GM-CSF基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的：构建人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因的重组腺病毒载体，为进一步研究GM-CSF基因在肿瘤基因治疗中的应用提供实验基础。方法：采用PCR方法，从重组质粒pcDNA3．1-GM-CSF扩增出GM-CSF基因片段，通过穿梭质粒pShuttle，将带有CMV启动子的目的片段克隆入Adeno-X腺病毒DNA中，获得重组腺病毒DNA，通过脂质体转染HEK293细胞，经包装扩增后，获得重组腺病毒Adeno-X-GM-CSF，PCR鉴定，ELISA法检测表达产物。结果：含GM-CSF基因的重组腺病毒Adeno-X-GM-CSF构建成功，经PCR鉴定和DNA测序等证实了其正确性，重组腺病毒上清液中GM-CSF表达量达26ng／mL。结论：含GM-CSF基因的重组腺病毒构建成功。     

AIF重组质粒的构建、表达和功能的研究

目的构建人凋亡诱导因子(AIF)基因功能片段的真核表达载体pcDNA3.1( )AIF,并初步研究AIF在细胞凋亡中的作用。方法从人细胞中提取总RNA,RTPCR扩增AIF基因片段;克隆到pMD18T载体上,通过酶切和测序进行鉴定;将AIF基因片段插入pcDNA3.1( ),构建真核表达载体;电转化淋巴母细胞Raji细胞,观察AIF的表达水平和功能。结果成熟AIF蛋白分子在真核细胞中表达,并转移到细胞核中,诱导Caspase非依赖性细胞凋亡。结论成功构建了pcDNA3.1( )AIF真核表达载体,AIF在Caspase非依赖性细胞凋亡中发挥重要作用。     

为什么说"治血须治气",临床如何具体应用?

答:气与血的关系极为密切,气血之间,气为主导,在病理层次上是气浅而血深.     

高压氧治疗鼓膜内陷患者的护理

<正> 在高压氧(byper baro oxygen, HBO)治疗中,鼓膜内陷被列为相对禁忌症,影响了治疗。我们用HBO治疗鼓膜内陷150例,由于护理措施得当,取得了较好的疗效,具体护理体会如下: 一、资料与方法★临床资料2001年8月至2004年8月我院共收治鼓膜内陷患者150例,男女分别     

校企合作培养医药信息化人才的实践与探索

通过校企合作、资源共享、订单培养的模式来进行人才培养对高等院校现行的课堂教育模式及其质量具有很好的补充和提升作用。文章结合河南中医学院在医药信息化人才培养过程中的探索和实践,就校企合作进行人才培养的目标的确立、订单式人才培养课程体系的构建,校企合作的形式、内涵以及成效等进行了总结和探讨。实践表明,通过校企合作培养医药信息化人才可实现信息技术类专业学生从学习到就业过程中学生、学校、企业和社会“四位一体”通盘考虑,获得了最佳社会效益。     

“学科新探”专栏征稿启事

"学科新探"为本刊新开专栏,旨在反映现代科学理念、思维以及技术手段在传统中医药研究中的应用。现诚向广大专家、学者征稿,具体要求如下:1.选题要求:结合时代特色,对传统中医学发展提出的创新性思维,或采用现代医学理念研究传统中医学的新方法,或采用现代科技手段探索传统中医学应用的新领域。总之,既体现传统,又融合新知。内容可以涉及有关中医药各学科的不同研究方向。     

pEGFP-restin重组质粒的构建及其在BGC-803胃癌细胞中的表达

目的:构建一种含人肿瘤休眠蛋白基因(restin)的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在胃癌细胞中的表达,为探讨其抗肿瘤作用的分子机制打下基础.方法:从人胚肾组织中,以RT-PCR方法扩增restin基因片段,将restin片段和增强型绿色荧光表达质粒pEGFP-C1酶切、纯化、连接、转化、筛选,构建pEGFP-restin重组质粒,转染胃癌细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达,并对表达产物进行Western blot鉴定.结果:RT-PCR产物经琼脂糖电泳,在预期位置(600 bp)处阳性条带表达;重组载体经酶切分析,插入片段表达restin基因;pEGFP-restin重组质粒成功转染胃癌细胞,在荧光显微镜下强绿色荧光蛋白表达,Western blot鉴定结果显示pEGFP-restin上的restin基因在BGC-803细胞中正确表达.结论:成功构建了pEGFP-restin重组质粒,为进一步研究restin的功能提供了重要的实验材料.     

人源甲状腺髓样癌噬菌体抗体库的构建及初步鉴定

目的：应用噬菌体抗体展示技术,构建大容量天然人源甲状腺髓样癌（medullary thyroid carcinoma,MTC）噬菌体单链抗体库。方法：提取ＭＴＣ病人癌周淋巴结总RNA,通过RT-PCR方法获得抗体可变区基因VH和VL基因片断,以它们为模板分别扩增VH-Linker和VL-Linker,再用剪切重叠延伸ＰＣＲ技术将之拼接组装成单链抗体可变区基因片段（single chain fragment variable,scFv）后引入酶切位点SfiⅠ和NotⅠ。将scFv基因克隆入噬菌粒栽体pCANTAB-5E后经电转入大肠杆菌Ecoli TG1,之后经辅助噬菌体M13K07超感染,构建人源MTC噬菌体单链抗体库。PCR鉴定scFv片段阳性插入率,1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆双酶切产物。结果：MTC周围淋巴结总RNA的琼脂糖电泳结果可见清晰的28 S、18 S条带;VH基因的大小约为370 bp,VL基因为350 bp,组装后的scFv基因约为750 bp。用pUC19标准质粒测定转化效率达到108 cfu/μg,scFv的阳性插入率为87.5％（21/24）。结论：成功地构建了人源MTC噬菌体展示文库,为进一步筛选具有MTC细胞特异性的人源噬菌体单链抗体奠定了实验基础。     

口腔健康素养测量工具的构建及验证

目的:构建口腔健康素养(Oral Health Literacy,OHL)测量工具,并对其进行信度和结构效度检验,为我国居民口腔健康素养评估提供科学工具.方法:采用方便抽样方法,于2020年3月-4月选择山西省太原市小店区某社区的常住人口为调查对象,通过文献查阅、专家咨询和认知访谈,形成口腔健康素养测量工具.采用SPS...     

亚健康状态预警指标体系构建设想

亚健康状态在人群中具有较高的发生率,严重威胁着人们的健康,如何进行预警一直是人们关注的焦点.初步提出从亚健康状态的危险因素、临床表现、实验室监测指标、量表和问卷评价指标、中医证候等方面构建亚健康状态预警指标体系的设想.