EGFR和PD-L1双靶向嵌合抗原受体构建及表达

目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力,抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv);人EGFR单克隆抗体杂交瘤系,经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体,使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染293V细胞,FACS测定CAR膜表达,ELISA检测CAR感染293V细胞培养上清中PD-L1-scFv表达情况,转染激活人外周血T细胞,验证CAR膜表达。结果:获得PD-L1抗体11E3,具备高度配受体封阻性能,经人源化改造后,亲和力稳定(2.67×10 -10 mol/L),EGFR-scFv获得有效表达。进一步构建了EGFR-CAR和PD-L1双修饰慢病毒分泌型CAR(CTC0537-1)及膜表达型CAR(CTC0537-2),其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后,细胞膜表面表达EGFR-scFv,检测培养上清存在PD-L1-ScFv;CTZ0431-2感染293V细胞后,细胞膜表面EGFR-scFv和PD-L1-scFv有效表达,双表达病毒感染活化T细胞的CAR表达率为39.3%。 结论:成功构建了EGFR-CAR和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体,EGFR-CAR中度结合亲和力,此为EGFR靶向和PD-L1抗体双修饰CAR-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。     

椎动脉起始部迂曲对血管性眩晕的影响及其临床危险因素

目的 探讨椎动脉起始部迂曲对血管性眩晕的影响及其临床危险因素. 方法 连续入选神经内科病房住院的老年眩晕患者206例,记录脑血管病相关的临床危险因素、眩晕分级、治疗缓解天数,检测血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C-反应蛋白(hsCRP),进行颈部CT血管成像(CTA)或对比增强磁共振血管成像(CEMRA)检查.将眩晕患者分为椎动脉起始部迂曲组(137例)与非迂曲组(69例),采用Logistic回归分析探讨椎动脉起始部迂曲的临床危险因素. 结果 椎动脉起始部迂曲组合并椎动脉优势者多于非迂曲组,差异有统计学意义(75例比26例,x2 =2.496,P＜0.01).椎动脉起始部迂曲患者眩晕级别:1级17例,2级36例,3级79例,4级4例,5级1例;治疗缓解天数为1～1o d.非迂曲组眩晕级别:1级18例,2级35例,3级10例,4级3例,5级1例,治疗缓解天数1～6 d,两组比较差异均有统计学意义(t=2.014,2.849,均P＜0.01).单因素分析结果表明,年龄、高血压病、高LDL-C、糖尿病、吸烟、脑卒中史、椎动脉优势及颈椎病等两组之间差异有统计学意义(x2=7.498、5.182、3.724、10.461、6.883、2.748、4.496、8.265,均P＜0.05).Logistic回归分析表明,年龄＞65岁(95％CI:5.36～18.23,OR=4.84)、高血压病(95％CI:2.79～16.45,OR=3.21)、椎动脉优势(95％CI:3.25～13.49,OR=5.48)和颈椎病(95％ CI:4.38～21.28,OR=3.57)为椎动脉起始部迂曲的临床高危因素. 结论 椎动脉起始部迂曲者眩晕级别高、治疗缓解天数延长;年龄＞65岁、高血压病、椎动脉优势和颈椎病为椎动脉起始部迂曲的临床高危因素.     

抑制COX-2/PGE2通路对胶质瘤细胞免疫抑制因子表达的影响

目的 探讨celecoxib对脑胶质瘤细胞环氧化酶(COX)-2表达的影响,以及对免疫抑制因子前列环素E2( PGE2)、转化生长因子(TGF)-B、血管内皮生长因子(VEGF)等的影响.方法 利用Western印迹检测不同浓度celecoxib作用后,C6细胞COX-2蛋白表达水平;RT-PCR检测celecoxib对C6细胞TGF-β、VEGF mRNA表达的影响;酶联免疫法(ELISA)检测celecoxib作用后C6细胞上清PGE2、TGF-β、VEGF分泌水平.结果 celecoxib可呈浓度依赖性下调C6细胞COX-2蛋白表达水平;celecoxib作用后,C6细胞TGF-β、VEGF mRNA的表达水平明显下调(P＜0.01),相应细胞上清中PGE2、TGF-β、VEGF分泌水平亦明显下降(P＜0.01).结论 celecoxib可通过抑制COX-2蛋白活性,降低肿瘤局部微环境中的PGE2水平,并进一步下调TGF-β、VEGF的表达,从而改善胶质瘤微环境中免疫抑制状态.     

CT引导+内窥镜治疗腰椎间盘突出症的入路设计及应用

[目的]探讨CT引导下内窥镜工作套管置入的入路设计及应用.[方法]根据不同部位和类型的腰椎间盘突出,采用了六种手术入路,按照“角”“面”“点”“向”“度”完成入路设计、量化和标记:在CT引导下完成工作套管置入;在内窥镜下完成手术.[结果]临床应用512例,术后随访时间1～20个月,平均7.3个月;JOA评分:术前(11.90+4.0)分,术后1周(26.8±2.7)分,末次随访(26.9±3.2)分,术前术后差异有统计学意义(P＜0.001);优450例,良33例,一般15例,差14例,优良率94.3％;术后复发11例,6例行二次椎间孔镜术,5例采取开放性手术;并发症:脑脊液漏4例,经平卧、补液等均治愈;肢体遗留麻木23例;有神经根损伤症状1例.[结论]该术式具有安全、精准、微刨、高效,初学者易掌握,术者不受X线伤害,减少髓核遗漏等优点.     

改良DHS手术治疗股骨粗隆间骨折

[目的]采用改良动力髋螺钉(dynamic hip screw,DHS)手术治疗股骨粗隆间骨折,分别和传统DHS、股骨近端髓内钉(PFN)相比较。[方法]对54例股骨粗隆间骨折患者采用改良DHS手术治疗包括术前重视骨牵引、术中内旋患肢、采用股骨近端后外侧切口、切断股外侧肌起点的方法。并和传统DHS组39例、PFN组33例相对照比较,得出术前骨牵引率、术中复位满意率、手术时间、出血量、优良率等多项观察指标的相关数据,并进行统计分析。[结果]54例获得13～28个月的随访,平均19.2个月。资料分析显示,DHS改良组和PFN相比较,在手术时间、失血量及愈后功能评价等方面无显著性差异;和传统组相比较,改良组可缩短手术时间、减少术中失血量并缩短切口长度。[结论]用改良后的DHS手术治疗EvansⅠ、Ⅱ型股骨粗隆间骨折有一定的临床应用价值。     

间接复位治疗胸腰椎爆裂型骨折术后椎管重塑形

目的观察后路椎弓根螺钉间接复位术后椎管形态面积的变化,探讨间接复位效果及术后椎管重塑形现象。方法 2003年5月～2010年9月,同组医师采用后路椎弓根螺钉间接复位治疗胸腰椎爆裂型骨折27例,其中L113例,L29例,L34例,T121例。美国脊髓损伤学会（American Spinal Injury Association,ASIA）分级D级13例,E级14例。术前、术后1周及术后1年取内固定行CT检查,测量伤椎平面的椎管面积及伤椎相邻上下椎管平均面积,计算伤椎椎管骨块占位率。比较术前、术后1周及术后1年椎管骨块复位程度。结果 27例患者均获得随访,13例术前D级患者均恢复到E级。术后1周CT复查显示椎管骨块占位率由术前（30.9±13.8）%减至（10.4±6.4）%,差异有统计学意义（P〈0.05）;术后1年椎管骨块占位率减至（6.3±3.9）%,与术后1周相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论后路椎弓根螺钉间接复位治疗胸腰椎爆裂型骨折能明显有效减少椎管内骨块占位率,经过术后1年重塑形椎管面积接近正常水平。     

Achillon微创跟腱吻合器治疗急性跟腱断裂的疗效观察

背景:急性跟腱断裂是一种常见的运动损伤,微创治疗由于其创伤小、并发症少等而日渐被关注。目的:观察应用Achillon微创跟腱吻合器治疗急性跟腱断裂的临床效果。方法:对2010年7月至2011年7月在我院采用Achillon跟腱吻合器治疗的21例急性跟腱断裂患者进行随访。男19例,女2例,年龄19～54岁,平均31.7岁。根据美国骨科协会足踝外科分会(AOFAS)标准评价踝关节功能;观察有无手术并发症,同时调查患者满意度。结果:21例患者均获得随访,时间12～24个月,平均18个月。所有伤口愈合良好,无感染、腓肠肌神经损伤、跟腱再断裂等发生。AOFAS标准评分为88～98分,平均为93.2分,患者满意度高。结论:Achillon微创跟腱吻合器能够有效治疗急性跟腱断裂,具有对合良好、对跟腱局部血供影响小、创伤小、功能恢复快等优点。     

Medpor植入术治疗萎缩性鼻炎的疗效分析

目的:探讨Medpor外科种植体鼻腔植入治疗萎缩性鼻炎(AR)的疗效分析。方法:选取38例萎缩性鼻炎的患者,行Medpor外科种植体经唇龈切口鼻底黏膜下填充术,对远期疗效进行观察。结果:38例经3-10年随访观察,治愈21例(55.3%),显效11例(28.9%),改善4例(10.5%),无效2例(5.3%)。本组病例总有效率94.7%。结论:Medpor外科种植体是治疗萎缩性鼻炎的理想材料。     

点状切迹压迫法在玻璃体基底部切割术中的应用

2002年8月～2004年12月,我们采用点状切迹压迫法在现代玻璃体视网膜手术中进行玻璃体基底部切割,效果满意.现报告如下.……