利用基因表达连续分析技术构建肝癌HepG2细胞文库

目的 采用基因表达连续分析技术(serial analysis of gene expression,SAGE)建立肝癌HepG2细胞标签文库.方法 提取肝癌HepG2细胞总RNA,分离纯化得到mRNA,利用改进后的M-MLV RTasecDNA合成试剂盒合成生物素标记的双链cDNA;得到全长cDNA后,根据SAGE技术流程后续步骤,建立肝癌HepG2细胞标签文库.结合GenBank、UniGene文库分析标签代表的转录本,最终通过SAGE软件分析标签丰度.结果 15 586个标签中有14 181个获得稳定有效的扩增,长度在200～3000 bp.将获得的长片段进行序列分析后,2023个特异基因被发现.结论 用改进后的逆转录试剂盒可以较好地获得全长cDNA,为SAGE技术构建文库提供可靠的原料.借助SAGE技术建立的肝癌HepG2细胞标签文库,容量大、效率高,为后续基因研究搭建了良好的平台.     

大鼠肝癌细胞与胚胎肝细胞microRNA差异表达谱的研究

目的 建立大鼠肝癌细胞与大鼠胚胎肝细胞microRNA(miRNA)表达的差异谱,为研究miRNA在肝细胞癌变发生机制中的作用提供新线索.方法 化学致癌剂二乙基亚硝胺(DEN)建立近交系F334大鼠肝癌模型.体外原代培养大鼠肝癌细胞和正常F334大鼠胚胎肝细胞,Trlzol法抽提细胞总RNA,进一步制备Hy3荧光标记的miRNA;利用ExiqonmiRNA基因芯片技术.采用含2056条探针的哺乳动物miRNA表达谱芯片对两组之间差异表达的miRNA进行分析,其实验数据用SAM3.0软件进行差异显著性分析.结果 原代培养可获得稳定传代的肝癌细胞及胎肝细胞,两者在形态上无明显差异;miRNA芯片共获得78个差异表达的miRNAs,其中68个表达上调(foldchange>2),10个表达下调(foldchange<0.5),部分miRNAs与肿瘤关系密切,其中has-miR-21为肝癌癌变相关miRNA.结论 正常肝细胞中存在着与肝细胞癌变及侵袭、转移相关的miRNAs,miRNAs的表达具有明显的时序性,其表达特征的改变可能导致了肝癌的发生.     

罗丹明123分离肝癌细胞系HepG2异质性亚群的鉴定

目的:建立分离肝癌细胞系HepG2中对罗丹明123(Rho123)染料具有不同排斥能力细胞亚群的方法,并探讨其在肝癌异质性研究中的意义.方法:利用流式细胞分选术(FCM)并结合不同浓度的Rho123染料,分析和分选肝癌细胞系HepG2细胞中具有不同染料排斥能力的肝癌细胞亚群,再通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法,以比较不同肝癌细胞亚群的差异.结果:根据不同染料排斥能力可以将肝癌细胞系HepG2细胞分为Rholow和Rhohigh2个亚群,2个亚群在倍增时间(16.9 h vs 24.7 h)、最大增生倍数(15.2 vs 12.3)、克隆形成率(50%vs 20%)以及甲胎蛋白(AFP)的表达(31/32 vs 20/26)以及裸鼠成瘤实验(7/10 vs 1/10)上具有显著性差异(均P＜0.01),Rholow亚群是具有干细胞特性的.结论:Rho123结合FCM可以富集具有干细胞特性的Rholow亚群,同时进一步证实肝癌的异质性.     

大鼠肝硬化模型中小肝细胞分离培养方法的建立及其表型分析

目的：探讨体外分离培养大鼠小肝细胞（SHC）的方法，并对其进行表型鉴定。方法：利用二乙基亚硝胺饲喂法，建立SD大鼠肝硬化模型。采用改进后两步胶原酶灌注消化法分离细胞。光镜下观察细胞形态。电镜下观察细胞形态及超微结构。采用计数法测定细胞生长曲线，流式细胞术（FCM）测定细胞周期。通过免疫细胞化学染色法进行表型鉴定。结果：原代培养的大鼠SHC，24h内即可见贴壁伸展，48h左右克隆形成。光镜下可观察SHC核仁小而清晰，胞质少，细胞体积较小；电镜下可见SHC表面少量短而小的微绒毛突起，细胞体积小，核浆比例高，呈现未分化细胞的形态。免疫细胞化学染色显示SHC胞质AFP、CK-7、CK-8及CK-19呈棕黄色阳性信号。结论：改进后的两步胶原酶灌注消化方法能较容易地获得大量纯度较高的SHC。     

TURP术后排尿异常的原因分析

目的分析经尿道前列腺电切除术（TURP）后发生排尿异常的原因，提高TURP的治疗效果。方法回顾性分析TURP后发生排尿异常的102例患者临床资料，对TURP术后排尿异常进行多因素分析。结果102例患者中，尿道狭窄64例经尿道扩张及尿道狭窄切开治疗治愈；腺体残留12例，经再次TURP治疗治愈；膀胱功能异常26例，经非手术方法治愈。结论尿道狭窄、膀胱功能异常和腺体残留是TURP术后排尿异常的常见原因。     

急性大量艾司唑仑中毒6例救治及心理介入治疗体会

艾司唑仑又名舒乐安定，属于苯二氮卓类的新型抗焦虑药，为高效镇静催眠、抗惊厥药，广泛用于失眠、焦虑患者，此类药物主要作用于边缘系统，但若服用过量即可产生呼吸中枢抑制和循环衰竭而死亡。艾司唑伦口服吸收快，15～30min起效，1h血药浓度达峰值，常用剂量1～2mg／次，催眠2～4mg／次。我院急诊科收集2005年1月-2006年12月口服大剂量艾司唑伦的患者6例，     

252Cf中子腔内治疗复发性妇科恶性肿瘤五例分析

复发性妇科恶性肿瘤的治疗是一个非常棘手的问题,初次治疗时经过手术、放化疗的妇科恶性肿瘤患者出现肿瘤复发,大多数已经失去再次手术机会,再次放疗的效果也不甚理想.近年来,武装警察部队总医院肿瘤中心采用高线性能量传递(1inear energy transfer,LET)的252Cf中子腔内治疗复发性妇科恶性肿瘤,取得了一定的效果,现报道如下.     

直肠癌肝转移致胆道癌栓1例

1病例报告 患者男，汉族，51岁。主因“直肠癌根治术后3年，肝肺脑骨多发转移综合治疗后2月”于2007年9月8日收住入院。患者于2004年5月中旬无诱因出现大便次数增多，性状改变并时有血便。同年8月4日就诊于解放军总医院，行直肠镜检查，活检病理示：（直肠）中一低分化腺癌。