/d×14 d)、阴性对照组(腹膜内注射庆大霉素140 mg·kg~(-1)·d~(-1)×7 d 0.9%氯化钠溶液2 mL/d×14 d)、阳性对照组(腹膜内注射庆大霉素140 mg·kg~(-1)·d~(-1)×7 d 表皮生长因子20μg·kg~(-1)·d~(-1)×14 d)及实验组(腹膜内注射庆大霉素140 mg·kg~(-1)·d~(-1)×7 d MP 250μg·kg~(-1)·d~(-1)×14 d)。应用MP观察7和14 d的ATN大鼠模型血清及肾组织中脂质过氧化物(LPO)、还原型谷光苷肽(GSH)及一氧化氮(NO)水平的动态变化。通过光学显微镜、电子显微镜及免疫组织化学等形态学方法,观察MP修复ATN时大鼠肾小管上皮细胞的组织形态学及细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达的变化。同时测定血肌酐(SCr)水平。结果间接免疫荧光法证实,MP位于细胞质内,且钾浓度为3.2 mmol/L条件下的荧光强度明显强于钾浓度为5.4 mmol/L时。MP由25个氨基酸残基组成。实验组的血清及肾皮质匀浆中LPO、NO水平均较阴性对照组明显下降(P值均<0.01),GSH明显上升(P值均<0.01)。MP组肾脏病理改变比模型组明显减轻,同时SCr下降(P<0.01);实验组的ICAM-1表达较阴性对照组下调。结论自由基积极参与ATN肾小管上皮细胞损伤,MP能够抑制ATN大鼠血清及肾组织中LPO、NO水平的升高及GSH水平的下降。MP具有抗自由基损伤及修复肾小管上皮细胞的作用。     

辽宁地区1 295例肾活检病理分析

目的 回顾总结该院肾活检穿刺的标本，了解辽宁地区肾脏病的临床表现，病理类型和流行病学特点。方法 对1997年5月-2004年12月在该科行肾活检的1295例肾脏病患者的性别、年龄、病理类型及临床表现等进行分析。结果 肾小球疾病仍占该组病例的绝大多数，其中原发性肾小球肾炎（PGN）占76．4％，继发性肾小球肾炎（SGN）占19．0％，间质性肾病3、4％，肾移植相关的肾脏疾病占0．7％。PGN中男女发病率之比1．49：1，SGN中男女发病之比为1：1．51。两者高发年龄均为15-44岁。结论 辽宁地区肾脏病病理类型中系膜增生性肾小球肾炎、局灶节段性肾小球硬化和IgAN是最常见的PGN；狼疮性肾炎和紫癜性肾炎是最常见的SGN。PGN男性发病率高，SGN中女性发病率高。     

芪苈强心胶囊联合尼可地尔治疗冠状动脉慢血流的临床疗效

目的观察芪苈强心胶囊联合尼可地尔治疗冠状动脉慢血流的临床疗效。方法选取2019年1月—2020年1月沧州市中心医院诊断为冠状动脉慢血流的住院病人80例,随机分为对照组和治疗组,各40例。对照组给予尼可地尔治疗,治疗组在常规治疗基础上加用芪苈强心胶囊治疗。治疗6个月后,观察并比较两组冠状动脉血流速度(CTFC)、胸痛症状变化、血清血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平、多配体聚糖-1(Syndecan-1)、硫酸乙酰肝素(HS)及透明质酸(HA)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)变化及胸痛发作情况。结果治疗后,两组左前降支(LAD)、左回旋支(LCX)、右冠状动脉(RCA)的CTFC较治疗前均下降,且治疗组LAD的CTFC低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血清sLOX-1、TNF-α、hs-CRP水平均降低,且治疗组低于对照组(P<0.05)。治疗后,治疗组糖萼损伤标志物水平较治疗前降低,且治疗组低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组hs-CRP及ET-1水平较治疗前均降低,NO水平较治疗前升高,且治疗组优于对照组(P<0.05)。治疗后,两组心绞痛发作频率与里克特量表评分均下降(P<0.05),且治疗组心绞痛发作频率与里克特量表评分低于对照组(P<0.05)。结论芪苈强心胶囊联合尼可地尔可改善冠状动脉慢血流病人临床症状,其作用机制可能与降低机体炎症反应、修复血管内皮糖萼损伤、改善血管内皮功能有关。     

锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞凋亡的影响

目的：研究锌离子（Zn）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）凋亡的影响,从而为锌离子在腹透相关腹膜炎中的应用提供理论基础.方法：胰蛋白酶消化法培养原代大鼠腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组：（1）对照组; （2） LPS组; （3） ZnSO4组; （4） ZnSO4/LPS组.应用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测RPMC凋亡率,并采用Westen Blot方法检测P-Akt,天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶3（caspase3）,天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶8（caspase8）蛋白表达;酶联免疫吸附方法（ELISA）检测上清液TNFα,TGF-β1,sFas和d sFasL的表达.结果：与对照组相比,LPS组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白（caspase3,caspase8）表达升高.与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白（caspase3,caspase8）表达明显降低.LPS组上清液中TNFα,TGF-β1,sFas和d sFasL浓度显著高于对照组;ZnSO4作用组上清液中TNFα,TGF-β1,sFas和sFasL浓度显著低于LPS组.与LPS组相比,ZnSO4作用组P-Akt的表达明显升高.结论：ZnSO4可能可以逆转LPS所致的RPMC凋亡,对腹膜透析相关腹膜炎过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过PI3K/Akt通路而发挥作用.     

自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球microRNA表达谱和氯沙坦治疗效应

目的 分析糖尿病肾病(DN)发病过程中肾小球miRNA表达谱的变化,观察血管紧张素受体拮抗剂(ARB)氯沙坦对DN肾小球miRNA表达谱的影响,确认在DN发病过程中发挥关键作用的miRNA.方法 8周龄KKAy小鼠随机分为氧沙坦治疗组(10 mg·kg-1·d-1)和非治疗组,C57BL/6小鼠作为正常对照组.于20周龄检测体质量、随机血糖、尿微量白蛋白、尿肌酐,观察肾脏形态改变.应用磁珠灌注法分离肾小球,提取总RNA,应用Affymetrix GeneChip miRNA芯片,分析KKAv小鼠肾小球microRNA表达谱的变化,以及氯沙坦对microRNA表达谱的影响.结果 KKAy小鼠的体质量和血糖较正常对照C57BL/6组小鼠显著升高(均P＜ 0.05),氯沙坦治疗显著改善2型糖尿病KKAy小鼠的尿白蛋白/肌酐比值[( 539.71±100.23) mg/g比(728.00±177.19) mg/g,P＜0.05]和肾脏病理损害,而对血糖无影响.miRNA芯片分析结果发现,与正常对照C57BL/6小鼠相比,20周龄KKAy小鼠肾小球内10个miRNA的表达上调;12个miRNA的表达下调.与KKAy非治疗组小鼠相比,20周龄氯沙坦治疗组KKAy小鼠肾小球内共有4个miRNA表达下调,其中miR-503和miR-181d在KKAy非治疗组小鼠肾小球内的表达显著上调,氯沙坦治疗可抑制其过表达.结论 miR-503和miR-181d在糖尿病KKAy小鼠肾小球内的表达显著上调,氯沙坦治疗可抑制其在糖尿病状态下的异常表达,可能为糖尿病肾病新的治疗靶点.     

锌离子对TGF-β1诱导的大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响

目的研究锌离子对转化生长因子(TGF-β1)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转分化的影响,从而为锌离子在腹膜透析中的应用提供理论基础。方法胰蛋白酶消化法原代培养腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:正常对照组,TGF-β1(10ng/ml作用48h),ZnSO4作用组(30μMZnSO4作用24h,再加10ng/mlTGF-β1作用48h)。采用相差显微镜观察各组细胞表型改变。应用免疫荧光、western blot方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Ⅰ型胶原酶(collagenI)蛋白表达。结果 TGF-β1培养48h后细胞形态由典型的上皮逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞,而ZnSO4作用组细胞形态改变明显减轻。α-SMA在正常组细胞存在少量表达,TGF-β1组荧光强度明显增强,而ZnSO4作用组荧光强度明显低于TGF-β1组。与对照组相比,TGF-β1组RPMC的α-SMA、collagenI蛋白表达明显升高,而E-cadherin蛋白表达降低。与TGF-β1组相比,ZnSO组RPMC的α-SMA、collagenI表达明显降低、E-cadherin蛋白表达增多。结论 4ZnSO4可逆转TGF-β1所致的RPMC的转分化,对腹膜透析过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用。     

姜黄素预处理后大鼠急性腹膜炎腹膜肿瘤坏死因子α的检测

目的 揭示姜黄素在由表皮葡萄球菌(S.epidermidis)所致的腹膜炎中对实验动物腹膜肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响.方法 大鼠腹腔注射表皮葡萄球七前菌诱发急性腹膜炎,采用Western blot和逆转录聚合酶链反应,分别在造模后3,6,12,24和48 h各时点检测姜黄素处理组与无姜黄素处理组大鼠腹膜TNF-α蛋白和mRNA的表达情况.结果 大鼠腹膜TNF-α蛋白和mRNA的表达自感染后6～24 h出现时间依赖性升高.与无姜黄素处理组相比,姜黄素处理组实验动物腹膜TNF-α蛋白和mRNA表达降低.此外,姜黄素处理组腹膜细胞损伤较无姜黄素处理组轻.结论 姜黄素在由表皮葡萄球菌引起的急性腹膜炎中具有保护作用.     

系膜细胞源性肿瘤坏死因子α上调IgA肾病肾小管肝型脂肪酸结合蛋白的表达及其肾脏保护作用

目的 探讨体外近曲小管肝型脂肪酸结合蛋白（L-FABP）在IgA肾病（IgAN）中的上调机制及其对肾脏的保护作用。 方法 原代培养的小鼠系膜细胞（MC）与不同浓度的多聚IgA（AIgA）（10～250 mg/L）共孵育48 h,取上清作为AIgA-MC介质。分别应用不同浓度的AIgA、AIgA-MC介质、中和性抗肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体及重组鼠TNF-α刺激小鼠近曲小管上皮细胞系mProx和通过转染稳定表达人L-FABP （hL-FABP）基因的mProx (mProx-L)细胞。实时荧光定量PCR方法检测细胞中的hL-FABP和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的mRNA表达。Western印迹方法检测细胞中的hL-FABP蛋白和4-羟壬烯醛 （4-HNE）修饰蛋白的表达。 结果 （1）AIgA-MC介质显著上调mProx-L细胞的hL-FABP mRNA和蛋白的表达（P < 0.01）,而AIgA刺激不能上调hL-FABP的表达。（2）中和性抗TNF-α抗体（终质量浓度为1和5 mg/L）的预孵育可以显著抑制AIgA-MC介质对hL-FABP蛋白表达的上调效应（P < 0.05和P < 0.01）。（3）重组鼠TNF-α（终质量浓度为50 和250 ng/L）呈剂量依赖性显著上调hL-FABP蛋白的表达（P < 0.01）。（4）AIgA-MC介质刺激后, mProx-L细胞4-HNE修饰蛋白和MCP-1 mRNA的表达水平显著低于mProx细胞（P < 0.05和P < 0.01）。 结论 IgAN中系膜细胞源性TNF-α可以诱导肾小管L-FABP表达的上调。肾小管高表达的L-FABP抑制了氧化应激和炎性反应,发挥了肾脏保护作用。     

成纤维细胞生长因子23与慢性肾脏病钙磷代谢相关性研究

目的研究血清钙(Ca)、磷(P)、甲状旁腺激素(iPTH)、1,25(OH)2D3以及肾功能与成纤维细胞生长因子23(FGF23)的关系。方法将2009年9月至2010年2月中国医科大学附属第一医院住院的慢性肾脏病(CKD)患者58例分为3组,另设对照组20例。采用免疫酶联吸附(ELISA)法测定FGF23及1,25(OH)2D3浓度。全自动生化分析仪测定血清Ca、P、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)浓度,化学免疫发光法测定全段iPTH。结果 FGF23在CKD血清中的质量浓度均高于健康对照组,且随肾小球滤过率(GFR)的降低逐渐升高,在CKD 4,5期FGF23升高明显,与CKD 3期比较差异有统计学意义(P<0.05),1,25(OH)2D3显著下降,与对照组差异有统计学意义(P<0.01)。随着GFR的降低,血清Scr、P、iPTH逐渐升高。Pearson相关分析显示,CKD 3～5期logFGF23与logiPTH、Scr、P呈正相关(r=0.516,P<0.01;r=0.397,P<0.01;r=0.344,P<0.01),与GFR,1,25(OH)2D3呈负相关(r=-0.491,P<0.01;r=-0.413,P<0.01)。结论血清FGF23、iPTH、P随着GFR降低逐渐升高,1,25(OH)2D3逐渐降低,尤以CKD 4～5期明显。当GFR<30时FGF23质量浓度与GFR、血清iPTH、P、1,25(OH)2D3等因素有关。