胃癌周围淋巴结组织间充质干细胞的分离和鉴定

目的试分离培养胃癌患者周围淋巴结组织中的间充质干细胞(h GCL-MSCs),并鉴定其生物学特性。方法采用组织块贴壁法分离培养24例胃癌患者周围淋巴结组织,通过测定生长曲线、细胞周期、RT-PCR、染色体分析、免疫组化染色、成骨成脂诱导染色及裸鼠致瘤等实验,评价其生物学特性,并与人骨髓间充质干细胞(h BM-MSCs)进行比较。结果 24例胃癌患者周围淋巴结组织中分离培养出3例h GCL-MSCs;生长曲线试验发现,h GCL-MSCs增殖速率高于h BM-MSCs;染色体分析示其核型正常,裸鼠致瘤实验未见致瘤;RT-PCR检测其表达Oct-4、Nanog、ABCG2、CD44、CD73、α-SMA、Bmi-1等干细胞相关基因;免疫组化染色结果表明,h GCL-MSCs中α-SMA、P53、ABCG2染色呈强阳性,PCNA染色呈弱阳性。结论 h GCL-MSCs与h BMMSCs的生物学特性相似,对研究胃癌微环境及其发生具有重要意义。     

重度烧伤患者细胞因子水平的变化及其临床意义

目的:通过研究重度烧伤患者体内细胞因子水平的变化,初步探讨其与疾病严重程度的关系及其临床意义?方法:选择烧伤面积≥35%烧伤总面积(TBSA)的患者与正常对照组(与烧伤组平行处理)各49例,分别收集烧伤患者伤后6 h?12 h?1 天?2天?7天?14天的外周静脉血?ELISA试剂盒检测细胞因子IL-2?IL-4?IL-6?IL-8的分泌水平;CCK-8试剂盒检测T淋巴细胞增殖能力?结果:与正常对照组比较,重度烧伤患者伤后6 h?12 h?1天?2天?7天?14天T淋巴细胞增殖能力与IL-2?IL-4的分泌水平均显著下降(P均 < 0.05),而IL-6?IL-8的分泌水平则显著升高(均P < 0.05)?结论:重度烧伤患者体内T淋巴细胞免疫功能处于抑制状态,促炎细胞因子(IL-6?IL-8)参与烧伤后炎症应答的病理生理过程?     

慢性肾脏病患者血清骨保护素甲状旁腺激素与骨密度的关系

目的 观察骨保护素(OPG)全段甲状旁腺激素(iPTH)在慢性肾脏病(CKD)中的变化以及与骨密度(BMD)的相关性.方法 采用ELASA法测定100例慢性肾脏病患者和健康体检人群的血清OPG和iPTH值.采用双能X线骨密度仪测定上述人群的1～4腰椎前后位BMD和T值.结果 CKD5期(Ccr<15 mL/min)T值和BMD值与体检人群比较差异有统计学意义(P<0.05);CKD2-4期T值和BMD值与体检人群比较差异无统计学意义(P>0.05).CKD3～5期患者血清OPG显著高于体检人群(P<0.05),CKD4、5期患者血清iPTH明显高于体检人群(P<0..01).相关分析表明OPG和iPTH与骨密度相关.结论 CKD患者OPG和iPTH改变早于BMD和T值改变.     

2007年临床深部真菌感染与药敏结果分析

目的 对2007年临床深部感染真菌进行鉴定和药敏试验,考察其耐药性,为临床提供参考。方法 科玛嘉真菌显色培养基分离及鉴定真菌,或用VITEK酵母菌生化卡鉴定,丹麦ROSCO抗真菌药敏片作念珠菌药敏试验。结果 临床深部真菌以白念珠菌居多,药敏结果以制霉菌素、二性霉素、氟康唑的敏感性最强,特比萘芬敏感性最差。结论 真菌感染逐年上升,必须加强对真菌耐药性的监测,并合理使用抗生素。     

哮喘患者外周血单个核细胞不同细胞亚群上Notch分子的表达

支气管哮喘是一种由多种炎症细胞和炎症介质参与的慢性气道炎症性疾病,其中肥大细胞、嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞为主要效应细胞[1].哮喘的发病机制迄今尚不完全明了,研究发现免疫功能异常是重要的致病因素[2].近来研究表明,Notch信号通路在中枢和外周免疫系统中各种细胞发育成熟的不同阶段,尤其是外周T细胞的分化过程中发挥重要作用[3],推测其可能与哮喘中细胞免疫功能异常有关.因此本研究应用实时荧光定量PCR和流式细胞染色的方法,对哮喘患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)不同细胞亚群上Notch分子的表达进行分析,以期为哮喘的发病的分子机制提供新的思路.     

带PTD的小鼠Foxp3 PRD缺失突变体对小鼠脾混合淋巴细胞反应的影响

目的：构建和表达带蛋白转导结构域（protein transduction domain,PTD）的Foxp3（forkhead boxP3）PRD缺失突变体（PTD-ΔPRD）融合蛋白,并探讨其对脾混合淋巴细胞反应的影响。方法：应用PCR技术扩增获得小鼠ΔPRD片段核酸序列,将其分列插入到带PTD的pET28a-PTD和pET28a-PTD-eGFP原核表达载体中,并在大肠埃希菌Rosetta（DE3）中表达融合蛋白,利用镍柱获得并复性融合蛋白;Western印迹鉴定目的蛋白表达的正确性、流式细胞术和Western印迹检测融合蛋白穿膜进入小鼠T淋巴细胞瘤株EL-4细胞中的能力、双向混合淋巴细胞反应分析融合蛋白对T淋巴细胞增殖的影响。结果：融合蛋白可在大肠埃希菌Rosetta（DE3）中表达,并获得了大量纯化的融合蛋白。流式细胞术和Western印迹显示融合蛋白穿越细胞膜进入EL-4细胞核中,混合淋巴反应初步证明融合蛋白具有抑制T淋巴细胞增殖的功能。结论：成功表达小鼠PTD-ΔPRD Foxp3融合蛋白,该融合蛋白能有效进入细胞核内,抑制T淋巴细胞增殖。     

慢性肾脏病患者血脂变化及其与血清骨保护素、甲状旁腺激素的关系研究

目的探讨慢性肾脏病(CKD)患者血清骨保护素(OPG)、全段甲状旁腺激素(iPTH)、血脂变化的临床意义以及相互之间的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定100例不同分期的慢性肾脏病患者以及25例健康体检者的OPG、iPTH和血脂水平。结果慢性肾脏病4、5期(内生肌酐清除率<30 ml/min)的脂蛋白-a(Lp-a)水平升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。慢性肾脏病各期患者与对照组间血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、载脂蛋白A1(ApoA1)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。慢性肾脏病3、4、5期患者的血清OPG水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);慢性肾脏病4、5期患者的血清iPTH水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析表明,OPG、iPTH与Lp-a呈正相关(P<0.05)。结论慢性肾脏病患者的OPG和iPTH与Lp-a相关,提示OPG、Lp-a可能共同参与肾功能不全患者的血管损伤。     

烧伤患者巨细胞病毒复发感染及其对患者预后的评估价值

目的观察烧伤病人巨细胞病毒（humancytomegalovirus,HCMV）复发感染情况及对预后的影响。方法对96例烧伤总体表面积（totalbodysurfacearea,TBSA）〉15％的患者进行动态观察。试验分组：（1）按烧伤面积将患者分为三组：Ⅰ组39例（TBSA15％-49％）,Ⅱ组32例（TBSA50％-69％）,Ⅲ组25例（TBSA70％-99％）;（2）根据脓毒血症诊断标准,将患者进一步分为脓毒症组（33例）和非脓毒症组（63例）;（3）根据脓毒症组患者的预后情况,将其分为死亡组（11例）和生存组（22例）。人院24h内采集患者外周静脉血筛查抗HCMVIgG及HCMV—DNA,而后每隔1周左右采集病人血清标本,采用实时荧光定量PCR方法检测血清中HCMV—DNA水平。结果（1）I组、Ⅱ组和Ⅲ组的HCMV复发感染率分别为53．8％、50．0％和80．0％,Ⅲ组与其他两组之间差异有统计学意义（x^2=6．069,P〈O．05）。（2）三组烧伤患者HCMV首次复发时间及每次复发持续时间差异无统计学意义（P〉0．05）。HC—MV平均首次复发时间为入院后第14天,每次复发持续时间约为12天。（3）脓毒症组HCMV的复发感染率明显高于非脓毒症组（x^2=4．431,P％0．05）,HCMV复发感染率与死亡率不相关（x^2=0．688,P〉0．05）。结论烧伤患者HCMV复发感染率高,HCMV复发感染可能对烧伤后脓毒症的发生具有一定影响。     

光激化学发光免疫分析法检测孕妇血清W物质

摘要：目的：建立定量检测孕妇血清W物质的光激化学发光免疫分析（LICIA）法并进行方法学评价。 方法：包被有W物质（T₂S类似物）的感光微粒与兔抗W物质抗体连接,与生物素化羊抗兔IgG及包被有链霉亲合素的发光微粒构成检测体系;对LICIA法反应条件进行探索并进行方法学评价。 结果: LICIA法的检测灵敏度为5 pg/mL,线性范围为5~10 000 pg/mL;批内、批间变异系数（CV）均<10%;回收率为89.2%~108.1%;T₃S＜10 ng/mL、T₄S＜100 ng/mL、Hb＜5.0 g/L、T-Bil＜500 mol/L、TG＜3 mmol/L对LICIA法检测W物质无显著干扰;LICIA法稳定性较好;与放射免疫分析（RIA）法比较,LICIA法检测W物质差异无统计学意义（t=1.012,P＞0.05）。检测孕早期孕妇血清W物质的参考值上限为847 pg/mL。 结论：LICIA法检测W物质灵敏且简便易行,可用于孕妇血清W物质的检测。     

胃癌患者外周血云韵载孕猿的检测及临床意义

目的:通过研究胃癌患者外周血中FOXP3的表达,初步探讨其在胃癌发病机制中的临床意义?方法:选择胃癌患者与正常对照各31例,用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+T细胞的数量;ELISA检测胃癌患者和正常对照外周血单个核细胞培养上清中Th2型细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-10和Th1型细胞因子IL-2的表达;RT-PCR检测FOXP3的mRNA表达?结果:胃癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞约占CD4+T细胞(30.4 ± 1.9)%,显著高于正常人外周血中CD4+CD25+T细胞的比例(3.5 ± 0.8)%(P < 0.05);胃癌患者外周血CD4+CD25+T细胞高表达FOXP3;胃癌患者外周血单个核细胞培养上清主要分泌IL-10,而IL-2分泌无显著变化?结论:FOXP3表达的增加对肿瘤免疫具有抑制作用,可能参与胃癌的发生?