LAPTM5过表达对LPS诱导小鼠B淋巴细胞WEHI231增殖与活化的影响

目的通过构建LAPTM5野生型和NZB型腺病毒,体外感染小鼠B淋巴细胞系WEHI231,探讨LAPTM5过表达对LPS诱导WEHI231增殖与活化的影响。方法采用qRT-PCR检测RAW264.7、WEHI231和NIH3T3三种细胞系中LAPTM5表达,采用LAPTM5野生型和NZB型腺病毒体外感染WEHI231细胞,采用LPS(1μg/ml)刺激WEHI231细胞,采用qRT-PCR检测细胞内LAPTM5 mRNA的表达变化,证实LAPTM5过表达效果,CCK-8法检测WEHI231细胞增殖能力的变化,采用qRT-PCR检测细胞内IL-6和TNFαmRNA的表达变化,初步探讨LAPTM5过表达对LPS诱导WEHI231细胞增殖与活化的影响。结果LAPTM5在小鼠巨噬细胞RAW264.7中高度表达,在小鼠B淋巴细胞WEHI231中较低表达,而在小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中不表达。感染LAPTM5野生型和NZB型腺病毒的WEHI231细胞中,LAPTM5 mRNA的表达水平显著增加(P0.05)。LAPTM5过表达后,LPS诱导WEHI231增殖能力显著增加,LPS诱导细胞中IL-6和TNFαmRNA的表达水平显著增加(P0.05),而LAPTM5 NZB型腺病毒对细胞增殖与活化能力的影响与野生型相比并无差异(P0.05)。结论LAPTM5过表达可促进LPS诱导小鼠B淋巴细胞WEHI231增殖与活化。     

运用2D-DIGE技术的结直肠癌差异蛋白质组学研究

目的:以荧光标记的二维差异凝胶电泳( 2D-DIGE)等蛋白质组学技术分析结直肠癌(CRC)与正常结肠黏膜间的蛋白质表达差异,筛选新的肿瘤标志物.方法:以2D-DIGE及基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析和鉴定6对新鲜的CRC与正常大肠黏膜组织的差异表达蛋白;以免疫组化法验证兴趣蛋白在46例CRC与正常大肠黏膜组织中的表达.结果:2D-DIGE分析和MALDI-TOF-MS鉴定结果显示,在CRC组织中表达明显升高的蛋白有泛醌细胞色素C还原酶核心蛋白1( UQCRCl),14-3-3ζ和结蛋白(desmin)等,明显降低的蛋白有碳酸酐酶(CA)Ⅰ和CA Ⅱ(均P＜0.05).免疫组化法结果显示,UQCRC1和14-3-3ζ在CRC中的表达强度为2.43 ±0.81和1.41±1.07,明显高于两者正常黏膜中的表达(1.80 ±0.96,0.67±0.94)(P＜0.001),而desmin在两组织间表达差异无统计学意义(P＞0.05);CA Ⅰ及CA Ⅱ在CRC中的表达强度为1.67±0.52和1.18±0.84,明显低于两者在正常黏膜中的表达强度(2.93±0.25,2.80±0.50) (P＜0.001).结论:以2D-DIGE为基础的蛋白组学技术结合免疫组化等方法验证是筛选肿瘤标志物的有效手段.UQCRC1,14-3-3ζ,CA Ⅰ和CA Ⅱ可能为CRC新的标志物或治疗靶点.     

阻断4-1BB/4-1BBL通路对系统性红斑狼疮T淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的影响

目的 研究共刺激分子4-1BB/4-1BBL对系统性红斑狼疮(SLE)T淋巴细胞增殖与Th1/Th2细胞因子分泌的影响,探讨其在SLE发病机制中的作用.方法 采用四甲基噻唑蓝(MTT)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测体外培养的30例SLE患者外周血T淋巴细胞应用抗4-1BB单抗阻断前后T淋巴细胞增殖及干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4分泌水平,以20名健康志愿者为正常对照.结果 ①SLE患者T淋巴细胞经抗CD3单抗刺激后增殖明显大于活化前(P＜0.01),而应用抗4-1BB单抗阻断后T淋巴细胞的增殖明显受抑N(p＜0.01 .②SLE患者T淋巴细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平明显高于正常对照组(P＜O.01),而且经抗CD3单抗刺激活化后,SLE患者T淋巴细胞分泌的IFN-γ和IL-4水平显著高于活化前(P＜0.01),但是应用抗4-1BB单抗阻断后培养上清中IFN-γ和IL-4水平明显下降(P＜0.05,),以IL-4水平的减少最为显著.结论 抗4-1BB单抗可显著抑制SLE T淋巴细胞的异常活化及Th1和Th2细胞因子的分泌,减轻SLE的免疫损伤.     

湖南省邵阳地区复杂性肾结石706例成分分析

目的分析湖南省邵阳地区复杂性肾结石化学成分特点,为其防治提供依据。方法对706例复杂性肾结石采用红外光谱法分析其化学成分,并回顾性分析相关临床资料。结果 706例复杂性肾结石中,混合性结石611例(86.54%),纯结石95例(13.46%)。结论湖南省邵阳地区复杂性肾结石成分复杂,病因复杂,应加强其病因诊断和针对多种病因采用积极的预防性治疗。     

应用二维电泳和质谱技术鉴定乳腺癌相关蛋白

目的 通过比较人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A的差异表达蛋白,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物.方法 体外培养人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A,提取细胞总蛋白,进行二维凝胶电泳并比较分析,选择在乳腺癌细胞MCF7中明显差异表达的蛋白点,进行质谱和生物信息学分析.结果 建立了MCF7和MCF10A两种细胞系的二维凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为(960±44)和(1128±29);对选择的35个差异表达蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定了其中16个点,包括过氧化氢酶-6(PRDX6)、磷酸甘油酸激酶-1(PGK1)、60 kD热休克蛋白(CH60)、谷氨酰胺转移酶-2(TGM2)等.结论 乳腺癌细胞MCF7相对于乳腺上皮细胞MCF10A的差异表达蛋白可能作为乳腺癌早期诊断和预后评价的候选肿瘤标志物.     

Alport综合征1例报道并文献复习

Alport综合征是一种基因突变所致的遗传性肾脏疾病。该病的临床表现多样,临床医师普遍对其认识不足,容易造成漏诊、误诊。现将我院收治的1例青少年Alport综合征患者报道如下。     

白细胞介素-10信号转导机制对C57BL/6和MRL/lpr-/小鼠脾细胞功能及活性影响的比较

我们以C57BL/6和MRL/lpr-小鼠的脾细胞为研究对象,进一步研究白细胞介素(IL)-10受体的信号转导机制及其在系统性红斑狼疮(SLE)发病过程中所起的作用.     

4-1BB在类风湿关节炎T淋巴细胞的表达及其对TH1/TH2偏移的影响

【目的】探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)T淋巴细胞上共刺激分子4-1BB的表达及其与血清TH1/TH2细胞因子分泌水平的关系。【方法】应用流式细胞术检测30例RA患者和20例正常对照者外周血T细胞活化前后4-1BB的表达,同时应用ELISA方法检测RA患者和正常对照者血清IFN-γ、IL-4水平。【结果】RA患者CD4 T和CD8 T细胞表达的4-1BB明显高于正常对照组(表达百分率分别为18.56±4.08,10.33±2.13,1.24±0.12,0.87±0.09,P<0.01),用抗CD3单抗体外刺激后CD4 T和CD8 T细胞表达的4-1BB均显著高于活化前(表达百分率为33.21±4.29和21.35±8.12,P<0.01)。RA患者CD4 T/CD8 T比值明显升高,而且与4-1BB CD4 T细胞数呈正相关关系(r=0.84,P<0.01)。RA患者血清IFN-γI、L-4均明显高于正常对照组(P<0.01,P<0.05),以IFN-γ升高最为显著。而且4-1BB CD4 T细胞数与血清IFN-γ水平呈明显的正相关关系(r=0.597,P<0.05)。【结论】类风湿关节炎患者T细胞表达的4-1BB在类风湿关节炎的发生发展中具有重要意义,4-1BB可能通过对CD4 T活化,促使TH1细胞因子分泌,参与关节炎症和免疫损伤。     

多配体蛋白聚糖4是糖尿病肾病的候选基因

目的 在2型糖尿病肾病(DN)白蛋白尿易感基因定位的基础上,进一步筛选白蛋白尿易感基因位点(UA-1)区域附近的候选基因.方法 提取20周龄雄性KK/Ta(n=3)和BALB/c (n=2)小鼠肾脏总RNA,应用Affymetrix Murine Genome U74Av2基因芯片检测肾脏基因表达谱.选择UA-1区域的差异表达基因多配体蛋白聚糖4(syndecan-4),竞争性RT-PCR验证基因芯片的结果.提取KK/Ta、BALB/c小鼠的基因组DNA,进行syndecan-4基因编码区和启动子区域的序列分析.结果 在2型糖尿病KK/Ta小鼠UA-1区域附近存在着约10个差异表达基因.其中syndecan-4在20周龄KK/Ta小鼠肾脏中的表达上调,为BALB/c小鼠的26.1倍.在syndecan-4基因编码区存在2个基因多态性,分别为A93C和T216C多态性,2者均为同义突变.在syndecan-4基因启动子区域存在3个基因多态性,分别为-T263C、-T396C 与-G669A多态性.TATA框位于转录起始位点上游321 bp处,-T263C处恰好为转录因子Clox 的结合位点.结论 syndecan-4基因位于2型糖尿病UA-1附近区域,在20周龄KK/Ta小鼠肾脏中的表达明显上调,是DN的候选基因.syndecan-4启动子处的基因多态性可能为其差异表达的原因.     

坎地沙坦不同治疗时机对2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏硝化氧化应激的影响

目的:本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾内硝化氧化应激的影响及其作用机制。方法:KK/Ta小鼠随机分为(1)非治疗组;(2)早期治疗组:自6周龄起经口予坎地沙坦(4mg·kg-1·d-1)治疗;(3)晚期治疗组:自12周龄起予坎地沙坦治疗,正常对照组采用BALB/c小鼠。应用免疫组化和免疫荧光染色检测肾脏中硝化氧化应激的标志物硝基酪氨酸,诱导型(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白的表达,竞争性RT-PCR检测iNOS和eNOSmRNA的表达。同时测定尿白蛋白排泄率,血压和糖耐量等临床指标。结果:28周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白排泄率增加,肾脏iNOSmRNA和蛋白表达上调,硝基酪氨酸的形成增加。坎地沙坦治疗减少尿白蛋白排泄率,抑制肾脏iNOSmRNA和蛋白的表达,减少硝基酪氨酸的形成,早期治疗组和晚期治疗组的作用差异无统计学意义。4组小鼠eNOSmRNA和蛋白的表达水平无差异。结论:坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏iNOS的表达,抑制过氧亚硝基阴离子的形成,抑制硝化氧化应激反应,发挥其降低尿白蛋白排泄率等肾脏保护作用。