活态中医药传统知识数据库的构建与应用意义＊

目的 国家印发《关于促进中医药传承创新发展的意见》指出要依托现有资源建设国家和省级中医药数据中心，以信息化支撑中医药服务体系建设。本文提出活态中医药传统知识数据库的构建思路和具体实施，为推动中医药知识信息化和推广中医药保护提供参考。方法 主要采用文献分析法了解国外数据库进展，梳理国内中医药数据库运行经验，剖析活态中医药传统知识数据库的建设和运行的实际问题，明确数据库建设思路与意义。结果 国家利用资源建立中医药传统知识保护数据库，信息化在知识的保护和传承创新方面发挥一定的作用，但世界上许多传统知识较为丰富的国家和地区，如印度、韩国等已经走在在传统知识数据保护的前列，我国数据库建设和应用仍需要研究、探索和改善，中医药传统知识的保护和分类建设亟需加强，数据信息挖掘与共享合作等规范需要确立。结论 国家高度重视中医药的传承与发展，要以信息化支撑中医药传统知识体系建设，活态中医药传统知识数据库系统帮助数据信息收集整理的同时，也对中医药传统知识的专家人才队伍和技术标准化体系建设有积极作用，以及将来中医药行业规范化建设形成坚实的数据基础。     

高职学生职业类型选择数据仓库的研究与构建

针对高职院校对积累教务管理、就业跟踪调查、学生综合素质测评等数据与高职学生首次职业类型选择的决策分析和研究结果的愈加依赖,从高职学生职业类型选择的特点出发,应用数据仓库技术研究高职学生职业类型选择数据仓库的主题域、主题、数据组织等,确立数据仓库的组织结构并完成数据仓库ETL设计,为对高职学生职业类型选择深层分析做好了铺垫。     

护理服务中和谐医患关系的构建方式探讨

为改善护理服务过程中较为紧张的医患关系,探讨了医患关系的发展方向,从医疗体制、沟通方式、和信任程度等方面分析了在护理过程中医患关系不良的原因,并在此基础上,在医疗理念的转变、沟通机制的建立以及社会医疗体系的改善上对和谐医患关系的构建方式做出了建议。     

从地震伤员救护实践谈应急救灾体系灾害护理能力的建设

本文从5.12汶川地震和4.20芦山地震我院救护实践护理救护队员的组成、现场救护能力、伤员转运、心理干预等方面,结合国内外灾害护理能力建设的研究成果,分析灾害护理能力建设的框架,提出应急救灾体系灾害护理能力构建的思考,表明构建和培养一支高素质、专业化、优秀的灾害救护护理队伍非常必要。     

转移延迟退休人力资源构建养老服务保障体系

<正>伴随人口老龄化的加剧,一方面养老金"空帐",不得不用延迟退休的措施来弥补养老金缺口问题,但这一措施又遭受就业压力的困惑;另一方面,人口老龄化的加剧,推动我国养老服务需求迅速增长,养老服务资源供给严重不足,特别是社区家庭养老服务人力资源严重匮乏,成为制约我国养老服务事业发展的巨大障碍。笔者认为将延迟退休人力资源转移到我国养老服务人力资源体系之中,腾出他们的就业岗位,解决就业压力,同时又能构建我国养老服务(长期照护)保障体系。     

pT67M54稳定单克隆细胞株（系）的建立

将一个拟定的目的重组基因构建转染进入一个具有优异品质的包装细胞，建立组合特定目的基因载体的独一无二的稳定单克隆细胞株(系)是一项极为艰苦、富有挑战而又非常重要的工作。根据研究的需要，我们选择和决定将经过一再测试已成功表达的新构建质粒pM54转染进入pT67细胞以建立能生产逆转录病毒(含特异启动子及目的基因)的稳定单克隆细胞株(系)。     

变形链球菌葡糖基转移酶gtfB／CAT真核表达质粒的构建及表达

目的:构建变形链球菌葡糖基转移酶催化区(gtfB/CAT)真核表达质粒(pVAX1-gtfB/CAT),并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达.方法:通过基因重组技术构建pVAX1-gtfB/CAT;通过脂质体转染法,将其转染至COS-7细胞中,然后以免疫组化SABC法检测其在细胞中的表达.结果:pVAX1-gtfB/CAT经酶切分析证实携带gtfB/CAT片段;pVAX1-gtfB/CAT转染的细胞胞质呈褐色染色,pVAX1空质粒转染的细胞胞质中无着色.结论:成功构建防龋基因疫苗pVAX1-gtfB/CAT,所携带的基因序列正确,能够在真核细胞COS-7中正确表达目的蛋白.     

携带sbr基因的农杆菌二元载体系统的构建及稳定性分析

利用转基因植物生产防龋疫苗 ,其中一个主要的步骤是如何将目的基因转入植物组织中。对于双子叶植物番茄来说 ,农杆菌为载体的基因转移法是最合适的 ,因此本实验构建含ｓｂｒ基因的农杆菌二元载体系统 ,并分析质粒在农杆菌中的稳定性 ,为下一步植物遗传转化奠定基础。1 .材料和方法 :将质粒ｐＴＰ[1 ]与植物表达载体ｐＲＯＫⅡ分别用ＢａｍＨⅠ、ＫｐｎⅠ消化 ,分离回收所需片段 ,用Ｔ4ＤＮＡ连接酶连接 ,4℃ 2 4ｈ。利用碱裂解法提取质粒并酶切电泳鉴定 ,获得重组植物表达质粒ｐＲＯＰ。用ＣａＣｌ2 法制备感受态的农杆菌ＬＢＡ440 4 ,冻融…     

靶向人端粒酶反转录酶RNA干扰载体质粒的构建与筛选

目的:设计靶向人端粒酶反转录酶的RNAi序列,构建shRNA表达载体质粒和hTERT真核表达质粒,采用共转染工具细胞筛选出有效靶点.方法:首先以EASYMsiRNA软件针对hTERT设计5个靶点siRNA序列和1条通用阴性对照序列,合成shRNA oligo表达框架,将其分别连接至经酶切消化的载体质粒、pGCsi-U6/Neo/GFP、pGCL-GFP,重组质粒转化1)H5α,阳性克隆进行PCR与测序鉴定;然后从cDNA文库中利用PCR钓取hTERT基因片段,与表达载体pEGFP-C1分别进行双酶切、纯化及定向连接、重组、转化,阳性克隆行PCR与测序鉴定,荧光镜检GFP表达;最后上述2个质粒系统共转染293T细胞,Western印迹检测hTERT蛋白表达水平,筛选最有效序列.应用SPSS16.0软件包对所得数据进行单因素方差分析.结果:BLAST检索5条hTERT siRNA序列均能100%命中,且不与其他基因同源:PCR鉴定及阳性克隆测序验证shRNA oligo与载体质粒成功连接、重组.hTERT基因PCR钓取片段产物大小1.4 Kp,经酶切与质粒连接,形成pEGFP-C1-hTERT表达载体,阳性克隆PCR、测序鉴定确定成功重组;转染293T细胞48h时荧光镜F可观察到GFP标记的hTERT融合蛋白.hTERT表达质粒和shRNA载体质粒共转染293T细胞,48h时Western印迹榆测结果显示:实验各组hTERT蛋白量均有不同程度减少,而内参对照B-aetin和GAPDH尤明显变化.经β-actin校正,得到各组hTERT蛋向相对表达量:KD No.1-5实验组与NC组相比,hTERT基因表达均得到不同程度的敲减(54.61%～76.84%.P＜0.05),其中No.4敲减效能最高.结论:5条RNAi设计序列均可有效、特异性地沉默hTERT基因的转录和表达水平,其中以5'-GCAAGTTGCAAAGCArrGGAA-3'敲减效能最优;构建外源基因的过表达载体质粒转染工具细胞,可作为RNAi敲减效率筛选的验绩标靶.     

Research progress on hypoxia/reoxygenation model of nerve cells in vitro; [神经细胞缺氧／复氧体外模型的研究进展]北大核心CSCD

缺血性脑卒中是世界人口第二大死亡原因和第三大致残原因,发病率在全球范围内逐年增加。缺血性脑卒中经过血液再通治疗后会引起缺血/再灌注损伤,而缺血/再灌注损伤的机制目前仍不是十分明确,因此,构建具有其特性的临床前模型十分必要。鉴于动物模型研究的复杂性和体外脑切片培养的局限性,体外细胞模型成为了简化而有价值的工具。该文对目前常用的神经细胞以及缺血/再灌注体外模型的构建方法、构建原理及相关研究进展进行阐述,以期为合理选择缺氧/复氧细胞模型进行脑缺血/再灌注的基础研究与药物筛选提供参考和依据。