介导hyrdC基因重组腺病毒对胃癌SGC-7901细胞生长影响的实验研究

目的观察介导hyrdC基因重组腺病毒对胃癌细胞生长的影响。方法将已构建的Ad-hyrdC重组腺病毒转染人胃癌SGC-7901细胞,并设置Ad-LacZ组以及空白对照组,免疫组化法检测hyrdC蛋白在胃癌SGC-7901细胞中的表达情况,采用绘制生长曲线法和MTT法观察和比较各组胃癌细胞的生长差异,将各组胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型以比较各组瘤体大小的差异。结果绘制生长曲线显示Ad-hyrdC组胃癌SGC-7901细胞生长显著增快,从48h后其细胞数与空白组以及Ad-LacZ组均有统计学差异(P<0.05),而Ad-LacZ组细胞与空白组无统计学差异(P>0.05);Ad-hyrdC组细胞MTT值显著高于Ad-LacZ组以及空白组(P<0.05),Ad-LacZ组与空白组无统计学差异(P>0.05);而Ad-hyrdC组胃癌瘤体与Ad-LacZ组及空白组胃癌荷瘤模型瘤体大小之间无统计学差异(P>0.05)。结论 hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,hyrdC基因有可能成为胃癌基因治疗领域的新靶点。     

可降解外套管抑制自体移植静脉内膜增生的研究

目的:研究可降解的外套管束缚自体移植静脉对减轻桥静脉内膜、中层增厚的作用,探讨其防止或延缓桥静脉再狭窄的机制。方法:建立犬自体股静脉至股动脉的端-端静脉移植模型,其中一侧桥静脉外加聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)做成的圆柱形外套管(外套管组),对侧单纯静脉移植作为对照组。超声多普勒观察在体移植血管的通畅性。术后2、4、6、8、24周再次手术取桥静脉。光镜观察移植静脉中段内膜、中层厚度,胶原、弹力纤维变化;透射电镜观察静脉壁基底膜、细胞排列、细胞增殖、凋亡,细胞骨架结构,细胞外基质(ECM)变化等;免疫组化观察静脉壁细胞增殖、凋亡及分布。结果:术后40条静脉均通畅,吻合口无狭窄。对照组术后2周见内膜、中层增厚;随时间延长,增厚更加明显。外套管组术后2周内膜、中层稍增厚;4~24周持续增厚,但各时间点均明显小于对照组(P<0.05,P<0.01);对照组术后2周见中层平滑肌、外膜弹力纤维断裂严重,而外套管组无明显断裂。新生静脉内膜由平滑肌细胞(SMCs)和大量ECM构成,中层主要为SMCs和ECM;术后2周,静脉壁细胞增殖和凋亡率都较高,主要分布在内膜和中层,外套管组明显低于对照组(P<0.01),4周以后两者显著下降,凋亡率高于增殖率(P<0.05)。结论:可降解外套管在术后早期可保持静脉结构的完整性,减轻管壁结构破     

风心病慢性房颤心房连接蛋白表达与AERP的相关性研究

目的:通过检测风心病慢性房颤患者左、右心房缝隙连接蛋白Cx40和Cx43表达及相应部位的心房有效不应期(AERP)研究两者之间的相关性,探讨Cx40和Cx43对慢性房颤左、右心房电生理特性的影响. 方法:29例风心病伴或不伴慢性房颤的患者,共分2组:窦性心律组(SR组,n=13),慢性房颤组(CAF组,n=16),另取6例非风心病作为正常对照组.在行二尖瓣置换术时,采用心外膜标测技术测定左、右心房的AERP,并在相应部位切取心房组织,通过Western印迹法检测左、右心房肌Cx40和Cx43的表达,同时对两者行相关性分析. 结果:CAF组患者左、右心房Cx40的表达和AERP较SR组有明显下降(P<0.05),而Cx43无明显变化;左心房后壁Cx40的相对表达量与AERP呈明显正相关(r＝0.762,P<0.01),而Cx43与AERP无明显相关.SR组中,Cx40和Cx43均与AERP无明显相关.结论:在风心病慢性房颤心房中,Cx40表达下调参与慢性房颤的心房重构,并影响心房的电生理特性,提示Cx40的表达对风心病慢性房颤的发生和维持具有重要的作用.     

重组纤维连接蛋白羧基端细胞结合域对骨髓基质干细胞黏附力的影响

目的:研究增强骨髓基质干细胞黏附力的方法.方法:去细胞猪主动脉瓣叶分别用纤维连接蛋白(Fn)和重组纤维连接蛋白羧基端细胞结合域(FnCTD64)及牛血清白蛋白(BSA)浸泡预涂处理12 h,对照组未预涂蛋白.采用间隔24 h、3次种植的方法种植骨髓基质干细胞(BMSCs),于种植后第8天进行细胞计数及MTT法检测比较去细胞瓣叶上黏附、增殖的细胞数量,同时取瓣叶进行组织学检测观察瓣叶表面BMSCs覆盖情况.结果:采用预涂Fn和FnCTD64后的去细胞猪主动脉瓣叶,预涂Fn组的细胞计数为(9.085±0.622)×104,MTT的吸光值为0.537±0.022;预涂FnCTD64组的细胞计数为(9.111±0.607)×104,MTT的吸光值为0.540±0.025;预涂BSA组的细胞计数为(4.593±0.464)×104,MTT的吸光值为0.360±0.018;对照组的细胞计数为(4.460±0.441)×104,MTT的吸光值为0.353±0.019;前两组明显高于后两组(P<0.01).预涂Fn组和FnCTD64组无显著性差异.瓣叶经H-E染色,可见预涂Fn和FnCTD64组细胞覆盖情况优于预涂BSA组和对照组.结论:Fn和FnCTD64能明显增加BMSCs在去细胞猪主动脉瓣叶表面的黏附和增殖.     

Ad.VEGF转染自体骨髓基质细胞移植治疗猪慢性缺血性心脏病

目的:探讨小鼠胎肝组织中干细胞抗原-1阳性的细胞(Sca-1 细胞)向心肌细胞分化的潜能.方法:取妊娠14.5 d的小鼠胎肝,制作细胞悬液,用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca-1 细胞,PCR鉴别Y染色体性别决定区域(Sry)基因序列;将2×103个雄性小鼠Sca-1 细胞输注给经致死剂量50C0(10 Gy)全身照射的雌性小鼠体内,于移植后2个月,处死受体小鼠,取心肌组织固定、制片,免疫组织化学染色和荧光原位杂交检测雌性受体小鼠心肌组织内供体小鼠胎肝Sca-1 细胞向心肌细胞分化的情况.结果:在受体小鼠心肌组织内发现存在Y染色体阳性的供体来源的细胞,呈现心肌组织的部分特征,表型为Desmin /Flt-1-/CD45-/F4-/80.结论:小鼠胎肝Sca-1 细胞(其中绝大部分是造血干细胞)具有向心肌组织细胞分化的潜能.     

食管肿瘤干细胞的分选及鉴定的实验研究

目的 进行人食管肿瘤干细胞(CSCs)的分选及鉴定.方法 通过获取人食管癌标本进行肿瘤细胞的培养,应用流式细胞仪检测p75NTR在人食管肿瘤细胞(ECCs)中的表达,应用磁珠分选法(MACS)进行p75NTR阳性细胞与阴性细胞的分选,研究p75NTR阳性细胞的增殖、分化、软琼脂集落形成能力,并进行裸鼠接种以观察其致瘤能力.结果 在8个食管肿瘤细胞系(株)中,除SHEC-1、SHEC-5未检测到p75NTR阳性细胞外,其余6个细胞系(株)中检测到p75NTR阳性细胞为0.32%～3.35%.MACS分选后的p75NTR阳性细胞的增殖能力明显强于阴性细胞[群体倍增时间分别为(17±3)h、(37±7)h,P<0.01];p75NTR阳性细胞具有分化产生其他表型细胞的能力;p75NTR阳性细胞在软琼脂中的集落形成能力(45.9%±8.9%)显著高于阴性细胞(3.7%±2.1%),P<0.01;行裸鼠接种时,p75NTR阳性细胞表现出较强的致瘤性,SHEC-7细胞只需2×103个即可致瘤,其致瘤能力是未分选细胞的50倍.结论 人ECCs中p75NTR阳性细胞具有自我更新、分化、增殖能力,并具有较强的致瘤能力,p75NTR阳性细胞具有CSCs的特性.     

二尖瓣脱垂综合征的发病机制的研究进展

二尖瓣脱垂综合征又称为二尖瓣黏液变性或二尖瓣退行性变,是一种常见的心脏瓣膜病,主要特征是二尖瓣瓣叶冗长、松弛,在心脏收缩期脱垂进入左房,可伴有(或不伴)二尖瓣反流.病理改变为瓣叶海绵层内过量黏液样物质沉积及纤维层破坏、胶原溶解导致的瓣膜机械结构及完整性缺失.     

人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架构建的组织工程心脏瓣膜**☆

背景：去细胞处理的猪主动脉瓣膜植入人体后发生了免疫排斥反应,分析引起免疫排斥反应的原因是由于猪瓣膜的细胞外基质与宿主发生接触引起了免疫激活。 目的：试图将人自身的细胞外基质履盖去细胞猪瓣膜表面起到隔离猪瓣膜与宿主血液成分接触的作用。同时应用免疫组化的方法验证人细胞外基质覆盖瓣膜的效果。 设计、时间及地点：观察性实验,于2008-08/2009-04在解放军第二军医大学长海医院胸心外科实验室完成。 材料：新鲜猪心脏瓣膜取自上海五丰上食肉联厂,采用酶消化法将猪主动脉瓣叶行脱细胞处理。密度梯度离心法从健康志愿者骨髓中获取骨髓基质干细胞。 方法：用人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架来构建组织工程瓣膜,再应用前期制备的抗人细胞外基质单克隆抗体,采用免疫组织化学染色鉴定人细胞外基质在体外构建的组织工程瓣膜上的黏附情况。以未构建的去细胞猪瓣叶为对照组。 主要观察指标：①组织工程瓣膜上种子细胞的黏附和生长情况。②免疫组织化学法检测人细胞外基质在瓣膜上覆盖的效果。 结果：光镜下观察瓣膜表面均形成了细胞层。扫描电镜所见细胞排列欠规则,未完全覆盖去细胞瓣叶表面,可见裸露的瓣膜支架。免疫组织化学方法检测构建的瓣膜表面呈阳性反应证明有人的细胞外基质黏附,而对照组呈阴性证明了检测方法具有特异性。 结论：体外构建的组织工程瓣膜上检测到有人的细胞外基质黏附。 关键词：组织工程心脏瓣膜;细胞外基质;黏附     

血管内皮生长因子与缺血心肌治疗性血管新生

缺血性心脏病在西方国家是发病率和死亡率均占主导地位的疾病，全球大约有数亿缺血性心脏病患者。冠状动脉血流灌注不足导致相应心肌缺血缺氧是进展期缺血性心脏病的主要问题，因此合理的治疗策略是增加冠状动脉的灌注。目前而言，传统的血运重建治疗包括冠状动脉搭桥术（CABG）和经皮腔内冠状动脉成形术（PTCA）对多数患者可以增加冠状动脉灌注，基本实现治疗目的，但对冠状动脉纤细和病变弥散的患者这些治疗手段则难以奏效。     

脉动应力预适应对组织工程心脏瓣膜内皮细胞整合素β1表达的影响

目的：探讨脉动应力预适应对构建的组织工程心脏瓣膜（TEHV）内皮细胞整合素β1表达的影响。方法：猪主动脉瓣膜经胰酶-EDTA、表面活性剂、核酸酶处理，去除猪主动脉瓣叶的细胞成分，将扩增的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）种植在瓣叶上，体外静态构建TEHV。实验分为脉动应力预适应组、未预适应组和静态对照组。采用直接计数法、MTT法检测内皮细胞数，半定量RT-PCR检测内皮细胞整合素β1 mRNA的表达，Western blot检测内皮细胞膜上整合素β1蛋白的表达。结果：猪主动脉瓣膜中的细胞成分能完全去除，获得完整无细胞的纤维网状支架，静态条件下成功构建TEHV，高流量流体冲刷试验后，脉动应力预适应组TEHV内皮细胞仍有超过1／3的细胞残留。脉动预适应组瓣膜内皮细胞整合素β1 mRNA和蛋白的表达上调。结论：脉动应力预适应增强了TEHV内皮细胞的黏附功能，其可能的分子机制是通过整合素β1信号通路实现的。