流式细胞术在血小板相容性试验中的应用价值

目的探讨流式细胞术(FCM)在临床血小板相容性试验中的应用价值。方法应用FCM与固相凝集法同时对102名血小板输注无效的临床患者进行血小板供受者间的相容性试验,分别选择了固相凝集法交叉配血阴性或FCM中mean值最小的供者血小板应用于临床患者,追踪输注效果。结果 65名血浆中存在未知特异性抗体的患者,经FCM选择的供者输注血小板后,患者的CCI上升指数为85%,固相凝集法选择的供者输注后CCI的上升指数为23%。结论 FCM较固相凝集法在血小板相容性试验中具有更灵敏、更简单、更快捷、更准确的优点,应用FCM进行血小板相容性试验对提高临床的输注疗效具有重大的意义。     

流式细胞技术和基因分型技术用于血小板相容性配合

目的 应用血小板间接免疫荧光标记流式细胞技术和HLA、HPA抗原基因分型技术进行血小板相容性配合与输注. 方法 1)研究对象:2005-2009年,血小板抗体阳性,临床申请血小板相容性配合的患者30名,其中:血液病10名,白血病15名,恶性肿瘤5名.男性10名,平均年龄(49.80±1 1.88)岁,女性20名,平均年龄(47.1 1±19.79)岁.PCR-SOP流式磁珠试剂盒用于HLA-Ⅰ低分辨基因分型.HLA-PRA流式磁珠试剂盒用于HLA抗体PRA检测,以上试剂盒均来自美国OneLambda公司.PAKPLUS酶联免疫试剂盒(美国CTI公司)用于血小板同种抗体检测.     

IgG抗-Le~a致严重溶血性输血反应1例及其家系调查

1　病例简介患者 ,女 ,18岁。因双下肢热水烫伤伴肿痛 2 2d入院。入院后给予创面处理 ,静滴抗生素抗感染 ,先后用过多种抗菌素 ,其中对头孢三嗪过敏 ,均及时停用。患者在 5月 2 2日行手术封闭创面时 ,申请输A型红细胞悬液 2U ,在输入第 2袋时 (输入 5～ 10ml) ,患者突然出现头晕 ,畏寒、四肢发抖等症状 ,及时停止输血 ,当时给予地塞米松 10mg ,非那根2 5mg ,曲马多 10 0mg ,症状无明显好转。当日患者出现酱油色尿 ,急查尿常规示潜血试验强阳性。考虑溶血性输血反应而送检血样至本实验室进行血型血清学检查。经检查发现患者血清中含有IgG类…     

A3等位基因的分子遗传分析

为了研究血型血清学鉴定为A3型的4例样本，其中2例样本为一个家系，用血清学方法检定其3例为A3型，1例为A3B型。通过PCR-SSP与测序分析其Exon 6与Exon 7及部分内含子，与A101等位基因参比序列进行了比较。结果发现在2例A、型样本中单倍体分别为常见的A102等位基因与O1—2等位基因，1例A，样本中单倍体分别为常见的A102等位基因与少见的O^1V-4等位基因，1例A3B样本在A基因中发现838C→T(Leu280Phe)，此研究结果提示血清学表现为A3型的分子遗传背景存在多态性，A3B型的838C→T可能是A3低转移酶活性的分子基础。     

中国人副孟买型的FUT1和FUT2基因的分子遗传研究:一个新的FUT1等位基因的鉴定

目的在7例由血清学方法确定为副孟买表型的中国人个体中,进行了分子生物学分析。方法采用聚合酶链反应和DNA直接测序、克隆测序等方法,检测7例标本的FUT1和FUT2基因的核苷酸序列组成,并对一个新的非功能性FUT1等位基因进行家系调查。结果7例标本的FUT1基因型分别为h1h1(4例),h2h2(2例),h328hnew(1例),h1等位基因在547～552位缺失1个AG,使得氨基酸序列发生182框码移位;h2等位基因在880～882位缺失两个T,使得氨基酸序列发生294框码移位;h328等位基因(nt328G>A)导致110位丙氨酸(Ala)被苏氨酸(Thr)置换;除hnew以外,h1、h2、h328这3种等位基因以前都有报道,hnew以杂合子形式存在于标本7中,经克隆测序发现该新基因在nt360-400位缺失GGTATTCCGCAT-CACCCTGCCCGTGCTGGCCCC,共33个碱基,家系调查证明hnew来自其母亲。7例标本的FUT2基因型分别为,3例为正常野生型Se357Se357,3例标本为Se357Se357,385,1例标本为Se357,716Se357,716,已知Se357(nt357C>T)和Se716(nt716G>A)为功能性的FUT2等位基因,Se385(nt385A>T)为弱功能性的FUT2等位基因,7例副孟买表型个体至少带一个拷贝的功能性FUT2等位基因,与其分泌状态一致。结论发现一个新的非功能性FUT1等位基因,其在nt360-400位缺失33个碱基,引起氨基酸序列框码移位,不能编码有活性的H抗原转移酶。     

深圳地区妊娠期孕妇血清IgG抗体效价与产后HDN的相关性

目的探讨深圳地区1069例妊娠期孕妇血清中红细胞血型IgG类抗体特异性、效价对母婴血型不合引起的新生儿溶血病（HDN）的影响,为新生儿免疫溶血性疾病的早期诊断及预防提供依据。方法对深圳地区的1069例与丈夫红细胞血型不合的孕妇血清进行IgG类抗体筛选,对不规则抗体阳性者鉴定抗体的特异性,采用以间接抗球蛋白法定期检测相应抗体的效价。并随访高胆红素血症的新生儿,对其进行红细胞直接抗球蛋白试验、血清游离试验和红细胞放散试验等,以了解黄疸患儿中因红细胞血型IgG抗体引发HDN的构成。结果1069例样本中,IgG抗A／B效价≥64者765例,产生HDN的457例;IgG抗A／B效价〈64者236例,产生HDN的61例。ABO-HDN占总调查人数45．65％。IgG抗D、C、D＋C、M、Mur≥16者57例,产生HDN的54例;IgG抗D、C、D＋C、M、Mur〈16者11例,产生HDN的1例。非ABO-HDN占总调查人数5．14％。结论深圳地区的孕妇血清中IgG类抗体效价与新生儿溶血病密切相关,HDN发病率有明显偏高的现象。定期筛选与鉴定孕妇体内IgG类抗体可预测新生儿溶血病的发生、评估HDN的严重程度及提高HDN的治愈率。     

类孟买型在两个近亲与随机婚配家系中的遗传特点

目的 调查分析近亲与随机婚配的两个家系成员个体间的类孟买型分布状态,了解类孟买表现型在该两家系中的遗传特点.方法 以血型血清学试验作为检测基础,用PCR-SSP法进行ABO基因分型,扩增FUT1,FUT2基因,对PCR扩增产物进行直接测序或分子克隆测序后,分别鉴定两家系成员的类孟买表现型.结果 近亲婚配的家系1中,先证者与其兄、弟均从父母中得到了FUT1基因的547～548位两碱基AG缺失(h1),880～881位两个T碱基缺失的突变点(h2),表现为h1,h2类孟买型;父亲为h2基因携带者;母亲与先证者的女儿均为h1基因携带者.随机婚配的家系2中先证者与兄弟姐妹共4人,只有先证者本人的两条单倍体均遗传了父、母亲的FUT1基因的547～548位两碱基AG缺失(h1),表现为h1h1类孟买型;其他兄弟姐妹与父亲、母亲、先证者的儿子均为h1基因携带者,血型为正常的表现型.两家系成员的FUT2位点均为正常的野生型.近亲婚配家系Ⅰ中hh纯合子遗传发生率为100%;随机婚配家系Ⅱ中hh纯合子遗传发生率为25%.结论 该两个家系调查发现,类孟买表现型的遗传方式符合常染色体隐性遗传规律,近亲婚配比随机婚配可大大增加类孟买表现型的遗传概率.     

人类红细胞MN血型中抗-M与GYPA基因表达的相关性简

目的 研究人类红细胞MN血型系统中抗-M的产生与相关基因GYPA表达的相关性,同时揭示M抗原的表达与抗-M产生之间的关系.方法 选择无偿献血者和临床中发现的血浆中含有IgG、IgM或两者共存的16例抗-M血液样本,以血清学及分子生物学方法对样本进行MN血型检测,应用自行设计的一对特异性引物检测MN血型相关基因GYPA第二外显子的碱基序列.结果 16例样本中12例表现型为NN型,2例为MN型,2例为MM型.基因测序结果与GenBank参比序列比对,未发现突变碱基,血型表现型的基因定型与血清学定型相一致,经过谱细胞鉴定,该16例患者的血浆中全部携带抗-M抗体.结论 人类红细胞MNS血型中抗-M的产生与M抗原是否存在没有必然关联,与相关基因GYPA的表达也无明显关联.     

中国汉族人群检出B(A)803C→G等位基因并引起重度新生儿溶血病的研究

目的研究ABO血型系统中血清学定型违反一般血型遗传规律的家系中基因型的遗传学基础，并分析引起重度新生儿溶血病（HDN）的原因。方法对一母亲为O型、父亲为AB型、新生儿为AB型的家系进行研究。利用亲子鉴定，血清学实验，PCR-序列特异性引物（SSP）法和ABO基因第6及第7外显子直接测序的方法进行基因定型，揭示此家系的血型基因分子生物学背景。同时采用微柱凝胶技术做HDN检查，并对新生儿的主要生化和血常规指标进行动态观察。结果亲子鉴定结果显示三代AB型家系成员有亲子关系，本AB型家系成员血型血清学表现为红细胞与多种不同厂家的单克隆抗-A、抗-B和人源性抗-A、抗-B均发生强凝集（4＋）；反定型血清中不含有抗-A和抗-B抗体。PCR-SSP法未检出三代AB型家系成员的A和B型基因。ABO基因第6及第7外显子直接测序方法检测到三代AB型家系成员均有B（A）803C→G的变异基因存在。新生儿发生重度HDN。结论本家系遗传学基础是B（A）803G血型基因能够合成同时具有A和B双功能活性的糖基转移酶。首次报道了因B（A）血型新生儿红细胞上同时有大量A和B抗原而引起重度ABO系HDN。     

WARM试剂在去除温自身抗体检测中的应用

目的探讨并评价WARM试剂在温自身免疫性溶血性贫血患者输血前检查中的应用。方法选取32例直接抗球蛋白试验（DAT）强阳性的自身免疫性溶血性贫血患者样本，使用WARM试剂、氯喹试剂及热放散3种方法，比较自身抗体吸收及去除的效果。结果使用WARM试剂放散后，87．50％患者DAT凝集强度从3＋减弱为1＋，81．25％患者血清用放散后的细胞吸收自身血清后，IAT凝集强度从2＋减弱为w＋；而52．17％患者使用氯喹试剂放散后，DAT凝集强度从3＋减弱为1＋，39．13％患者血清用放散后的细胞作自身抗体吸收后，IAT凝集强度从2＋减弱为w＋；另一方面使用热放散方法，21．73％患者DAT凝集强度从3＋减弱为1＋，17．39％患者血清用放散后的细胞作自身抗体吸收后，IAT凝集强度从3＋减弱为1＋。结论WARM试剂对于温自身抗体的放散及放散后红细胞对自身抗体的吸收效果，明显优于氯喹试剂和热放散方法。