滋肾通络方对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA表达影响的实验研究

目的:观察滋肾通络方含药血清对高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA的影响,并探讨其在防治糖尿病肾病(DN)中的机制。方法:以高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞生长建立模型,分为以下8组:(1)正常组;(2)高糖组;(3)高糖+LPS组;(4)苯那普利组;(5)滋肾通络方小剂量组;(6)滋肾通络方中剂量组;(7)滋肾通络方大剂量组。采用RT-PCR技术从分子生物学水平检测各组系膜细胞中TGF-β1、MMP-2及MMP-9mRNA表达。结果:与正常组相比,高糖组、高糖+LPS组TGF-β1mRNA的表达明显升高(P<0.01),MMP-2及MMP-9mRNA的表达明显降低(P<0.01);与模型组相比较,滋肾通络方大、中、小剂量组对大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA表达显著降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论:滋肾通络方含药血清能够抑制大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA的表达,增加MMP-2、MMP-9mRNA的表达,从而通过增加肾小球系膜细胞细胞外基质的降解以延缓DN进展。     

慢性肾脏病肾阳虚证证候特征与临床生物学指标相关性及危险因素

目的 观察慢性肾脏病（CKD）肾阳虚证证候特征、与临床指标的相关性并探索影响CKD肾阳虚证的危险因素。方法 通过对符合纳入标准的225例慢性肾脏病患者进行中医证候判断，获得肾阳虚证组99例，非肾阳虚证组126例。总结肾阳虚证组症状、舌脉及兼证，运用因子分析和聚类分析归纳证候特征，运用方差分析及非参数检验方法比较肾阳虚证组、非肾阳虚证组及正常对照组之间的血红蛋白、红细胞计数、尿蛋白、尿葡萄糖、肌酐、尿素氮、肾小球滤过率水平，采用二分类Logistic回归分析模型对生活习惯、身体质量指数（BMI）、血糖、血脂等危险因素进行证候相关性分析。结果 CKD肾阳虚证患者高频症状是腰部酸痛、畏寒喜暖、精神萎靡、腰膝畏寒等。脉象以沉脉、细脉、弱脉为主，舌象中以白苔、暗淡舌、薄苔、腻苔为主。因子分析获得13个公因子分为5类，发现肾阳虚证患者症状病位在四肢尤以下肢为主、心胸、膀胱、肌表和胃部，病性表现主要是虚寒、气虚、水饮及血瘀。聚类分析可聚为11类，反映了肾阳虚证患者以气虚、血瘀和水饮停滞为主的舌脉及症状表现，证候体现病位特征集中在肌表、四肢、脾胃、耳窍、心神和膀胱等，总体而言病性表现与因子分析基本一致，一派虚寒衰弱表现兼有水饮、血瘀表现。频数分析也显示常见兼证证候要素主要包括气虚证、饮停证、寒湿证、血瘀证。与非肾阳虚证组比较，肾阳虚证组CKD 3-5期出现比例更高，肾功能尿素氮明显增高（P<0.05），肾小球滤过率明显降低（P<0.05）；血红蛋白和红细胞计数明显降低（P<0.05）；尿蛋白定性等级明显提升。此外，经回归分析结果显示女性、不运动或很少运动、存在饮食偏嗜是CKD肾阳虚证产生的危险因素（P<0.05）。结论 CKD肾阳虚证症状表现在病位病性表现上均具有相应特征，其中医证型与其对应的生物学指标具有一定程度上的相关性，血红蛋白、红细胞计数及肾小球滤过率、尿素氮和尿蛋白等能够一定程度反映CKD肾阳虚证的证候内涵，生活中相关危险因素能够影响CKD肾阳虚证的产生。     

复方鳖甲软肝片防治大鼠腺嘌呤性慢性肾衰竭作用的实验研究

目的:观察复方鳖甲软肝片对大鼠腺嘌呤性慢性肾衰竭的防治作用.方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、尿毒清组、复方鳖甲软肝片小、中、大剂量组.尿毒清组、复方鳖甲软肝片小、中、大剂量组,以200 mg/kg的腺嘌呤及尿毒清组、复方鳖甲软肝片不同剂量灌胃,共4周,在第2周和第4周时留取24 h尿液、称重,第4周处死大鼠,取血、留取肾组织.测定尿、血Ca2 、P3-及Scr、BUN,用SPSS 11.0进行统计学处理.结果:复方鳖甲软肝片组与模型组比较,慢性肾衰竭大鼠的尿、血Ca2 、P3-及Scr、BUN有不同程度的改善.结论:复方鳖甲软肝片对腺嘌呤性大鼠慢性肾衰竭有一定的防治作用.     

中医药防治腹膜透析腹膜纤维化

目的:腹膜纤维化所致的超滤失败是长期腹透治疗的主要并发症,也是腹透患者退出腹透治疗的主要原因。近几年来,中医药治疗腹透相关性腹膜纤维化已经成为研究热点。为此,回顾腹透相关性腹膜纤维化与中医药防治的实验研究结果,综述中医药防治腹透相关性腹膜纤维化有效干预方法及可能的作用机制。资料来源:应用计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库结合手工检索1993-01/2006-06期间的相关文章,检索词“腹膜透析、腹膜纤维化、中医药、防治”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选取中医药防治腹透相关性腹膜纤维化实验包括治疗组和对照组的文献,然后筛除非随机实验研究,查找剩余的文献全文,以是否为随机对照实验研究作为纳入标准。资料提炼:共收集到14篇关于腹透相关性腹膜纤维化与中医药防治关系的随机和未随机实验,纳入12个随机对照实验研究,排除2篇。12个实验对象中10个符合腹透相关性腹膜纤维化实验研究,2个为相关药物药理研究,治疗中药选用了单味中药、中药提取物和中药复方等对大鼠腹膜间皮细胞、腹膜结构等的影响,对各种不同的抗腹透相关性腹膜纤维化中药,进行了对照研究及相关性分析。资料综合:①腹膜透析腹膜纤维化中医药疗法的探索主要有单味中药、中药提取物和中药复方等对大鼠腹膜间皮细胞、腹膜结构的影响。黄芪可以增加心排血量,使腹腔血流灌注增加从而提高跨毛细血管超滤,增加腹膜有效透析面积,且可抑制由转化生长因子β1引起的纤维连接蛋白产生。丹参能有效地提高腹膜溶质清除率和超滤量,丹参、黄芪对腹膜超微结构有良性影响。中药提取物主要为川芎嗪,有抑制腹膜间皮细胞CD40表达的作用,能显著改善腹膜透析中腹腔巨噬细胞的功能,增强腹腔的防御功能,预防硬化性腹膜炎,延长腹膜使用寿命。复方中药主要有参麦注射液,肾衰口服液。②中医药防治腹膜纤维化的作用机制可以概括为:保护腹膜间皮细胞;抑制由转化生长因子β1引起的纤维连接蛋白、纤溶酶原抑制剂及碱性成纤维细胞生长因子mRNA的过度表达以影响腹膜间皮下细胞外基质的积聚和降解;抑制腹膜间皮细胞CD40表达以抑制炎症反应及纤维化;改善腹膜透析中腹腔巨噬细胞功能以增强腹膜防御能力。结论:具有扶正或活血功效的中药及其制剂如黄芪、丹参、川芎嗪等具有抗腹膜纤维化作用,有较大的开发潜力及广阔的发展前景。     

温脾汤药物血清对体外培养的大鼠系膜细胞核转录因子-κB活化的影响

目的 探讨温脾汤药物血清对大鼠原代培养系膜细胞核转录因子NF-κB及其抑制因子IκB表达的影响，提供其肾保护作用机理的实验依据。方法 应用荧光标记和激光共聚焦扫描显微镜技术，研究温脾汤药物血清对LPS刺激引起的NF-κB活化的影响；应用Western blot方法研究温脾汤药物血清对LPS刺激引起的IκBα降解的影响。结果 LPS刺激10h后，NF-κB的活性达到最高峰，且最高荧光强度位于细胞核内；大剂量药物血清明显抑制NF-κB的活性增强；IκBα在LPS刺激后迅速降解，又在1～2h内迅速恢复近正常水平；大剂量药物血清能明显抑制IκBα的降解。结论 温脾汤通过抑制LPS诱导的IκBα降解，使NF-κB与IκBα结合成复合物而减少解离，阻止了系膜细胞NF-κB的活化过程。     

糖肾平胶囊通过PI3K/Akt信号通路干预高糖+LPS诱导足细胞凋亡的机制

目的:观察糖肾平对高糖环境下脂多糖(LPS)对足细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:利用雄性Wistar大鼠,分别用糖肾平小、中、大剂量(0. 525,1. 05,2. 1 g·kg-1),厄贝沙坦(17. 5 mg·kg-1)灌胃给药,制备相应药物血清。采用高糖,LPS体外刺激大鼠足细胞建立模型。并分为正常组(5%正常大鼠血清),高糖组(5%模型大鼠血清+4. 5‰葡萄糖),高糖+LPS组(5%模型大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),厄贝沙坦组(5%厄贝沙坦组大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS1 mg·L-1),糖肾平小剂量组(5%糖肾平小剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),中剂量组(5%糖肾平中剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),大剂量组(5%糖肾平大剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1)。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测足细胞中CD2相关蛋白(CD2AP),nephrin和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号转导通路中关键因子的蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,高糖组和高糖+LPS组足细胞nephrin,CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显减少(P 0. 05,P 0. 01); B淋巴细胞瘤-2相关凋亡蛋白(Bad蛋白)及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01)。与高糖+LPS组比较,厄贝沙坦组足细胞CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01); nephrin mRNA表达增加; Bad蛋白及mRNA蛋白表达减少。糖肾平各组足细胞CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01); Bad蛋白及mRNA蛋白表达减少(P 0. 05,P 0. 01)。结论:糖肾平维持足细胞裂孔隔膜蛋白稳定表达,保护肾小球滤过屏障,同时进一步激活PI3K/Akt信号通路,抑制足细胞凋亡;是其多靶点防治糖尿病肾病的作用机制之一。     

糖肾平胶囊对糖尿病肾病KKAy小鼠肾脏保护作用及对Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨糖肾平胶囊(糖肾平)对糖尿病肾病(DN) KKAy小鼠肾脏保护作用及其对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)途径信号通路的影响。方法:雌性10周龄SPF级KKAy小鼠60只,用KKAy鼠料诱导10周,以血糖16. 7 mmol·L~(-1),24 h尿蛋白 0. 4 mg确定DN小鼠模型成功。将成模小鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平小、中、大剂量(0. 525,1. 05,2. 1 g·kg~(-1))组,10只雌性C57BL/6J小鼠作为正常组。每个治疗组均相应的治疗药物进行灌胃,正常组、模型组小鼠给予等体积的去离子水灌胃,灌胃剂量按0. 01 mL·g~(-1)体质量系数,每天1次。观察小鼠一般情况,每4周称体质量并测24 h尿蛋白定量。第26周,眼球取血并处死小鼠,并测量肾脏的质量,分离血清测中血尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),甘油三酯(TG),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量;用原位杂交、免疫组化检测肾组织Wnt4,糖原合成酶激酶3β(GSK3β),β-连环蛋白(β-catenin) mRNA及蛋白的表达。结果:与模型组比较,糖肾平高剂量组体质量、肾重/体质量,24 h尿蛋白显著降低(P 0. 01);肾脏病理损害明显减轻,血清BUN,SCr,TG和MDA含量显著降低(P 0. 01),NO,SOD含量显著升高(P 0. 01),Wnt4,Gsk-3β,β-catenin mRNA及蛋白表达显著减少(P 0. 01)。结论:糖肾平可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活化,逆转DN KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化,延缓肾间质纤维化的进程,进而发挥肾脏保护作用。     

补肾益髓生血法再障大鼠含药血清对大鼠造血祖细胞增殖分化及其机制的影响

目的：探讨补肾益髓生血法再障大鼠含药血清对大鼠骨髓造血祖细胞增殖分化及其机制的影响。方法：60Co-γ射线联合环磷酰胺建立再障大鼠模型,以正常对照组、模型组、康力龙组、益髓生血组、温肾生血组和滋肾生血组复方中药灌胃大鼠,制备其含药血清培养正常大鼠骨髓细胞,培养体系中含药血清比例为20豫,进行骨髓造血祖细胞集落形成单位（CFU）计数;收集集落细胞,RT-PCR 检测红系GATA-1 mRNA及粒系PU.1 mRNA表达。结果：与正常对照组相比,模型组骨髓有核细胞显著减少（P<0.01）,造血祖细胞红系集落形成单位（CFU-E）、红系爆式集落形成单位（BFU-E）和粒单核系造血祖细胞集落（CFU-GM）数目均明显降低（P<0.01）,GATA-1、PU.1 mRNA表达显著降低（P<0.01）;与模型组相比,各个治疗组大鼠骨髓有核细胞升高,造血祖细胞CFU-E、BFU-E 和CFU-GM 数目显著增加（P<0.01）;滋肾生血组CFU-E、BFU-E明显优于益髓生血组（P<0.01）;滋肾生血组CFU-GM优于益髓生血组、温肾生血组。各治疗组GATA-1、PU.1 mRNA表达明显高于模型组（P<0.01）;滋肾生血组GATA-1 mRNA表达明显高于益髓生血组、温肾生血组（P<0.05）;滋肾生血组PU.1 mRNA表达高于益髓生血组、温肾生血组。结论：补肾益髓生血法可能通过增加GATA-1、PU.1 mRNA表达而促进骨髓造血祖细胞增殖分化,其中滋肾生血法优于益髓生血法和温肾生血法。