舌癌细胞系T-TFL的建立和生物学性状检测

背景：基因治疗已成为恶性肿瘤研究领域的热点和发展趋势，但舌癌基因治疗的研究报道极少。目的：构建含相关死亡结构域蛋白(FADD)及肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)基因功能结构域的融合基因TFL，稳定转染入人舌鳞状细胞癌细胞系(Tca-8113)中，检测建系细胞T-TFL的生物学性状，探讨一种更有利于舌癌患者治疗期及治疗后期内生活质量的治疗手段。设计：以诊断为依据，前瞻性研究。地点和对象：实验在第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科完成，研究对象为人舌鳞状细胞癌细胞系(Tca-8113)，上海第二医科大学口腔医学院建系。干预：反转录PCR获得人FADD及TNFR1基因cDNA，重组PCR法构建含二者功能结构域的融合基因TFL，通过阳离子脂质体法稳定转染TFL基因入Tca-8113细胞中。主要观察指标：Westem blot检测融合蛋白TNFR1／DED表达，通过形态学观察、生长曲线等检测T-TFL细胞的生物学性状。结果：获得了人FADD及TNFR1基因并构建成功融合基因TFL，转染入Tca-8113细胞后，能表达融合蛋白TNFR1／DED活性，且T-TFL细胞与亲本Tca-8113细胞的生物学性状无明显差异。结论：T-TFL细胞能表达融合蛋白TNFR1／DED活性，可以为进一步深入研究舌癌基因治疗提供实验基础。     

对比硫化砷对两种白血病细胞株凋亡和hTERT-mRNA表达的影响

目的:对比硫化砷对慢性粒细胞白血病细胞株K562和急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4两种细胞的作用是否存在差异及其机制.方法:PCR-ELISA法测定端粒酶活性;半定量RT-PCR检测hTERT mRNA的表达;流式细胞术测量细胞周期、凋亡.结果:0.15～0.6 mg/L硫化砷(72 h)可在诱导NB4细胞凋亡的同时,下调细胞端粒酶活性和hTERT-mRNA表达,同样作用对于K562细胞需要硫化砷浓度达到0.3～3 mg/L.0.3 mg/L硫化砷(72 h)可引起NB4细胞出现G2/M期细胞比例增高.而K562细胞需要在1.5mg/L硫化砷诱导下出现G2/M期细胞比例增高.结论:端粒酶系统可能是硫化砷诱导NB4和K562细胞凋亡的途径之一;由硫化砷诱导的G2/M期阻滞可能与端粒酶活性的显著下降相关.NB4和K562细胞对硫化砷的敏感性存在明显差异,具体机制有待进一步研究.     

重组腺病毒介导的转录因子Runx3在神经胶质瘤细胞中的表达及其亚细胞定位

目的:制备含有融合Flag标签的Runx3基因的复制缺陷型重组腺病毒,感染神经胶质细胞瘤U251,观察外源Runx3在细胞中的表达及亚细胞定位.方法:用PCR的方法扩增Runx3基因,并将Flag标签蛋白的编码基因与RUNX3基因进行融合,构建腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-Runx3,经Kpn Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切鉴定并测序.利用电转化方法将经Pme Ⅰ线性化的pShuttle-CMV-Runx3穿梭载体导入BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒Ad-Runx3,再将经Pac Ⅰ线性化的Ad-Runx3重组病毒骨架质粒转染293A包装细胞,包装并扩增病毒.利用该病毒感染神经胶质细胞瘤U251,用免疫印迹法观察外源Runx3在细胞中的表达,用间接免疫荧光法观察其在细胞内的定位.结果:构建并包装表达Runx3蛋白的重组腺病毒,用重组腺病毒感染U251细胞后,经免疫印迹和间接免疫荧光法检测,可见外源导入的Runx3蛋白在细胞核内的特异性定位.结论:成功制备了含有融合Flag标签的转录因子Runx3基因的重组腺病毒,感染U251细胞,在细胞中观察到该分子表达后定位于细胞核中,为研究Runx3在神经胶质瘤发生中的作用奠定了实验基础.     

PTEN基因联合多西环素对黏液表皮样癌细胞增殖的影响

目的：探讨PTEN抑癌基因联合多西环素（Dox）对黏液表皮样癌细胞系增殖的影响。方法：用脂质体将野生型PTEN基因导人人黏液表皮样癌细胞系,再用不同浓度的多西环素处理细胞,采用MTT比色法测定细胞存活,应用HE染色判定细胞形态,用流式细胞仪检测细胞周期,用免疫组化染色检测细胞PCNA和EGFR蛋白表达。结果：PTEN基因转染联合Dox组癌细胞增殖抑制显著,细胞出现空泡变性和凋亡,多数癌细胞阻滞于G1期,癌细胞中PCNA和EGFR蛋白的表达显著减弱,比PTEN基因转染或Dox单用作用更强。结论：PTEN抑癌基因联合多西环素对黏液表皮样癌细胞系增殖具有显著的协同抑制效应。     

格列卫与六亚甲基二乙酰胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究格列卫和六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及周期蛋白表达的影响．方法：MTT法观察细胞生长指数和细胞存活率，流式细胞仪、电镜检测细胞周期和凋亡，半定量RT-PCR检测bcr-abl基因的表达，Western blotting检测蛋白表达．结果：联合应用两种药物后细胞存活率明显下降，凋亡比例略下降，细胞周期阻滞于G0／G1期，cyclinD1、cyclinE、cyclinA、CDK4、c-myc蛋白表达下调．结论：两种药物应用后出现细胞存活率下降、细胞周期阻滞、周期蛋白表达下调、凋亡比例下降，联合作用对细胞的增殖抑制具有协同作用，进入凋亡途径细胞减少。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571与P21WAF基因克隆治疗慢性粒细胞白血病的实验研究

本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂ST1571和P21^WAF基因克隆对慢性粒细胞白血病急变K562细胞株的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的治疗作用。RT—PCR扩增P21^WAF基因，胶纯化回收后连接到T载体测序，序列正确后构建P21—pcDNA3．1栽体，将P21—pcDNA3．1与空载体分别以脂质体转染入P21蛋白表达缺如的K562细胞，经筛选得到G418抗性的K562细胞株，Westernblot证实转染后有P21蛋白表达，MTT法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果表明：表达外源性P21蛋白的P21—pcDNA3．1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株，流式细胞仪显示G0／G1期细胞增多，MTT法显示P21—pcDNA3．1-K562细胞与ST1571联合应用后，与单用ST1571作用的K562细胞相比，凋亡细胞比例轻度减少，细胞存活率下降较慢。结论：表达外源P21蛋白能抑制K562细胞增殖，同时对ST1571的促凋亡作用有轻度抑制，并降低K562细胞对ST1571的敏感性。     

非霍奇金淋巴瘤继发骨髓纤维化的骨髓病理学特征及其与疾病预后的关系

目的:观察非霍奇金淋巴瘤(NHL)继发骨髓纤维化患者的骨髓病理学特征及其与疾病预后的关系。方法:回顾性分析2012年1月至2013年12月期间西安交通大学医学院第一附属医院血液内科收治的14例NHL继发骨髓纤维化患者的临床资料,观察继发骨髓纤维化患者的骨髓病理学特征,同时比较同期收住的未合并骨髓纤维化的30例NHL患者与继发骨髓纤维化患者间总生存率及无疾病进展生存率的差异。结果:继发骨髓纤维化的14例NHL患者均为Ⅳ期,其中9例为淋巴瘤细胞白血病,继发骨髓纤维化患者骨髓纤维组织不同程度增生,Gomori染色+至+++,经治疗后骨髓淋巴瘤细胞减少或成为增生性骨髓象时,Gomori染色转为阴性,疾病复发时再次出现骨髓纤维化。未继发骨髓纤维化的30例NHLⅣ期患者的1、3、5年总存率及无疾病进展生存率分别为100%、93.1%、57.6%和100%、92.6%、52.6%。继发骨髓纤维化的14例患者的1、3、5年总存率及无疾病进展生存率分别为92.9%、81.3%、48.8%和71.8%、62.3%、47.9%。结论:NHL继发骨髓纤维化患者多处于Ⅳ期,尤其是淋巴瘤细胞白血病患者中继发骨髓纤维化者多见。继发骨髓纤维化患者骨髓活检表现为纤维组织不同程度增生,疾病缓解时骨髓纤维化程度减轻或消失。继发骨髓纤维化的NHL患者总生存率及无疾病进展生存率较未继发骨髓纤维化患者降低,继发骨髓纤维化是疾病预后不良的指标之一。     

罗丹明123分离肝癌细胞系HepG2异质性亚群的鉴定

目的:建立分离肝癌细胞系HepG2中对罗丹明123(Rho123)染料具有不同排斥能力细胞亚群的方法,并探讨其在肝癌异质性研究中的意义.方法:利用流式细胞分选术(FCM)并结合不同浓度的Rho123染料,分析和分选肝癌细胞系HepG2细胞中具有不同染料排斥能力的肝癌细胞亚群,再通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法,以比较不同肝癌细胞亚群的差异.结果:根据不同染料排斥能力可以将肝癌细胞系HepG2细胞分为Rholow和Rhohigh2个亚群,2个亚群在倍增时间(16.9 h vs 24.7 h)、最大增生倍数(15.2 vs 12.3)、克隆形成率(50%vs 20%)以及甲胎蛋白(AFP)的表达(31/32 vs 20/26)以及裸鼠成瘤实验(7/10 vs 1/10)上具有显著性差异(均P＜0.01),Rholow亚群是具有干细胞特性的.结论:Rho123结合FCM可以富集具有干细胞特性的Rholow亚群,同时进一步证实肝癌的异质性.     

一种新的恒河猴T淋巴细胞活化抗原PTA1

实验动物、动物实验与医学研究和发展汤钊猷（上海医科大学附属中山医院，上海２０００３２）我是外科医生。由于参与和承担一些科研任务，在我大学毕业不久即与“实验动物和动物实验”打交道，至今整整４０年了。现在指导研究生，仍然离不开实验动物和动物实验。通过动...