基于实时荧光定量PCR技术的当归不同炮制品中金黄色葡萄球菌含量测定方法的开发及比较

目的:对当归不同炮制品中金黄色葡萄球菌的变化情况进行定量分析。方法:建立了实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR),对不同产地、不同收集企业、不同储藏时间当归饮片中金黄色葡萄球菌进行定量分析。荧光定量反应体系为SYBR Premix Ex Taq Ⅱ10μL,正向引物、反向引物(10μmol·L~(-1))各0.8μL,模板/基因组DNA 1μL,双蒸水7.4μL。荧光定量反应条件为①扩增曲线:94℃预变性30 s,94℃变性10 s,60℃退火12 s,72℃延伸30 s,循环45次,72℃单点检测信号;②熔解曲线:72℃开始检测,以0.5℃为台阶温度停留15 s采集荧光。根据Real-time PCR的测定结果,分别从生当归、酒当归和土炒当归中选择具有代表性的样品进行平板计数法测定,并与Real-time PCR检测结果进行比较。结果:不同炮制品中金黄色葡萄球菌含量排序为生当归土炒当归酒当归;在不同产地的当归饮片中均以甘肃渭源地区样品所含的金黄色葡萄球菌含量为最低;与零售企业相比,生产销售企业的生当归和酒当归中金黄色葡萄球菌含量较低;不同储藏时间对生当归和酒当归中金黄色葡萄球菌含量有一定的影响,随储藏时间的增加,金黄色葡萄球菌的含量增加。对部分代表性样品进行检测时发现,平板计数法检测结果数量级较Real-time PCR低3～4个数量级。结论:建立的Real-time PCR的特异性、灵敏度、准确性以及报告周期均优于平板计数法,可为当归不同炮制品中金黄色葡萄球菌的快速、准确定量检测提供有效技术手段。     

《世界华人消化杂志》参考文献要求

本刊采用“顺序编码制”的著录方法,即以文中出现顺序用阿拉伯数字编号排序.提倡对国内同行近年已发表的相关研究论文给予充分的反映,并在文内引用处右上角加方括号注明角码.文中如列作者姓名,则需在“Pang等”的右上角注角码号;若正文中仅引用某文献中的论述,则在该论述的句末右上角注码号.如马连生[1]报告……,研究[2-5]认为……;PCR方法敏感性高[6,7].     

基于PGMY09/11引物的PCR法检测高危型人乳头瘤病毒的方法评价

目的:探究基于PGMY09/11引物的PCR法检测高危型HPV的价值。方法:选择168例宫颈病变患者作为研究对象,进行基于PGMY09/11引物的PCR以及HCII检查,比较两种方法对高危型HPV的检出率、诊断符合率、特异度以及灵敏度。结果:基于PGMY09/11引物的PCR检测不同类型宫颈患者中高危型HPV阳性检出率以及总检出率于HCII检测结果相比没有明显的差异(P0.05);与HCII相比,PCR法阳性诊断符合率为94.64%,阴性诊断符合率为89.65%,Kappa值为0.794,一致性较好,检测的特异度以及灵敏度度明显的高于HCII检测,比较差异具有显著性(P0.05)。结论:基于PGMY09/11引物的PCR法在高危型HPV检测中与HCII检测具有一致的诊断率,以及更高的灵敏度、特异度。     

多重荧光PCR-熔解曲线法同时检测常见病原真菌方法学的建立及诊断价值

目的建立多重荧光PCR-熔解曲线法，并评价其同时检测假丝酵母菌、曲霉菌及新型隐球菌的诊断价值。 方法建立多重荧光PCR-熔解曲线法并对其检测体系进行优化。收集临床高度怀疑为侵袭性真菌感染（IFI）的各类临床样本179例，其中血液65例、深部痰液35例、尿液30例、脑脊液18例、胸腹水12例、肺泡灌洗液10例、新鲜肺组织9例。通过敏感性、特异性、重复性实验验证多重荧光PCR-熔解曲线法的检测性能，并应用受试者工作特征（ROC）曲线评价该方法的诊断效能。 结果建立的多重荧光PCR-熔解曲线法可同时检测8种常见病原真菌，包括4种假丝酵母菌（白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌）、3种曲霉菌（烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉）和新型隐球菌。其最低检测限为1 × 10⁴ cfu/mL，且常见细菌无扩增反应，重复性实验解链温度波动小于0.5 ℃。179例临床样本中，以培养法、镜检法、病理诊断等"金标准"方法诊断IFI阳性为112例，多重荧光PCR-熔解曲线法检测阳性为96例。多重荧光PCR-熔解曲线法同时检测假丝酵母菌、曲霉菌及新型隐球菌的敏感度为0.857，特异度为0.970，阳性预测值为0.980，阴性预测值为0.802，ROC曲线下面积为0.914，95%置信区间为0.868 ~ 0.959，P < 0.001。 结论本研究建立的多重荧光PCR-熔解曲线法可快速、准确、高通量同时检测假丝酵母菌、曲霉菌及新型隐球菌，对于IFI的早期诊断具有重要意义。     

数字PCR在新型冠状病毒检测中的应用

由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引发的新冠肺炎(COVID-19)疫情仍在全球肆虐。世界各国的科研人员都在尝试开发高度敏感的检测技术和消毒效果的评价方法,以便有效地诊断COVID-19阳性患者并将其隔离,以减少感染数量;快速评价疫源地环境和物品等消毒效果,以便指导科学精准消毒,缩短疫源地封闭时限。     

水蛭分子鉴定方法的研究进展

水蛭基原复杂、市场混乱、传统方法难以有效鉴别,临床用药的安全性无法保障。分子鉴定方法根据生物间的分子特征差异进行鉴定,不受自然环境、生长发育阶段等外部因素影响,具有快速、准确、客观的特点。目前应用于水蛭的分子鉴定方法有:基于核酸的RAPD技术、SSR技术、DNA条形码技术和基于蛋白质的SDS-PAGE技术、同工酶分析技术,本文在简述水蛭不同分子鉴定方法研究进展的基础上,对水蛭不同分子鉴定方法的技术和应用特点进行比较,最后对DNA宏条形码技术、Target-sequencing技术、电化学传感检测技术在水蛭混合物,特别是中成药中水蛭成分的鉴定进行展望,旨在为水蛭鉴定方法的深入研究提供参考和借鉴。