EGFR和PD-L1双靶向嵌合抗原受体构建及表达

目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力,抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv);人EGFR单克隆抗体杂交瘤系,经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体,使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染293V细胞,FACS测定CAR膜表达,ELISA检测CAR感染293V细胞培养上清中PD-L1-scFv表达情况,转染激活人外周血T细胞,验证CAR膜表达。结果:获得PD-L1抗体11E3,具备高度配受体封阻性能,经人源化改造后,亲和力稳定(2.67×10 -10 mol/L),EGFR-scFv获得有效表达。进一步构建了EGFR-CAR和PD-L1双修饰慢病毒分泌型CAR(CTC0537-1)及膜表达型CAR(CTC0537-2),其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后,细胞膜表面表达EGFR-scFv,检测培养上清存在PD-L1-ScFv;CTZ0431-2感染293V细胞后,细胞膜表面EGFR-scFv和PD-L1-scFv有效表达,双表达病毒感染活化T细胞的CAR表达率为39.3%。 结论:成功构建了EGFR-CAR和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体,EGFR-CAR中度结合亲和力,此为EGFR靶向和PD-L1抗体双修饰CAR-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。     

游离皮瓣移植对口腔颌面部恶性肿瘤切除术后组织缺损的修复效果观察

目的观察采用游离组织皮瓣移植对口腔颌面恶性肿瘤切除术后组织缺损的修复效果。方法对32例口腔颌面肿瘤切除术后的遗留创面采用游离组织皮瓣移植修补治疗。选取前臂皮瓣17例、股前皮瓣7例、腓骨皮瓣6例、背阔肌皮瓣2例。结果31例皮瓣移植成功,成功率为96．9％。术后发生血管危象2例,其中1例给予血管按摩并适当固定后危象解除,皮瓣恢复良好,另例抢救无效移植失败;发生感染2例、血肿1例,分别给予抗感染治疗及血肿清创止血处理后恢复良好。随访6～12个月,面部外观满意。结论采用游离组织皮瓣移植修复治疗口腔颌面恶性肿瘤术后组织缺损效果好、并发症少。     

口腔颌面部鳞癌颈淋巴清扫术后临床并发症的分析及对策

[目的]探讨口腔颌面部鳞癌患者在颈淋巴清扫术后出现的临床并发症及其治疗对策。[方法]2009年8月～2011年5月期间,某院口腔颌面外科共收治口腔颌面部鳞癌患者137例,回顾分析84例患者的临床资料,总结分析他们在颈淋巴清扫术后出现的临床并发症及其治疗对策。[结果]137例口腔颌面部鳞癌患者中,41例(29.9%)在颈淋巴清扫术后出现临床并发症,包括伤口感染13例(9.5%),副神经损伤9例(6.6%),涎瘘、面神经下颌缘支损伤、乳糜瘘各5例(3.6%),皮瓣坏死4例(2.9%)。经合适治疗后上述并发症的预后均较好。[结论]口腔颌面部鳞癌患者在颈淋巴清扫术后可出现多种并发症,但经及早治疗后仍然可控制。     

复方苦参注射液防治放射性口炎的临床研究

目的:观察应用复方苦参注射液防治放射性口炎患者的临床效果。方法:应用复方苦参注射液联合放疗的头颈部肿瘤患者30例,与单纯放疗头颈部肿瘤患者30例对照,比较两组患者口腔黏膜的溃疡表现及疼痛指数。结果:研究组患者的口腔黏膜破溃程度及疼痛指数均明显低于对照组,差异具有统计学意义。结论:复方苦参注射液预防用药可推迟放射性口腔炎的发生、改善其临床症状,是防治疗放射性口炎的有效方法。     

骨髓细胞白血病蛋白1长型高表达与恶性多形性腺瘤患者预后的相关性分析

目的研究骨髓细胞白血病蛋白1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)的两种异构体骨髓细胞白血病蛋白1长型(myeloid cell leukemia-1-long,Mcl-1L)和骨髓细胞白血病蛋白1短型(myeloid cell leukemia-1-short,Mcl-1S)在恶性多形性腺瘤(malignant pleomorphic adenoma,MPA)中的表达,并评估该类患者的预后。方法收集2011年6月至2017年7月开滦总医院、华北理工大学口腔医学院两院口腔颌面外科手术治疗并成功随访的MPA患者56例,良性多形性腺瘤患者52例,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法检测Mcl-1L和Mcl-1S在MPA中的表达水平,观察两者mRNA及蛋白表达水平,并与良性多形性腺瘤组织对比蛋白水平,分为高表达和低表达组,并经Kaplan Meier曲线分析总体生存时间,Log Rank检验比较组间差异。Cox多因素回归生存分析患者预后相关因素。结果qPCR分析显示与良性多形性腺瘤组织相比,Mcl-1L mRNA在66.1%(37/56)的MPA患者中呈高表达,Mcl-1L在腮腺、舌下腺及其他部位的MPA中mRNA表达水平(分别为2.21±1.07、2.12±1.08、1.83±0.81)均显著高于良性多形性腺瘤组织(1.00±0.19)(P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示,Mcl-1L在腮腺、舌下腺及其他部位MPA中的蛋白表达(分别为1.02±0.43、0.71±0.29、0.70±0.30)均显著高于良性多形性腺瘤组织(0.39±0.08)(P<0.01)。Mcl-1L高表达与肿瘤大小(P=0.002)、淋巴结阳性(P=0.045)显著相关。Mcl-1L高、低表达者的Kaplan-Meier生存曲线差异有统计学意义(P=0.017),Mcl-1L高表达患者的生存时间[(24.79±9.71)个月]显著短于Mcl-1L低表达的患者[(30.59±9.01)个月](P=0.017)。Cox多因素回归生存分析证实Mcl-1L高表达是患者预后不佳的独立危险因素。结论Mcl-1L高表达与MPA患者整体生存时间呈负相关。     

新型冠状病毒肺炎心肌酶学改变及其临床意义的研究

目的 分析COVID-19患者心肌酶学改变及其临床意义.方法 收集100例COVID-19患者的临床资料及心肌酶学结果,分析死亡组及存活组出现心肌酶升高的比例及差异.结果 部分患者出现了心肌酶学异常,CK升高34例(34％),CK-MB升高34例,LDH升高40例,AST升高27例,其中LDH在存活组中有32例升高,死亡组中有8例升高,其升高的比例死亡组高于存活组,差异具有显著的统计学意义.结论 新型冠状病毒肺炎患者存在心肌损伤,尽早识别有助于提高治愈率.     

移植受者耐药巨细胞病毒感染的诊治

本文总结了器官移植受者耐药巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)感染的诊治新进展, 包括针对CMV感染的防治药物、耐药CMV的诊断、诊治策略及免疫学治疗策略, 旨在为预防和治疗器官移植受者耐药CMV感染提供参考。