肝主疏泄与肝窦内皮功能关系探讨

肝主疏泄与解剖学之脑和肝脏功能相关,其调畅气机的功能与肝脏调节物质代谢(能量)、流动以及分布有关,肝窦内皮细胞窗孔构成的肝筛结构可能是肝疏布、宣泄气机及精微、毒物的超微结构。慢性肝病如慢性肝炎、肝纤维化和脂肪肝的病机多为肝失疏泄、由气及血、络脉瘀阻,表现为肝窦内皮细胞窗孔数量、结构及功能异常,引起微循环障碍。因此,肝窦内皮功能障碍可能是肝失疏泄之络病的病机关键,是肝主疏泄之络病理论新的假说。     

补阳还五汤对内皮型eNOS启动子活性的影响

目的:研究补阳还五汤含药血清对人内皮型一氧化氮合酶(eNOS)启动子活性的影响。方法:基因亚克隆方法构建pGL2 eNOS和pEGFP- 1 -eNOS质粒载体;应用jetPEITM转染内皮细胞ECV304,分别用HTS7000生化分析仪和荧光显微镜观察报告基因的表达。结果:含补阳还五汤及黄芪的血清均能增强 pEGFP -1- eNOS转染的内皮细胞的绿色荧光蛋白的表达,并能增强转染 pGL2- eNOS荧光素酶的表达。结论:补阳还五汤和黄芪可能通过增强内皮型eNOS启动子的活性、延缓内皮功能障碍的发生以防治动脉粥样硬化。     

慢性疲劳发生过程中小鼠血清皮质酮的动态变化

目的通过观察小鼠血清皮质酮（corticosterone,CorT）的动态变化,探讨在亚健康状态中慢性疲劳的发生发展机制。方法昆明小鼠120只,完全随机分为10组,分别为：正常对照0、4、9、16、23d组和模型：0、4、9、16、23d组,每组12只。正常组小鼠自由饮食,模型各组小鼠置于水深为0.5cm的塑料盒内18h/d。负7%体重力竭游泳以检测疲劳程度,放射免疫法检测血清CorT含量。结果正常组小鼠在实验过程中体重有上升的趋势但差异无统计学意义（P〉0.05）;游泳时间逐渐下降,从第9天起差异有统计学意义（P〈0.05）;皮质醇无明显变化（P〉0.05）。模型组小鼠随着造模时间的延长体重显著减轻（P〈0.01）;力竭游泳时间显著下降,第4天起差异有统计学意义（P〈0.01）;血清CorT第4天开始升高,第16天达分泌高峰（P〈0.01）,随后逐渐下降,但各时间点与正常对照组比较仍显著升高（P〈0.05）。结论随着小鼠疲劳的加重,血清CorT呈现出先升高后降低的动态变化,提示肾上腺皮质代偿性功能亢进后有功能衰退的趋势,可能是慢性疲劳发生发展及转归机制之一。     

雷公藤甲素抑制大肠癌细胞增殖的蛋白质组学研究

目的：利用蛋白质组学方法,比较雷公藤甲素作用于大肠癌SW480细胞以获得差异性蛋白质,从蛋白质组学角度评价雷公藤甲素对细胞的综合生物学效应。方法：培养SW480细胞,实验分为4组：DMSO 24h组（A组）,DMSO 48h组（B组）,TP 20nM 24h组（C组）,TP 20nM 48h组（D组）,进行双向电泳（2-DE）分离,用PDQuest7.1.0软件包进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱（MALDI-TOF）鉴定蛋白质。结果：获得5个同时满足下面3项条件的差异点：①C组与A组之间存在差异;②D组与B组之间存在差异;③D组与C组之间存在差异。其中3个蛋白经质谱鉴定为同一家族蛋白质：14-3-3蛋白β/α、14-3-3蛋白ε、14-3-3蛋白θ。结论：雷公藤甲素作用于SW480细胞的表达蛋白质组与DMSO培养组比较存在明显的差异;TP抑制大肠癌SW480细胞的药理作用,很有可能是通过14-3-3家族蛋白相互作用使细胞周期发生阻滞,使细胞生长增殖受到抑制。     

基于转化医学的中医研究生培养模式的探讨

中医研究生存在着基础研究课题与临床脱节,缺少原始创新能力等问题。转化医学可能是沟通中医研究生基础研究与临床的桥梁。以转化医学思想为指导,提升中医研究生研究起点、强化中医经典文献学习、强调以临床为中心的课题设计并以团队协作的转化医学研究模式开展研究,是一个逐步深化和强化研究生培养、提升中医研究生原始创新能力和提高中医研究生培养水平的过程。     

槐定碱对裸鼠移植性实体瘤SW480生长及p53、VEGF表达作用的研究

目的 探讨盐酸槐定碱对裸鼠移植性实体瘤SW480的作用及对p53和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 建立裸鼠移植性实体瘤SW480模型,观察在槐定碱作用下移植性实体瘤SW480的体积和质量,用免疫组化法、Western blotting、荧光定量PCR法检测秽植性实体瘤组织中p53、VEGF的表达.结果 槐定碱组裸鼠移植性实体瘤SW480的体积和质量、p53表达、VEGF表达均显著低于对照组,对移植性实体瘤抑瘤率为34.07%.结论 槐定碱对裸鼠移植性实体瘤SW480的生长有明显抑制作用,与抑制p53、VEGF表达相关.     

能量代谢重编程促进衰老-肿瘤发生的病机探讨

衰老促进肿瘤发生,衰老进程中线粒体损伤及其能量代谢障碍导致正气亏虚,脾肾亏虚则是因虚致癌的脏腑病机。线粒体与细胞核之间的信号传递和基因之间的协同表达是线粒体能量代谢调节的中心,体现脾肾相互滋生、共同扶助正气。辅活化因子如PGC-1α在衰老时功能失调,核-线粒体通讯功能障碍可能是脾肾亏虚能量代谢障碍的重要机制。衰老进程中NAD+水平日益降低,导致Sirtuins家族成员功能减退,上调HIF-1α,通过表观遗传修饰诱导假性缺氧、核-线粒体通讯障碍,产生以糖酵解为主的能量代谢重编程,即使不足以产生肿瘤,却是诱导肿瘤生长所必须。因此健脾补肾通过调节衰老进程中的表观遗传修饰,有可能延缓或者逆转"衰老-肿瘤发生"进程。     

雷公藤甲素对大肠癌细胞细胞周期的调控作用

目的:观察雷公藤甲素对大肠癌SW480细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:体外培养大肠癌SW480细胞,分别给予不同浓度的雷公藤甲素进行干预,采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度药物对SW480细胞生长的抑制率,流式细胞术(FCM)测定SW480细胞周期及凋亡率变化。结果:MTT实验结果显示当药物浓度在20～100 mol/L之间时,体外雷公藤甲素可明显抑制SW480细胞的生长;FCM检测显示药物作用后,细胞凋亡率没有明显变化,但是S期细胞数目显著增多,细胞周期受到明显阻滞。结论:雷公藤甲素对细胞生长有明显的抑制作用,呈现时效-量效关系,其机制可能是使细胞周期发生阻滞。     

甘蔗渣多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

目的 观察甘蔗渣多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响.方法 采用环磷酰胺(CY)造模法复制小鼠免疫抑制模型,测定甘草渣多糖对实验动物免疫器官重量指数、腹腔巨噬细胞的吞噬功能、迟发型变态反应(DTH)、溶血素(IgM)含量、溶血空斑形成、T细胞百分比和淋巴细胞转化.结果 小鼠灌胃剂量为200、400mg/(kg·d)的甘蔗渣多糖能显著提高免疫器官重量,增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能,提高DTH和促进IgM、溶血空斑形成并且增加T细胞百分比和淋巴细胞转化率.结论 甘蔗渣多糖有显著提高免疫抑制小鼠免疫功能的作用.     

生物素-亲和素介导以KDR为靶点的脂质体超声造影剂体外靶向实验研究

目的 以与VEGF的主要受体KDR特异性结合的小肽K237为配体研制靶向脂质体超声造影剂并进行体外性能鉴定.方法 采用"生物素一亲和素"桥接法构建靶向微泡(P-Bio-Av-Bio-Mbs),将KDR不同程度表达的细胞LOVO、HUVECs和LS174T分别与P-Bio-Av-Bio-Mbs孵育,同时另将荧光标记生物素-亲和素桥接靶向脂质体微泡(FITC- P-Bio-Av-Bio-Mbs)、荧光标记的单纯小肽微泡复合物(FITC-P-Mbs)及荧光标记的普通脂质体微泡(FITC-Mbs)分别与LOVO细胞孵育,光镜及荧光显微镜观察微泡与细胞结合的花环形成率及荧光强度;分别以10 ?g、50 ?g的小肽K237预先与LOVO细胞孵育,再将P-Bio-Av-Bio-Mbs与LOVO细胞孵育,观察细胞周围微泡分布.结果 KDR强阳性表达的LOVO细胞周围花环形成率高达90.52%,荧光强度3级,KDR阳性表达的HUVECs周围花环形成率53.46%,荧光强度2级,KDR阴性表达的LS174T细胞周围少数微泡黏附,花环形成率5.57%.荧光强度0～1级,组间花环形成率比较差异有统计学意义(P<0.05).FITC-P-Bio-Av-Bio-Mbs、FITC-P-Mbs及FITC-Mbs与LOVO细胞结合,花环形成率分别为89.62%、7.56%、0%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05),荧光强度分别为3级、0～1级、0级.10?g预处理组靶细胞周围花环结构明显减少,50 ?g封闭组靶细胞周围无花环形成.结论 以KDR为靶点携小肽K237的靶向脂质体造影剂通过生物素-亲和素桥介导成功制备,在体外能与靶细胞高效特异结合.针对KDR为靶点进行肿瘤新生血管分子靶向显像可能为肿瘤早期诊断提供新的思路.