中国汉族人群A_2亚型分子遗传背景的研究

目的　研究中国汉族人群ABO血型系统A2 亚型的分子遗传背景。方法采用PCR SSP法ABO基因分型试剂盒进行ABO常规基因定型。血清学确定为A2 亚型、PCR SSP法基因定型为A2 0 1或A1 0 2基因的 2 0例样本 ,对其ABO基因的第 6、第 7外显子进行DNA直接测序。结果① 2 6 0个随机的个体 ,经PCR SSP方法ABO基因定型试剂盒检测 ,检出O1、B、A1 0 1 (A4 6 7c)和A1 0 2 /1 0 3(A4 6 7T) 4种等位基因 ,但未检出A2等位基因。②采用血清学方法从 2 4 5 2例A或AB型随机献血者中筛检出的 2 0例A2 亚型样本 ,经PCR SSP基因定型 ,仅 5例为A2 0 1O1或A2 0 1B ,而其余 1 5例为A1 0 2O1或A1 0 2B。经DNA直接测序 ,结果 5例证实为A2 1 ,1 3例为A2 4 ,1例为A1 2 ,1例不能确定 ;A2等位基因中除 1 0 6 1C缺失外 ,还存在 4 6 7C >T、1 0 0 9A >G等点突变。结论中国汉族人群A2基因呈现多样性并存在自身特点 ,各A2等位基因的频率及分布与其它人群的资料存在差异 ,中国汉族人群A 2亚型中以A2 4等位基因 (4 6 7T、1 0 0 9G)为主     

广西贵港地区人群 MN 血型等位基因多态性的调查研究

目的　探讨广西贵港地区人群 MN 血型等位基因的分布特点。方法　收集 2018 年 9 月～ 2019 年 6 月期间广西贵港地区随机人群 300 人份血样，采用血型血清学方法鉴定其 MN 表现型，同时提取血样中的 DNA，对 MN 血型相关基因 GYPA 的 exon-2 序列扩增后测序，分析广西贵港地区人群 MN 等位基因的多态性并与中国西安、新疆、贵州、广东等地区随机人群的 MN 血型基因频率作比较。结果　广西贵港地区人群的 MN 血型血清学定型与基因测序结果完全一致，300 例 MN 血型血清学鉴定中，MM 表型为 140 例，MN 表型为 121 例，NN 表型为 39 例；M 基因频率为 0.668，N 基因频率为 0.332。通过数据比较分析可知广西贵港地区人群基因各型的构成比与国内其他地区人群不同，MN 血型抗原在不同个体中存在明显的剂量效应。结论　广西贵港地区人群 MN 血型基因具有独特的多态性，了解这种多态性有助于广西贵港地区临床的安全输血，预防新生儿溶血性疾病，为广西贵港地区人类群体遗传学特征及分子生物学的研究奠定基础。     

临床患者血浆中β- 内酰胺类药物＆抗体致输血无效及对供者红细胞亲和力的研究

目的 分析临床患者血浆中β- 内酰胺类药物＆抗体对供者红细胞的亲和力,探究药源性溶血性贫血及输血无效的临床特点。方法 选择2021 年11 月～ 2022 年4 月期间临床送检的4 例有β- 内酰胺类药物用药史的临床患者,检测ABO 与Rh 血型,直接抗球蛋白试验（direct antiglobulin test ,DAT）、不规则抗体鉴定（identification of irregularantibodies,IAT）与β- 内酰胺类药物抗体及效价,对DAT 阳性的患者红细胞进行酸放散并检测放散液中β- 内酰胺类药物抗体。选择ABO 和Rh 同型的供者红细胞与患者血浆在37℃无菌条件下体外致敏,监测β- 内酰胺类药物＆抗体在0 ,24,48 和72 h 与供者红细胞的亲和力,并观察加入补体后的溶血程度。结果 4 例患者血浆中均存在β- 内酰胺类药物抗体,停药前输血无效,停药后输血效果良好。患者1:A 型,RhCCDee,DAT 阳性（3+W）,IAT 阴性,血浆中存在头孢哌酮药物抗体（效价:1∶64）、阿莫西林药物抗体（效价:1∶16）,放散液中存在头孢哌酮药物抗体。患者2:A 型,RhCcDee,DAT 阳性（4+W）,IAT 阴性,血浆中存在头孢哌酮药物抗体（效价:1∶128）,放散液中存在头孢哌酮药物抗体。患者3:A 型,RhCcDee,DAT 阳性（4+）,IAT 阳性,鉴定为抗 E 抗体,血浆中存在阿莫西林药物抗体（效价:1∶16）、亚胺培南药物抗体（效价:1∶64）、头孢哌酮药物抗体（效价:1∶128）,放散液中存在亚胺培南、头孢哌酮药物抗体。患者4:A 型,RhCCDee ,DAT 阳性（1+）,IAT 阳性,鉴定为抗-E.c 抗体,血浆中存在阿莫西林药物抗体（效价:1∶32）,放散液中未检测到药物抗体。4 例患者血浆与供者红细胞体外致敏24 h 后DAT均为阳性,48 和72 h 内逐渐增强,加入补体后均可引起红细胞溶解。结论 头孢哌酮、阿莫西林和亚胺培南三种β-内酰胺类药物＆抗体可迅速结合到供者红细胞表面并随时间延长而增强,有补体存在的条件下可在24 ～ 72 h 内破坏供者红细胞引起溶血,导致输血无效。     

ABO 血型基因编码区全长序列的研究及初步应用

 【目的】 研究ABO血型基因编码区全长序列及对疑难标本的初步应用｡【方法】 对6份已知ABO血型的血样进行DNA抽提,针对ABO基因启动子､所有外显子､部分内含子序列设计､合成一系列特异性引物,探索它的最佳PCR反应体系和扩增条件,获得的PCR产物直接进行序列测定｡用建立的方法对2份ABO疑难血型的标本进行全长序列测定｡ 【结果】 得到ABO基因中A101､B､O01､O02､A102常见等位基因的ABO基因编码区全长核苷酸序列｡疑难标本中:正定型为O型､反定型为B型的ABO基因定为O02/O21型;表型为O型的基因定为A102/O01型｡ 【结论】 建立起中国人群的ABO基因编码区全长标准序列信息库,并可运用于ABO疑难血型基因的研究中｡     

中国汉族人群MN血型相关基因gypa分子多态性的研究

本研究探讨中国汉族人群MN血型相关基因gypa的多态性。随机选取中国汉族人群中无血缘关系的无偿献血者202人份,以血清学方法鉴定样本的MN血型表现型。根据GenBank的NG-007470基因参照序列设计gypa第2外显子引物,对202人份的DNA进行PCR扩增,同时对扩增产物进行直接测序。结果表明:所有样本的gypa第2外显子第1、56位碱基均发生了变异,其中MN表现型杂合子主要以1A>C、22T/C、34A/G、35T/G、56T>C的形式存在;MM表现型纯合子主要以1A>C、22C、34G、35T、56T>C的形式存在;NN表现型纯合子主要以1A>C、22T、34A、35G、56T>C的形式存在。结论:中国汉族人群MN血型相关基因的多态性主要由gypa第2外显子的第1、22、34、35、56共5个位点的多态性所决定,其中第1、56位为非功能性SNP位点。     

Landsteiner-Wiener血型系统测序分型技术的建立

目的 建立Landsteiner-Wiener血型系统的测序分型技术.方法 (1)随机采集45名非血缘关系无偿志愿捐献者外周血样,用EDTA抗凝.(2)从外周抗凝血样中提取总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术.反转录产生LW基因的cDNA(包括3个外显子),采用ABI PrismTM 3100 DNA测序仪对RT-PCR产物中LW基因的第1外显子进行测序.(3)提取基因组DNA,采用一对引物扩增LW基因的第1外显子、第1内含子和第2外显子,全长1224 bp,对第1外显子PCR产物直接进行DNA测序分析.结果 45例捐血者的样本,分别经RT-PCR产物测序和PCR产物直接测序,均取得了成功,LW基因第1外显子多态性位置第308碱基均为腺嘌呤.结论 本研究在国内率先建立了LW血型基因的分子测序方法,可为进一步研究中国人群LW血型基因多态性提供有效方法.     

一个中国汉族ABO血型B亚型家系中发现新的B等位基因

目的　研究中国汉族人群ABO血型中B亚型的分子遗传背景,发现并鉴定ABO新等位基因。方法　随机选择10个正常的B型志愿捐血者样本作对照,对6例血型血清学鉴定为B亚型的样本,采用序列特异性引物-聚合酶链反应方法、ABO基因第6及第7外显子PCR产物直接测序,进行基因定型;并对B等位基因的第6外显子、第6内含子及第7外显子进行基因克隆和单倍体测序分析。结果　2例血清学为Bx、BW的B亚型样本中,发现一个新的B等位基因。该等位基因与B1 0 1 等位基因相比,差异仅在第7外显子nt6 95位T>C突变。进一步对其中一个Bx 血型的个体进行家系调查,结果该家系的11人中,7人带有该新B等位基因。而其余的4例B亚型样本及10例对照样本,ABO基因的第6、7外显子未发现新的点突变。结论　首次发现6 95 T>C变异的新B等位基因,该等位基因nt6 95位由T转变为C,2 32位氨基酸由亮氨酸转变为脯氨酸,可导致糖基转移酶活性的降低,表明ABO基因的第2 32位氨基酸对决定糖基转移酶活性至关重要。     

MiniSTR技术应用于孕妇血浆中胎儿游离DNA检测的研究

目的研究利用母血中胎儿游离DNA检测STR的方法。方法采集9名11—27孕周的孕妇抗凝血样并分离出血桨,提取血浆总DNA,利用ABI MiniFilerTM系统复合扩增D13S317、D7S820、D2S1338、D21S11、D16S539、D18S51、CSFIPO、FGA等8个常染色体miniSTR基因座和性别Amelogenin基因座,扩增产物经ABI 3100型基因测序仪作基因扫描检测,用GeneMapper ID 3.2软件分析结果。结果9例孕妇血浆样本中,均检出了父源性胎儿STR等位基因,D13S317等8个常染色体STR基因座中,平均检出胎儿特异等位基因3.1个/例。在性别Amelogenin基因座,Y等位基因检出的案例有5例,并且按ABI MiniFilerTM试剂盒的扩增条件,Amelogenin Y等位基因的荧光信号峰高均>50 RFU,平均占Amelogenin X等位基因峰高的8.45%;未检出Amelogenin Y等位基因的有4例,性别Amelogenin基因座的结果与出生后证实的胎儿性别相一致。结论MiniSTR技术适合于孕妇血浆中胎儿游离DNA的检测,在产前分子基因诊断中具有广泛的应用前景。     

DNA序列分析法对新的B（A）型等位基因的检测分析

目的：对一ABO血型血清学定型违反一般血型遗传规律的家系进行研究,探讨B（A）血型的鉴定方法和新的B（A）型等位基因检测方法。方法：用血清学血型方法、PCR-SSP法和ABO基因第6及第7外显子直接测序的方法对B（A）血型和B（A）型等位基因进行检测。结果：该家系中血型血清学定型为AB型的成员DNA序列分析测定基因型为B（A）/O型,而PCR-SSP法检测AB型成员的基因型为O/O型。结论：应采用DNA序列分析法才能准确测定汉族人群中B（A）血型,而用PCR-SSP法检测可能引起误诊。     

类孟买型的FUT1和FUT2等位基因突变的分析

目的分析类孟买型个体的FUT1和FUT2位点基因突变的分子生物学基础。方法采用PCR扩增产物直接测序法,对2例类孟买型个体的FUT1和FUT2位点的等位基因进行序列检测。结果1例类孟买型个体FUT1位点547～552位的3个重复连续的AG中缺失1个AG,使得氨基酸序列发生182框码移位;另1例FUT1位点880～882位3个重复连续的T中缺失2个T,使得氨基酸序列发生294框码移位,而2例类孟买型的FUT2位点均为正常野生型。结论FUT1位点的移码突变是导致H抗原缺乏,形成类孟买型的原因之一。