血管内皮生长因子基因转染内皮祖细胞移植于大鼠缺血心肌的研究

目的:将编码有血管内皮生长因子基因的腺病毒(Ad.VEGF)转染诱导培养的骨髓内皮祖细胞(EPCs),移植于大鼠缺血心肌,评价其对心功能的保护和促血管再生作用。方法:Ficoll离心分离大鼠骨髓单个核细胞,诱导培养EPCs;在50倍的转染倍数(病毒数/靶细胞)下,用Ad.VEGF转染诱导的EPCs。然后将其移植于结扎冠状动脉前降支的Lewis大鼠缺血心肌内(组Ⅰ),同时设置单纯细胞移植组(组Ⅱ)和基因治疗组(组Ⅲ),以注射磷酸盐缓冲液的大鼠为对照组(组Ⅳ)。术后4周通过血流动力学指标评价其对心功能的保护作用;另外通过免疫组化染色观察移植细胞存活、分化和血管再生情况。结果:骨髓EPCs移植于缺血心肌4周后,缺血区的移植细胞部分分化为血管内皮细胞,组Ⅰ心功能明显好于组Ⅱ、组Ⅲ和组Ⅳ(P<0.01),在促血管新生方面,组Ⅰ也明显优于以上3组[组Ⅰ(32.2±3.5)、组Ⅱ(17.6±2.7)、组Ⅲ(19.4±3.3)、组Ⅳ(5.9±1.2)个/高倍视野]。结论:转染Ad.VEGF后的EPCs移植于缺血心肌后,可促进缺血心肌再血管化,更好地保护和改善心脏功能。     

腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子对慢性缺血冬眠心肌的保护作用

目的探讨重组腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对慢性缺血冬眠心肌的保护作用。方法制备猪慢性缺血冬眠心肌模型,并随机分为3组,分别心内注射腺病毒介导的bFGF(AdbFGF组)、空病毒(空病毒组)和生理盐水(空白对照组),每组7头猪,观察心肌间质胶原容积分数、心肌细胞核密度、核长度、心肌细胞直径以及心肌细胞增殖活性和凋亡的改变。结果与空病毒组和空白对照组比较,AdbFGF组冬眠心肌处心肌细胞直径和核长度明显增加,而心肌细胞核密度明显降低。而且心肌细胞的增殖活性增高,凋亡减少。结论bFGF一方面诱导心肌细胞增殖分裂,促进冬眠心肌细胞肥大;另一方面抑制细胞凋亡,减少冬眠心肌的损伤。     

人血管生成素相关蛋白2重组腺病毒体外转染对小鼠毛细血管内皮细胞分化的作用

目的研究血管生成素相关蛋白2重组腺病毒(Ad．ARP2)体外的转染效率、产物表达和其表达产物对血管内皮细胞分化的作用。方法体外培养扩增ICR小鼠心脏冠状动脉毛细血管内皮细胞(CMECs),通过免疫荧光染色评价人腺病毒转染CMECs的转染效率;应用Western blot和ELISA方法检测ARP2在细胞的内表达和分泌,并分别与对照组[空病毒载体(Ad．Null)组和PBS组]比较。观察种植在Matrigel凝胶上分别转染Ad．ARP2和Ad．Null的CMECs的生长状态。结果腺病毒转染倍数为200时,转染效率为93．5％,且对细胞生长无影响。Ad．ARP2转染CMECs后有ARP2蛋白表达,ELISA检测第1、2、3、5、8 d的ARP2分泌量分别为76．0±1．7、490．1±9．5、389.6±2．5、240．1±1．1、73．4±1．3 pg／ml,而对照组未检测到有ARP2蛋白表达和分泌。含有ARP2的培养上清能促进血管内皮细胞分化。结论腺病毒可以安全、有效地转染CMECs,其携带ARP2基因可获得高水平表达,并能促进血管内皮细胞分化。     

心房颤动患者心房肌组织醛固酮水平和CYP11B2基因与心房结构重构研究

目的探讨心房颤动（房颤）患者心房肌组织醛固酮水平和醛固酮合成酶基因CYP11B2mRNA表达与房颤时心房结构重构的关系。方法入选进行人工心脏瓣膜置换术的风湿性心脏瓣膜病患者25例，其中窦性心律者12例，慢性房颤（≥6个月）者13例。上述患者均于术前行经胸超声心动图检查并留取相关资料，于手术时同时取左右心房侧壁组织。用放射免疫法测定心房组织醛固酮水平；用VG染色法对胶原容量分数（CVF）半定量分析；实时荧光定量PCR测定CYP11B2mRNA在心房肌组织中的表达情况。结果与窦性心律组比较，房颤组左心房内径显著扩大（P〈0．01）；心房肌组织醛固酮水平和CVF均明显增加（P均〈0．001）；心房肌组织CYP11B2mRNA表达也明显增加（P〈0．001）；上述指标无论是在窦性心律时还是在房颤时其在左右心房之间差异无统计学意义（P均〉0．05）。CVF和左心房内径显著正相关（r=0．845，P〈0．001）；心房组织醛固酮水平与左心房内径（r=0．814，P〈0．001）和CVF（r=0．885，P〈0．001）均呈明显正相关；CYP11B2mRNA表达量和CVF亦呈明显正相关（r=0．757，P〈0．001）。结论心房颤动时心房结构重构与其组织醛固酮水平增加和CYPI1B2mRNA表达增加有关，醛固酮受体拮抗剂可能在阻止房颤的心房结构重构进程上发挥治疗作用。     

p75NTR阳性人食管鳞癌细胞的干细胞特性研究

目的探讨p75NTR阳性人食管鳞癌细胞的干细胞特性。方法取15例新鲜人食管鳞癌组织制成单细胞悬液,分别获取p75NTR阳性和p75NTR阴性细胞,进行Transwell侵袭试验、耐化疗药物试验及裸鼠成瘤试验。结果15例新鲜人食管鳞癌组织中有7例发现p75NTR表达,其阳性表达率最高为10.37%,p75NTR阳性和p75NTR阴性细胞在侵袭性、对化疗药物的耐受能力及致瘤能力上差异有统计学意义。结论 p75NTR阳性较p75NTR阴性食管鳞癌细胞具有更强的侵袭性、耐化疗能力及致瘤能力,可能富集人食管鳞癌干细胞。     

核转录因子κB对羊缺血预适应心肌细胞凋亡的影响

2003年1月至2004年3月,本研究对特异性核转录因子кB(NFκB)抑制剂脯氨酸二硫氨基甲酸酯(ProDTC)对缺血预适应(IPC)心脏保护效应的影响进行观察,并从细胞凋亡角度探讨NFκB在IPC中的作用。材料与方法1.动物分组:健康山羊18只(第二军医大学实验动物中心提供)均为雄性,体质量(29±3)kg,分为缺血再灌注(IR)组、IPC组及IPC+ProDTC组,每组6只。(1)IR组:建立体外循环,行体外循环1h后阻断上、下腔静脉,主动脉阻断后经主动脉根部灌注冷晶体停搏液使心脏停搏并间断顺灌行心肌保护,主动脉阻断60min后开放主动脉,心脏恢复血液灌注(再灌注)…     

反义血管内皮生长因子腺病毒基因感染对类风湿关节炎滑膜细胞VEGF基因转录的影响

目的 观察反义血管内皮生长因子(VEGF)165腺病毒对滑膜细胞VEGF基因转录的影响。方法 将反义VEGF165腺病毒转染滑膜细胞，通过Northern-blot的方法检测其对VEGF的基因转录的影响。结果 Northem杂交结果显示：反义基因转染滑膜细胞3d后，VEGF165基因的转录即受到明显抑制，4d抑制更加明显，5d后几乎检测不出阳性杂交信号。结论 反义VEGF165腺病毒感染滑膜细胞后可以阻断VEGF基因的转录过程，从而抑制VEGF蛋白质的翻译和表达。     

TGF-β1与缺血再灌注心肌细胞凋亡的关系

取新生SD大鼠心肌细胞,随机分为四组：①正常对照组（A组）：在不含处理因素的含10%胎牛血清DMEM培养基中置37℃、5%CO2、95%空气培养箱培养48h;②缺血再灌注诱导凋亡模型组（B组）：在不含血清的低糖DMEM培养基,三气培养箱中培养48h后,置10%胎牛血清DMEM培养基,37℃、5%CO2、95%空气培养箱中培养3h;③转化生长因子（TGF）-β1干预组（C组）：在不含血清的低糖DMEM培养基加入TGF-β1（5ng/ml）,先于三气培养箱中培养48h后,置10%胎牛血清、TGF-β1（5ng/ml）DMEM培养基,37℃、5%CO2、95%空气培养箱中培养3h;④TGF-β1抑制剂干预组（D组）：培养基中加入TGF-β1同时加入其抑制剂LY364947（59nmol/L）,余同C组。采用流式细胞术及Tunel染色法检测各组细胞凋亡率。结果A、B、C、D组心肌细胞凋亡率分别为5.89%&#177;1.28%、26.68%&#177;6.17%、54.19%&#177;11.86%、31.31%&#177;3.78%;C组与其他各组之间比较,P均〈0.05,D组与B组比较,P〉0.05。认为TGF-β1可以诱导心肌细胞缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡,而LY364947可抑制TGF-β1的作用。     

缺血预适应对体外循环中心肌细胞膜蛋白生物物理特性的影响

目的 :观察缺血预适应 (IPC)对体外循环 (CPB)中缺血再灌注心肌细胞膜蛋白生物物理特性变化的影响。 方法 :建立猫 CPB模型并随机分成 3组 :对照组 (n=30 )仅作单纯的并行 CPB;缺血再灌注组 (IR组 ,n=30 )阻断主动脉 (ACC) 6 0 m in,恢复心脏血液再灌注 90 min;IPC组 (n=30 )于 ACC前进行 IPC(ACC5 m in后开放 1 0 min,并重复 3次 ) ,余同 IR组。应用电子顺磁共振波谱测定心肌细胞膜蛋白巯基强 /弱固定相峰高比值 (h S/ h W)和膜蛋白旋转相关时间 (τc)的动态变化 ,同时直接测定心肌组织中氧自由基水平。 结果 :对照组 h S/ h W和 τc 以及心肌组织中氧自由基水平在 CPB前后无明显变化 ;IR组 h S/ h W和 τc在 ACC30 min明显升高 ,并于再灌注期间进一步上升 (P<0 .0 1 ) ,同时伴有心肌中氧自由基水平的升高 (P<0 .0 5 ) ;IPC组再灌注期间 h S/ h W 和 τc虽较对照组有所升高 ,但均明显低于 IR组 (P<0 .0 5 ) ,而且 IPC组氧自由基水平在再灌注期 90 min基本恢复 CPB前水平。直线回归分析显示 h S/ h W 和 τc均与心肌组织中氧自由基含量的水平呈显著正相关 ,相关系数分别为0 .71 2和 0 .6 6 1 (P<0 .0 5 )。结论 :IPC能减少心肌再灌注期间氧自由基的产生 ,有利于 CPB中缺血再灌注心肌细胞膜蛋白生物物理     

B型利尿钠肽单克隆抗体的制备

B型利尿钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)是一种由32个氨基酸构成的多肽类神经激素,主要来自于心室,作为一种心衰标志物在临床逐渐被接受.本研究拟以先前已制备的TRX-BNP融合蛋白作抗原,制备BNP单克隆抗体,为研制BNP单抗试剂盒作准备.