ActRⅡB-Fc融合蛋白生物学活性测定方法的建立

目的：建立ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白的生物学活性检测方法。方法：利用A204-CAGA12-LUC细胞系，通过荧光素酶检测系统进行ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白的生物学活性检测，根据四参数拟合分析计算样品相对效价，并对该方法的专属性、精密性和准确性进行验证。结果：ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白在该方法中存在量效关系，且符合4-参数方程：y=(A-D)/[1+(x/C)^B ]+D。该方法具有良好的专属性；6批 ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白样品经3次测定，相对效价平均值在(86.74±6.44)%~(108.81±15.07)%，RSD 均小于15 %；2批回收率样品经3次测定，回收率分别为(114.99±12.42)%和(81.19±7.35)%；8次独立测定重复性较好。结论：研究建立的ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白生物学活性检测方法专属性强，准确性高，精密度好，可作为ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白生物学活性的常规检测方法。     

胎动的监测及临床意义

<正>胎动包括胎儿在子宫内所有的活动,是胎儿存在生命迹象的表现。胎动异常提示可能存在胎儿宫内状况不良,很多研究已经提示,胎动异常与围产期不良妊娠结局相关[1]。有效的胎动监测是胎儿安危的重要保障,也是产前胎儿监测的关键信号和方法。对于胎动异常的管理和及时干预,有助于识别病理妊娠,降低围产儿死亡率,改善妊娠结局,是产前妊娠管理的重要部分。1 胎动的生理规律目前通常认为正常孕妇自妊娠18～20周开始感到胎动,28～32周胎儿中枢神经系统趋     

羊水粪染对新生儿的影响

羊水粪染主要见于足月产及过期妊娠,胎便排入羊水是胎儿成熟的表征或胎儿宫内窘迫的征象已得到公认。胎盘清理胎便能力降低是近年来提出的新的观点,作为羊水粪染主要的发病机制之一备受关注。胎儿羊水粪染可损伤多个系统,可通过直接观察、超声等及时诊断羊水粪染,及时对胎儿及新生儿进行干预,尽可能的降低对围产儿的不利影响,提高其生命质量。     

过滤对一种IgG2亚型EGFR单抗中不溶性微粒的影响

目的：探讨过滤操作对一种免疫球蛋白G2（immunoglobin G2,IgG2）亚型表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）单克隆抗体（单抗）生物类似药（similar biotherapeutic product,SBP）候选药中不溶性微粒的影响。方法：利用微流数字成像（microflow digital imaging,MDI）技术对某厂家生产的IgG2亚型EGFR单抗SBP候选药与其原研药（reference biotherapeutic product,RBP）中不同粒径的不溶性微粒进行比较;采用0.22 μm的滤器对EGFR单抗SBP候选药进行过滤,并采用MDI法立即对不同粒径和性质的不溶性微粒进行检测和分析;再将过滤后的EGFR单抗SBP候选药在室温静置2 h,并采用MDI法对不同粒径和性质的不溶性微粒进行检测和分析。结果：某IgG2亚型EGFR单抗SBP候选药中不同粒径的不溶性微粒数量明显高于RBP;用0.22 μm的滤器过滤后,EGFR单抗SBP候选药中的不溶性微粒数由8.51×10⁵粒·mL^-1降为1.52×10⁴粒·mL^-1,且主要成分蛋白聚体、气泡和纤维均明显减少;室温静置2 h后,其中的不溶性微粒数由1.52×10⁴粒·mL^-1增加至3.23×10⁴粒·mL^-1,且增加的微粒主要为蛋白聚体。结论：与原研药相比,该EGFR单抗SBP候选药蛋白聚体水平较高,过滤后有明显改善,但随着放置时间延长,蛋白聚体含量又有明显增加。这提示我们需加强研发,以提高SBP候选药的产品质量、安全性和有效性。     

Slc4a11基因缺失在CHED发病中的作用

目的　探讨Slc4a11缺失在先天性遗传性角膜内皮营养不良（congenital hereditary endothelial dystrophy, CHED）发病中的作用及其与自噬信号通路的潜在调控关系。方法　利用CRISPR/Cas9技术构建Slc4a11基因敲除小鼠模型。以野生型小鼠（wild type, WT）和Slc4a11基因敲除小鼠（knockout, KO）为实验对象,通过Western印迹法、RT-qPCR、茜素红染色、H-E染色、透射电镜评估KO小鼠角膜表型特征的变化。通过Western印迹法和RT-qPCR检测自噬标志物LC3、beclin1、p62在角膜内皮的表达量。透射电镜观察两组小鼠角膜内皮细胞自噬情况。结果　Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示与CHED相似的表型特征,包括角膜厚度增加;角膜内皮细胞体积增大,密度减小;后弹力层增厚;角膜内皮空泡形成。KO小鼠与WT小鼠相比,LC3、beclin1的mRNA和蛋白的相对表达量上升,差异有统计学意义（P<005）,而p62的mRNA和蛋白的相对表达量下降,差异有统计学意义（P<005）。KO小鼠角膜内皮细胞内自噬体明显多于WT小鼠。结论　利用CRISPR/Cas9技术构建的Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示CHED特征的表型。同时Slc4a11缺失通过增强自噬信号通路参与CHED的发病机制。     

金钱草总黄酮对草酸钙结晶肾损伤的作用机制

目的:探讨金钱草总黄酮对一水合草酸钙(COM)诱导肾小管上皮细胞凋亡所致肾损伤的影响及其机制。方法:应用不同浓度COM处理肾小管上皮细胞(HK-2)建立体外泌尿系结石细胞模型,将肾小管上皮细胞分为对照组、金钱草总黄酮处理组(TF组)、P38丝裂原活化蛋白激酶(p_38/MAPK)抑制组(SB组)、COM处理组(COM组)、COM和金钱草总黄酮处理组(CTF组)、COM和p_38/MAPK抑制组(CSB组)6组,WST-1法检测细胞存活率,Western blot检测人肾损伤分子(KIM-1)、(p-p)_38、p_38、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达,流式细胞术检测不同处理组的细胞凋亡数。结果:COM浓度为0.5、1、2、5 mmol/L时,细胞存活率分别为(85.02±5.50)%、(70.27±3.78)%、(58.09±3.23)%、(42.56±4.13)%,较对照组(99.83±3.65)%降低(P0.05)。在COM处理的肾小管上皮细胞中,随着时间的增加,KIM-1、(p-p)_38及LC3-Ⅱ表达增加。COM可诱导HK-2细胞过度自噬和凋亡,CSB组细胞凋亡率较COM组降低[(7.91±0.70)%vs(29.90±1.07)%,P0.05]。CSB组LC3-Ⅱ表达较COM组降低[(0.52±0.04)vs(1.17±0.04),P0.05]。CTF组(p-p)_38蛋白水平较COM组降低[(0.66±0.06)vs(1.01±0.06),P0.05]。随着金钱草总黄酮浓度的增加,HK-2细胞存活率也逐渐增加。CTF组细胞凋亡率较COM组降低[(10.54±1.07)%vs(29.90±1.07)%,P0.05]。CTF组LC3-Ⅱ表达较COM组降低[(0.82±0.10)vs(1.17±0.04),P0.05]。结论:金钱草总黄酮可通过阻断p_38/MAPK通路抑制肾小管上皮细胞的过度自噬和凋亡,减少肾小管上皮细胞的损伤,从而抑制泌尿系结石的形成。     

围绝经期骨质疏松症合并2型糖尿病患者糖代谢与骨代谢的相关性分析

目的探讨围绝经期骨质疏松症(osteoporosis,OP)合并2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者糖代谢与骨代谢的相关性。方法选取70例围绝经期OP合并T2DM患者、70例单纯围绝经期OP患者和70例单纯围绝经期T2DM患者,分为研究组、OP组、T2DM组。检测受试者糖代谢、骨代谢指标。结果三组一般资料对比差异均无统计学意义(P0.05);三组FPG、FINS、Hb A1c、HOMA-IS、BGP、ALP、PTH水平及其异常者占比对比差异均有统计学意义(P0.05),研究组FPG、FINS、Hb A1c、血PTH水平均明显高于OP组和T2DM组(P0.05),T2DM组FPG、FINS、Hb A1c水平均明显高于OP组(P 0.05),糖代谢指标异常者占比对比为研究组T2DM组OP组,BGP、ALP和PTH异常者占比对比为研究组OP组T2DM组;研究组HOMA-IS、BGP、ALP均明显低于OP组和T2DM组(P0.05),T2DM组HOMA-IS明显低于OP组(P0.05),OP组BGP、ALP均明显低于T2DM组(P0.05);研究组中FPG、FINS、Hb A1c与BGP、ALP均呈负相关(r0,P0.05),与PTH均呈正相关(r0,P0.05),HOMA-IS与BGP、ALP均呈正相关(r0,P0.05),与PTH呈负相关(r0,P0.05)。结论围绝经期OP合并T2DM患者中多数均可出现糖代谢和BGP、ALP、PTH骨代谢异常,且上述糖代谢与骨代谢指标均存在相关性。     

基于报告基因的抗CD20单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立

利用Jurkat/NFAT-luc+FcγRIIIa转基因细胞系作为效应细胞,WIL2-S细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(Bio GloTM Luciferase Assay System)进行抗CD20单抗的ADCC生物学活性检测,并对实验条件进行优化及方法学验证。结果显示抗CD20单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D。方法经优化确定靶细胞为WIL2-S细胞,抗体稀释浓度为18 000 ng·m L-1,1∶5倍的稀释倍数,效靶比为6∶1,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性,8次独立实验的回归分析、线性及平行性均通过统计学检验;4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(44.39±3.93)%、(72.74±2.78)%、(128.28±7.01)%和(168.19±2.70)%,变异系数均小于10%,对应回收率分别为(88.78±7.85)%、(96.99±3.70)%、(102.63±5.61)%和(112.12±1.80)%。本研究利用转基因细胞法成功建立抗CD20单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗CD20单抗ADCC生物学活性的常规检测方法。     

MicroRNAs与前列腺癌的表观遗传学研究进展

前列腺癌在欧美国家是男性最常见的恶性肿瘤，是男性癌症死亡的主要原因之一，死亡率仅次于肺癌。其发病率有明显的地理和种族差异。发展中国家的前列腺癌发病率低于欧美等西方国家。但是，近几年，随着社会人口老龄化及生活习惯、生活条件的改善，发展中国家发病率呈明显上升趋势。