重组hIFN-α-2b-卡介苗激活杀伤细胞抗膀胱肿瘤作用的体外研究

目的:研究重组hIFN-α-2b-卡介苗(hIFN-α-2b-BCG)对人外周血单个核细胞(peripheralbloodmonocytes,PBMC)活化增殖,以及BCG激活杀伤细胞(bacilliCalmette-Guérinactivatedkillercell,BAK细胞)对膀胱肿瘤细胞的杀伤效应。方法:分别利用野生型BCG、野生型BCG 干扰素作为对照诱导活化PBMC,比较重组BCG对PBMC的活化增殖效应,采用噻唑兰比色分析法(MTT法),分别在不同时间点检测上述各成分对PBMC增殖活化效果;采用乳酸脱氢酶释放试验(LDH法)研究不同浓度重组BCG活化PBMC后对膀胱肿瘤细胞的不同杀伤效果。结果:MTT测定表明,重组BCG诱导PBMC活化增殖的能力明显强于同浓度的对照组刺激效果(P<0.05),且重组BCG在72h仍保持较强的活化能力;乳酸脱氢酶释放试验显示,不同浓度重组BCG诱导的BAK细胞抗癌效应均高于对照组诱导的抗癌效果(P<0.05)。结论:重组BCG对人PBMC具有较强的活化增殖作用,增强PBMC对肿瘤细胞的杀伤效应。     

丝裂霉素C对膀胱肿瘤细胞株HSP70的诱导作用

目的研究丝裂霉素C对膀胱肿瘤细胞株TBC-1 HSP70的诱导作用。方法丝裂霉素C作用与TBC-1于2h后,观察在不同时间点0、8、24、48、72hTBC-1的HSP70的表达情况。结果丝裂霉素C化疗TBC-1后不同时间点0、8、24、48、72h的HSP70的表达OD值分别为0.306±0.005、0.255±0.009、0.203±0.018、0.237±0.029、0.239±0.020。正常TBC-1的HSP70表达OD值为0.247±0.022。结论丝裂霉素C可以诱导膀胱肿瘤细胞株TBC-1的HSP70的表达增高。     

联合自杀基因及内皮抑素基因双靶点治疗膀胱癌的实验研究

目的 探讨基因重组腺相关病毒自杀基因及内皮抑素(KS)联合基因治疗膀胱癌的效果.方法 (1)通过重组腺相关病毒(rAAV)-增强绿色荧光蛋白(EGFP)转染膀胱肿瘤T24细胞,来确定rAAV对该细胞的转染情况及转染效率;(2)通过rAAV-胸苷激酶(TK)-核糖体插入位点(IRES)-ES(简称rAAV-TIE)体外转染T24膀胱肿瘤细胞及人脐静脉内皮细胞(HUVEC细胞),应用MTT法、流式细胞仪等方法 来检测其对T24细胞及HUVEC细胞凋亡的诱导作用;(3)构建裸鼠膀胱癌模型,分析rAAV-TIE联合基因治疗膀胱癌的体内效果.结果 (1)rAAV-EGFP转染T24细胞后可以表达携带的外源基因EGFP;(2)rAAV-TK、rAAV-TIE转染T24细胞72 h后,流式细胞仪检测结果 显示,rAAV-TK、rAAV-TIE两组凋亡率分别是34.12%和36.91%,明显高于空病毒转染组[rAAV-多克隆位点(MCS)组](3.08%)和空白对照组(0.84%);(3)瘤内注射rAAV-KS、rAAV-TK、rAAV-TIE大约9 d后,肿瘤生长受到显著抑制,治疗结束后:各组肿瘤的体积分别是:rAAV-Es组(0.75±0.08)cm3、rAAV-TK组(0.71±0.11)cm3、rAAV-r11E组(0.52±0.09)cm3、rAAV-MCS组(1.27±0.13)cm3和空白对照组(1.24±0.17)cm3,除rAAV-ES组与rAAV-TK组间比较差异无统计学意义外,其余组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 体外和体内实验表明rAAV-TIE可有效抑制膀胱癌的血管生成和肿瘤的生长,能够双靶点基因治疗膀胱肿瘤.     

两种经尿道前列腺电切术的临床疗效比较

目的 比较经尿道前列腺等离子双极电切术(PKRP)与经尿道前列腺电切术(TURP)治疗良性前列腺增生(BPH)的主要优缺点及临床疗效.方法 回顾性分析2004年1月至2007年6月收治并获得随访的186例BPH患者的临床资料.PKRP组90例,TURP组96例,比较两组手术时间、术中出血量、前列腺包膜穿孔、术后国际前列腺症状评分(IPSS)、生活质量评分(QOL)、最大尿流率(Qmax)、残余尿量(PVR)及并发症的发生率等指标.结果 PKRP组手术时间、术中出血量、前列腺包膜穿孔发生率、术后1个月内继发性出血发生率、术后2个月内暂时性尿失禁发生率分别为(65.3±12.8)min、(213.6±78.2)ml、5.6%(5/90)、2.2%(2/90)和21.1%(19/90),TURP组分别为(83.6±17.5)min、(397.4±142.7)ml、17.7%(17/96)、11.5%(11/96)和36.5%(35/96),两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).PKRP组术后IPSS、QOL、Qmax、PVR分别为(4.7±1.3)分、(1.1±0.4)分、(18.7±5.6)ml/s、(8.9±2.5)ml;TURP组分别为(5.3±1.0)分、(1.2±0.5)分、(20.4±4.3)ml/s、(11.2±3.2)ml;均较术前明显改善(P<0.05),但组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 PKRP与TURP比较,治疗BPH疗效相近,但PKRP安全性更好,手术时间、术中出血量、围手术期及术后并发症等明显减少,是治疗BPH的理想方法.     

基因重组hVEGF165腺相关病毒载体的包装和鉴定

目的:采用rAAV Helper free System构建hVEGF165腺相关病毒和增强型绿色荧光蛋白腺相关病毒,并初步鉴定其感染情况。方法:采用AAV-Helper free system包装系,构建hVEGF165腺相关病毒和增强型绿色荧光蛋白腺相关病毒载体质粒,应用电穿孔方法质粒共转染HEK293细胞,分离纯化后获得rAAV-hVEGF165和rAAV-EGFP,AVSachTMELISA法测定rAAV颗粒滴度,并鉴定其对HEK293细胞的感染情况。结果:包装纯化后获得病毒滴度可达到2×1011,电镜观察病毒颗粒均匀,病毒大小20～25nm,呈多面体形态。结论:成功包装hVEGF165腺相关病毒和增强型绿色荧光蛋白腺相关病毒。     

膀胱移行细胞癌中Survivin的表达与Fas/FasL表达的关系

目的：探讨在膀胱移行细胞癌中Survivin的表达与膀胱移行细胞癌病理分级及Fas／FasL系统之间的关系。方法：用免疫组织化学方法检测64例膀胱移行细胞癌、15例膀胱良性病变和12例正常膀胱黏膜中Survivin、Fas、FasL的表达。结果：在93．8％膀胱移行细胞癌和66．7％膀胱良性病变Survivin表达阳性，正常膀胱黏膜组织Survivin无表达．3组比较差异有统计学意义（P〈00．1），且Survivin的表达与膀胱癌的分级密切相关。Fas在3组中的表达率分别为50％、80％和100％，FasL在3组中的表达率分别为90．6％、60％和16．7％。Survivin在膀胱移行细胞癌中的表达上调，并与Fas／FasL的表达密切相关。结论：Survivin与膀胱癌的恶性度有关，其可能通过与Fas／FasL系统协同作用共同参与了膀胱移行细胞癌的发生发展。     

浅表膀胱癌不同灌注方法与复发的荟萃分析

目的应用荟萃（Meta）分析探讨浅表膀胱癌不同灌注方法对膀胱癌术后复发的影响。方法应用Meta分析固定效应模型和随机效应模式对1989年1月至2005年2月有关浅表膀胱癌不同灌注方法与膀胱癌术后复发的文献进行综合定量评价。结果纳入本次Meta分析的43篇文献中，卡介苗（BCG）灌注与其他方法比较与浅表膀胱癌术后复发、使用其他方法灌注与浅表膀胱癌术后复发、BCG联合其他方法灌注与浅表膀胱癌术后复发的合并OR值分别为0．55（95％CI值0．40—0．74）、n32（95％CI值0．06—1．64）和0．43（95％CI值0．33—0．57）；漏斗图各点基本呈漏斗状排列，表明发表性偏倚对本研究影响较小，结论较可靠。结论BCG灌注或者联合其他灌注方法能有效降低浅表膀胱癌术后的复发率。     

基因重组腺相关病毒内皮抑素基因治疗膀胱癌的实验研究

目的 探讨基因重组腺相关病毒(rAAV)内皮抑素(ES)基因治疗膀胱癌的效果.方法 通过rAAV增强绿色荧光蛋白(EGFP)转染膀胱肿瘤T24细胞株确定rAAV对细胞的转染效率;rAAV-ES体外转染T24细胞及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),偶氮唑盐法、流式细胞仪检测其对T24细胞及HUVEC细胞凋亡的诱导作用;构建裸鼠膀胱癌模型,观察肿瘤生长情况及测量微血管密度(MVD),分析rAAV-ES基因治疗膀胱癌的体内效果.结果 rAAV-EGFP转染T24细胞后可以稳定表达EGFP;rAAV-ES转染T24细胞72 h后.细胞凋亡率37.02%,明显高于空病毒转染组(7.90%)和空白对照组(0.30%).差异均有统计学意义(均P＜0.05).荷瘤裸鼠瘤内注射rAAV-ES9 d后,肿瘤生长受到明显抑制;治疗4周结束后rAAV-ES组、rAAV-MCS组和空白对照组肿瘤体积分别为(0.75±0.08)、(1.27±0.13)、(1.24±0.17)cm~3,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 体内外实验表明rAAV-ES可有效抑制膀胱癌的血管生成和肿瘤生长.     

膀胱重复畸形2例临床分析

目的：提高对膀胱重复畸形的认识和诊疗水平.方法：回顾性分析2例膀胱重复畸形患者的临床资料,并结合文献资料进行讨论.结果：例1经膀胱尿道镜检查后发现左侧膀胱前壁有一菜花状肿物,病理检查结果提示膀胱高-中分化鳞状上皮细胞癌,行全膀胱切除＋双侧输尿管皮肤造口术.例2行双膀胱融合和腹前壁修补术.结论：膀胱重复畸形极其罕见,并且很少单独存在,多合并尿路或其他器官畸形.手术是唯一能根治的方法,治疗应遵循个体化原则.     

siRNA沉默E2F3基因对人膀胱癌细胞的增殖抑制作用

目的：探讨siRNA干扰E2F3基因对膀胱癌细胞(5637细胞)增殖的抑制作用,阐明E2F3基沉默对5637细胞增殖抑制作用的生物学机制。方法：化学合成3对编码短发夹RNA序列的、靶向E2F3基因的寡核苷酸链,经BamH Ⅰ、Hind Ⅲ 双酶切克隆至pRNAT-U6.1/Neo系统,重组构建E2F3 siRNA的RNAi质粒,以质粒转染DH5α菌株筛选得到稳定表达siRNA的细胞,转染5637细胞E2F3基因沉默,RT-PCR及Western blotting 检测E2F3表达,流式细胞术检测5637细胞周期,采用Annexin-V/PS双染法检测细胞凋亡率。结果：RT-PCR及Western blotting检测干扰后5637细胞E2F3基因表达抑制,3条干扰序列对5637细胞周期抑制且G1期细胞比例增高,与阴性转染对照组比较差异有显著性(P<0.05和P<0.001）;细胞凋亡率增加,与空白对照组及阴性转染对照组比较差异有显著性(P<0.001）。结论：siRNA干扰E2F3基因对膀胱癌5637细胞具有明显增殖抑制和促进凋亡的作用。