佐太、β-HgS、HgCl_2对PC12细胞活性和凋亡相关基因表达影响的比较

目的比较佐太、β-HgS、HgCl_2对PC12细胞活性和凋亡相关基因表达的影响。方法 MTT法测定3种药物对细胞活性的影响,实时荧光定量PCR法检测Bax、Bak、Bcl2、Fas、FasL表达。结果 0.250 g/L佐太作用2 h后细胞活性下降约10%,等汞量β-HgS使其下降12%左右,而含汞量只有佐太1/10的HgCl_2却导致其下降约70%;佐太降低Bax、Bak、Bcl-2、FasL表达,β-HgS降低Bax、Bak、Fas、FasL表达,HgCl_2降低Bcl-2表达而增加Fas、FasL表达。结论佐太、β-HgS对PC12细胞的毒性远小于HgCl_2,两者可能对细胞中线粒体凋亡通路的激活有抑制作用,而HgCl_2可能通过激活死亡受体通路诱导细胞凋亡。     

丙戊酸对乳腺癌MCF7细胞的放射增敏性依赖于抑癌基因p53

目的研究抑癌基因p53对丙戊酸(VPA)所致乳腺癌细胞放射增敏性的影响及其与同源重组(HR)修复机制的关系。方法用含PLKO.1或p53 shRNA慢病毒颗粒液感染乳腺癌MCF7细胞,建立p53表达下调的同源配对MCF7细胞系,即MCF7/野生型p53(MCF7/wtp53)和MCF7/缺欠型p53(MCF7/dp53)细胞;感染MCF7/(pDR-GFP)细胞,建立MCF7/pDR-GFP/wtp53和MCF7/pDR-GFP/dp53细胞;各分为细胞对照组、VPA组(VPA 0.5 mmol·L-1处理24 h)、电离辐射(IR,8 Gy)组和VPA+IR组(VPA 0.5 mmol·L-1预处理24 h后联用IR)。通过Western印迹实验检测P53蛋白表达水平,彗星和免疫荧光实验分别检测细胞核拖尾尾距及磷酸化组蛋白(γH2AX)焦点细胞比率,细胞克隆形成实验检测克隆形成率,流式细胞术检测HR修复效率,免疫荧光实验检测含乳腺癌易感基因1(BRCA1)蛋白和重组酶51(Rad51)蛋白焦点细胞比率。结果 Western印迹结果显示,MCF7/wtp53细胞中存在P53蛋白表达,MCF7/dp53细胞中P53蛋白表达显著降低(P<0.05)。彗星和免疫荧光结果显示,在MCF7/wtp53细胞中,与IR组相比,VPA+IR组细胞核拖尾尾距和含γH2AX焦点细胞百分率升高(P<0.05);在MCF7/dp53细胞中,与IR组相比,VPA+IR组细胞核拖尾尾距和含γH2AX焦点细胞百分率均升高(P<0.05),但仍低于MCF7/wtp53细胞VPA+IR组(P<0.05)。细胞克隆形成结果显示,在MCF7/wtp53细胞中,VPA+IR组细胞存活率低于IR组(P<0.05);在MCF7/dp53细胞中,VPA+IR组细胞存活率虽低于IR组(P<0.05),但高于MCF7/wtp53细胞VPA+IR组(P<0.05)。流式细胞术结果显示,在MCF7/pDR-GFP/wtp53细胞中,VPA组HR效率低于细胞对照组(P<0.05);在MCF7/pDR-GFP/dp53细胞中,VPA组HR效率低于细胞对照组(P<0.05),但仍高于MCF7/pDRGFP/wtp53细胞VPA组(P<0.05)。免疫荧光结果显示,在MCF7/wtp53细胞中,VPA+IR组含BRCA1和Rad51焦点细胞百分率均低于IR组(P<0.05);在MCF7/dp53细胞中,VPA+IR组含BRCA1和Rad51焦点细胞百分率均低于IR组(P<0.05),但仍高于MCF7/wtp53细胞VPA+IR组(P<0.05)。结论 VPA对乳腺癌MCF7细胞具有放射增敏性;抑制p53表达可降低VPA的放射增敏作用,与BRCA1-Rad51介导的HR机制过度增强有关。     

实时荧光定量聚合酶链反应快速检测MRSA的应用研究

目的研究实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床应用。方法收集2017年1月至2018年12月重庆市南川区人民医院患者体液标本分离培养的446例金黄色葡萄球菌,采用实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌nuc基因和mecA基因。结果 446例金黄色葡萄球菌均检出nuc基因,符合率为100.00%。经全自动细菌培养鉴定出的96例MRSA中均检出mecA基因,检出符合率为100.00%。在全自动细菌培养鉴定及药敏分析仪上检出的甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌中有2例检测到mecA基因,其检测正确率为97.96%(96/98)。结论实时荧光定量PCR检测MRSA耗时短,正确率高,用于临床快速鉴定MRSA有明显优势。     

322例急性髓系白血病分子遗传学分型特征的研究

目的分析急性髓系白血病(AML)患者的染色体及基因改变情况,并对其进行基因分型。方法对2017年5月至2018年12月于该院就诊的322例初诊AML患者的骨髓细胞进行染色体、荧光定量PCR和二代测序检测。用WHO 2016髓系白血病分型系统和NEJM 2016文献定义的标准对其进行基因分型。结果322例AML患者中,95.7%的患者检测到遗传学或分子学改变;FLT3、NPM1、DNMT3A、NRAS、CEBPA双突变为最常见的5种基因改变;58.7%的AML可被分到WHO 2016定义的基因型中,77.8%的AML可被分到NEJM 2016定义的基因类型中,差异有统计学意义(P0.05)。结论结合染色体和基因检测结果,依据现有的国际统一的WHO疾病分型标准,超过半数的AML可被划分到一个独立的基因型;依据NEJM 2016的研究结果,更多的患者可以被划分到一个独立的基因型。     

非小细胞肺癌铂类化疗药物基因组学研究进展

目的:了解非小细胞肺癌(NSCLC)铂类药物基因组学的研究进展,以期为其临床个体化用药提供参考。方法:以"非小细胞肺癌""铂类""基因多态性""单核苷酸多态性""Non-small cell lung cancer""NSCLC""Platinum""Genetic polymorphism""Single nucleotide polymorphisms"等为关键词,组合查询2003年1月-2017年12月在中国知网、万方数据、维普网、PubMed、Embase、Web of Science等数据库中发表的相关文献,就DNA修复[包括核苷酸切除修复(NER)、碱基切除修复(BER)、双链断裂修复(DSB)等]、转运蛋白、代谢和解毒相关基因的多态性对NSCLC患者铂类药物化疗效果的影响进行综述。结果与结论:共检索到相关文献448篇,其中有效文献66篇。NSCLC患者铂类药物化疗效果受DNA修复、转运蛋白、代谢和解毒相关基因多态性的影响。其中,NER途径相关基因切除修复交叉互补基因1(ERCC1)C118T、C8092A位点多态性与NSCLC患者铂类药物化疗效果的相关性尚存在较大争议;ERCC2基因Asp312Asn位点突变将不利于黄种人群NSCLC患者生存,而His46His位点突变将有助于提高其化疗效果,两者均可成为黄种人群铂类药物化疗效果的预测指标。BER途径相关基因X射线交叉互补基因1(XRCC1)G1196A位点突变可能会提高NSCLC患者对铂类药物的反应性,而C580T位点多态性则与铂类药物化疗效果无关。DSB途径相关基因XRCC3基因Thr241Met位点多态性与NSCLC患者铂类药物化疗效果的相关性仍有待后续研究进一步验证。转运蛋白相关基因三磷酸腺苷结合盒转运体B亚家族成员1(ABCB1)基因C3435T、G2677T/A位点及代谢和解毒相关基因谷胱甘肽-S-转移酶P1(GSTP1)基因A313G位点多态性均有可能影响黄种人群铂类药物化疗的效果,而GSTM1基因多态性对其疗效的影响仍有待商榷。     

GSK3B基因3'-UTR多态性与阿尔茨海默病发病风险的相关性分析

目的研究中国汉族人群中糖原合成酶激酶3β基因(GSK3B)3'端非翻译区(3'-UTR)基因多态性与阿尔茨海默病(AD)发病风险的相关性。方法采用直接测序的方法,对535例AD病例及464例正常对照的GSK3B基因3'-UTR单核苷酸多态性(SNPs)位点进行基因分型。结果 GSK3B基因3'-UTR各SNPs位点的等位基因频率和基因型分布在AD组和正常对照组之间的差异无统计学意义(P0.05)。其中rs60393216、rs56728675和rs3732361存在强连锁不平衡,其构成的三种单体型的频率在AD组和正常对照组之间的差异无统计学意义(P0.05)。结论 GSK3B基因3'-UTR多态性与中国汉族人群AD发病风险无关。     

基因重组人生长激素联合褪黑素修复兔胫骨骨缺损的成骨效果

目的:观察基因重组人生长激素(rhGH)联合褪黑素(MT)在兔胫骨缺损修复过程中的成骨效果,明确两种药物联合使用在骨缺损修复中的作用。方法:新西兰大白兔24只(4～6月龄,2. 5～3. 0 kg,雄性),随机标号(1#～24#),于双侧胫骨制备直径5 mm,深度6 mm的骨缺损模型,1#～12#右侧为空白对照组、1#～12#左侧为rhGH-MT联合用药组、13#～24#右侧为rhGH组、13#～24#左侧为MT组。分别于术后第1、2、4周进行骨缺损大体观察、X线影像学、组织学观察以及骨组织形态计量学的测定。结果:大体观察、X线影像学以及组织学观察到各组均有不同程度的新骨组织形成;术后第1、2、4周,rhGH-MT组新生成骨组织面积比均大于其他3组(P<0. 05);纵向比较,除空白组外,其他3组在第1、2、4周之间新生成骨组织面积百分比的差异均存在统计学意义(P<0. 05)。结论:局部应用基因重组人生长激素联合褪黑素可有效促进骨缺损区新生骨组织生成,且效果优于分别单独使用两种材料。     

D-半乳糖联合对氯苯丙氨酸致肾不藏志不寐大鼠下丘脑神经递质和凋亡基因的实验研究

目的:观察D-半乳糖联合对氯苯丙氨酸(PCPA)致肾不藏志不寐大鼠下丘脑神经递质和凋亡基因的变化。方法:40只SD大鼠随机分为对照组、老年组、失眠组、肾不藏志不寐组(模型组),每组10只。老年组大鼠给予D-半乳糖皮下注射,失眠组给予对PCPA腹腔注射,肾不藏志不寐组给予D-半乳糖皮下注射联合PCPA腹腔注射建立模型,对照组给予等剂量生理盐水注射。造模结束后测量各组大鼠体质量、采用水迷宫观察大鼠定位航行探索运动轨迹、采用RT-PCR法检测各组大鼠下丘脑GABAARα1、GABAARβ2、GABAARγ2、Bax、Bcl-2 mRNA的相对表达量。结果:与空白组比较,模型组体质量显著降低(P<0.01);定位航行探索运动轨迹显著延长;模型组下丘脑GABAARα1、GABAARβ2、GABAARγ2、Bcl-2mRNA相对表达量均显著性降低(P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.05);下丘脑Bax mRNA相对表达量显著性增加(P<0.05)。结论:D-半乳糖联合PCPA致肾不藏志不寐大鼠下丘脑睡眠相关的神经递质和凋亡基因表达发生改变。