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31.
一种快速检测HBV基因的荧光定量PCR法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:利用二聚体蝎型荧光探针技术,建立一种能用于临床的快捷、敏感、特异、价格低廉的HBV实时荧光定量PCR检测方法。方法:根据HBV基因组保守区域precore/core设计二聚体蝎型荧光探针和引物,构建质粒标准品,优化荧光定量PCR条件,并进行方法学评价。结果:所建方法的检测范围为10^1~10^8 copies/μl,灵敏度达到10copies/μl,低拷贝样品的批内和日间重复性(CV)分别为1.71%和2.57%,高拷贝样品的批内和日间GV,分别为3.00%和3.86%。与商品化TaqMan试剂盒相比,本法阳性检出率较高,且检测时间缩短了45min(约减少1/3),成本降低50%。结论:成功建立了快速检测HBVDNA的二聚体蝎型荧光定量PCR方法,为研发适合临床应用的HBV基因定量检测试剂盒奠定了基础。 相似文献
32.
33.
实时定量PCR检测氟对软骨细胞COLⅨA3基因表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨氟对体外培养软骨细胞中COLⅨA3基因mRNA的表达影响。方法:采用SYBR GreenⅠ嵌合荧光法进行实时定量PCR的方法,检测不同剂量氟对体外培养软骨细胞中COLⅨA3基因mRNA的表达影响,染氟剂量分别为0、5、10、20、40mg/L,染氟10d。结果:实时定量PCR检测显示各组均可检测到COLⅨA3mRNA,相对定量比由对照组到高剂量组约为:100:134:200:104:129,染氟实验组中5mg/L、10mg/L组表达量高于对照组和40mg/L组,且以10mg/L组表达量最高,是对照组的2倍。随着染氟剂量增加,软骨细胞COLⅨA3基因mRNA表达量降低。结论:不同剂量氟对软骨细胞中COLⅨA3基因mRNA表达的影响不同,低剂量氟可以促进COLⅨA3基因mRNA的表达,随剂量增加氟的促进作用减弱。 相似文献
34.
目的利用实时定量PCR(RT-PCR)相对定量脂肪酸合酶(FAS)在口腔鳞癌、癌周以及正常口腔组织中的表达情况。方法切取口腔鳞癌患者新鲜手术标本的癌组织、癌周组织及正常组织,将组织切剪成碎块,提取细胞总RNA,经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录,实时定量PCR扩增,针对内参照GAPDH基因相对定量FAS的表达,比较FAS在3种组织中的表达。结果 FAS在癌组织中高表达,19例患者癌组织中的FAS mRNA表达水平皆高于正常组织,最高达16倍Go<0.001)。13例癌旁组织表达水平较正常组织高Go<0.001)。结论 口腔鳞癌组织和正常组织中的FAS表达有显著差异。实时定量PCR方法简便、快速、高效,并能相对定量内源性脂肪酸合酶在口腔鳞癌组织中的表达。 相似文献
35.
牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化过程中基因表达研究 总被引:4,自引:1,他引:4
目的:分离培养来源于人成体牙髓组织的干细胞(dental pulp stem cells,DPSC),分析研究其在未分化状态及在矿化诱导液中基因表型的变化:方法:采用胶原酶消化法获得人牙髓组织的单细胞悬液,14 d后挑取细胞克隆,分别在普通培养基和矿化诱导培养基中进行培养,利用RT-PCR,图像分析检测细胞基因表型变化。结果。未诱导的DPSC不表达牙本质特异性蛋白(dentin phosphprotein,DSPP)及骨涎蛋白(Bone sialoprotein,BSP),表达部分成骨(osteocalcin,OCN alkaline phsphatase,ALP)相关表型,低表达转录因子核心结合因子(Cbfa-1);与末诱导的DPSCs相比较,在成骨诱导中DPSCs表达DSPP和BSP,骨相关基因表达也相应上调。结论:DPsCs在矿化诱导液的作用下向成牙本质样细胞分化,其过程有可能是通过谱系特异表犁的表达或表达上调实现的。 相似文献
36.
聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)已广泛应用于致病微生物的检测。本文对应用 PCR检测牙周可疑致病菌的种类以及PCR的特异性、敏感性、多重PCR、定量PCR在牙周病原微生物检测中的应用进行了综述。 相似文献
37.
牙周致病菌在冠心病患者龈下菌斑中的分布 总被引:1,自引:3,他引:1
目的:分析牙周致病菌在冠心病患者龈下菌斑中的分布情况,及冠心病患者龈下菌斑中牙周致病菌的分布与慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)病变程度之间的关系。方法:收集44例患冠心病并伴有CP患者的龈下菌斑,采用Chelex-100法提取细菌DNA,以聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)、伴放线菌嗜血菌(Haemophilus actinomycetemcomitans,Ha)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)、中间普氏菌(Prevotella intermedia,Pi)、福赛斯坦纳菌(Tannerella forsythensis,Tf)五种牙周炎相关致病菌。结果:44例冠心病患者的龈下菌斑中各牙周致病菌的检出率分别为:Pg 19(43.18%)、Ha 9(20.45%)、Pi 27(61.36%)、Fn 38(86.36%)、Tf 41(93.18%);轻度CP患者1例,Fn 1例(100%);中度CP患9例,其中Pg6(66.67%)、Ha 2(22.22%)、Pi 7(77.78%)、Fn 9(100%)、Tf 8(88.89%);重度CP患者34例,其中Pg13(38.24%)、Ha 7(20.59%)、Pi 20(58.82%)、Fn 28(82.35%)、Tf 33(97%)。结论:Tf、Fn可能在冠心病的发生发展中起着重要作用,冠心病患者中CP的发病和进展可能有其特定的细菌学病因。 相似文献
38.
人牙胚釉原蛋白成熟肽基因的克隆 总被引:1,自引:2,他引:1
目的:克隆人釉原蛋白成熟肽编码区基因片断,并构建含有该基因的重组表达质粒。方法:从引产胎儿牙胚组织中抽提总RNA,以Oligo(dt)为引物,逆转录合成牙胚cDNA利用PCR,从cDNA中扩增出人釉原蛋白成熟肽编码序列(约540bp),所得目的基因片断插入表达载体质粒PQE30,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,抽提重组质粒DNA,通过PCR、酶切和核苷酸序列分析,鉴定阳性克隆。结果:样品质粒测序证实,质粒PQE30中插入的基因片段与人釉原蛋白成熟肽基因序列完全相同。结论:从人胚胎的牙胚组织中克隆到釉原蛋白成熟肽编码序列,成功构建含有人釉原蛋白成熟肽基因的重组表达质粒。 相似文献
39.
目的:构建牙本质涎蛋白(DSP)转基因小鼠,并对转基因表达进行初步RT-PCR分析。方法:将pcDNA3.1载体中的CMV启动子替换为启动子cβ-actin,构建载体pcDNA3.1-CX,然后将PCR获得的DSP基因编码序列克隆到pcDNA3.1-CX中,构建DSP转基因载体pcDNA3.1-CX-dsp;将线性化的载体DNA注射到小鼠受精卵的雄原核,将受精卵移植到假孕母鼠的输卵管。仔鼠出生后,用PCR及Southern印迹检测阳性小鼠,并用RT-PCR对其中一小鼠的F1代进行转基因表达分析。结果:共移植717枚注射过的受精卵至29只受体鼠,移卵后产仔67只,阳性4只。检测到53号小鼠F1代外源性DSP的表达。结论:通过显微注射方法,成功获得了DSP转基因小鼠,并证实外源性DSP可在53号小鼠F1代获得表达。 相似文献
40.
c血清型变形链球菌致龋相关基因/DNA片段的批量克隆与高通量筛选 总被引:2,自引:0,他引:2
目的筛选含致龋相关基因/DNA片段的阳性克隆,为探究变形链球茵致龋的分子机制奠定基础。方法将抑制消减杂交方法获得的高毒力株特异的消减PCR产物与T/A栽体pCR2.1连接,将连接产物转化E.coli TOP0F’感受态细胞,进行蓝白筛选。对96个转化子进行Colony PCR,将PCR产物点样于同一尼龙膜上,分别与地高辛标记的变形链球茵高、低毒力株基因组DNA/AluI酶切产物杂交,高通量筛选阳性克隆。结果随机挑取了96个白色或白色中央有蓝色的茵落,经过Colony PCR,其中有1个转化子的扩增产物为双带,其余均为0.2~2kb之间的单一条带。经过杂交,以与高毒力株基因组有杂交信号,而与低毒力株基因组无杂交信号或信号明显弱的转化子为阳性克隆。筛选的阳性率为50%左右,阳性克隆中含有c血清型变形链球茵致龋相关的基因/片段。结论对抑制消减杂交方法获得的变形链球茵高毒力株特异的消减PCR产物进行批量克隆和高通量筛选,获得了致龋相关的基因/DNA片段。 相似文献