RNA干扰抑制丙型肝炎病毒复制的研究进展

RNA干扰技术(RNAi)是近两年来产生的新兴生物技术.RNAi作用的基本原理是双链小干扰RNA(siRNA)结合核酶复合物形成RNA诱导的沉默复合体(RISC),激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录体上并切割mRNA,进而破坏特定目的基因转录产生的mRNA,使其功能沉默.由于siRNA作用的阶段是在目的基因转录成为mRNA以后,即转录后,所以RNAi引导的基因沉默又称转录后基因沉默(PTGS).     

立体定向脑室镜下侧脑室造瘘术治疗透明隔囊肿

为探讨透明隔囊肿（SPC）的有效治疗方法，对13例SPC患者采用立体定向脑室镜下侧脑室造瘘术治疗。术后11例症状完全消失、2例改善；12例术后复查磁共振成像（MRI）示SPC技术前减小，最大横径平均减小12．6mm；无感染，出血、气颅等并发症发生。认为该术式是治疗SPC的有效方法，其优点是操作简单、创伤小、符合生理特点、疗效确切、无并发症。     

缩小版伤残接受度量表（修订版）在慢性脊髓损伤者中的应用

摘要 目的：评估缩小版伤残接受度量表修订版（简称缩小版量表）的信效度并分析慢性脊髓损伤者的伤残接受度及其影响因素。 方法：研究对象为277例慢性脊髓损伤者。采用缩小版量表、抑郁自评量表、广泛性焦虑自评量表、EQ-VAS和一般资料调查表收集数据。应用描述性分析、分层多元线性回归和信效度分析等方法进行统计分析。 结果：缩小版量表不存在地板效应和天花板效应,内部一致性信度良好,复测信度的相关系数除了扩大维度外,其余均在0.6以上。各条目与维度的相关系数都在0.7以上;探索性因子分析发现缩小版量表包括两个因子：正向维度和负向维度,验证性因子分析发现该模型可接受（CFI=0.96,RMSEA=0.07）;效标效度良好;不同个人特征患者的伤残接受度得分差异符合预期。慢性脊髓损伤者伤残接受度总体处于中等偏下水平,且正向维度得分好于负向维度。伤残接受度的正向影响因素包括没有焦虑或抑郁、有工作、教育水平更高、单身、受伤水平较低和完全性损伤,家庭收入和受伤年限的影响有限,性别和年龄不是影响因素。 结论：缩小版量表在慢性脊髓损伤者中的信效度总体良好。慢性脊髓损伤者伤残接受度水平较低,其主要影响因素包括焦虑抑郁情况、个人和家庭社会经济状况和受伤情况。     

天山雪莲自微乳制剂研究

目的建立雪莲自微乳制剂处方。方法通过配伍实验和伪三元相图的绘制,筛选油相、乳化剂、助乳化剂的最佳配比和处方配比。结果雪莲自微乳制剂处方中油相、表面活性剂、助表面活性剂分别为:肉豆蔻酸异丙酯、司盘80-吐温80和1,2-丙二醇。制剂载药量为6.56%。结论雪莲自微乳制剂处方组成为雪莲提取物、肉豆蔻酸异丙酯、司盘80-吐温80和1,2-丙二醇。油相、乳化剂、助乳化剂质量比为5∶3.3∶1.7。     

妊娠滋养细胞肿瘤的辅助治疗

妊娠滋养细胞肿瘤是一组来源于胎盘滋养细胞的疾病,包括侵蚀性葡萄胎、绒癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤和上皮样滋养细胞肿瘤。前两者在临床上统称为妊娠滋养细胞肿瘤。总体来说,妊娠滋养细胞肿瘤     

氟涂层镁铝合金的体外生物相容性研究简

目的 研究氟涂层镁铝合金的体外生物相容性。方法实验分为空白对照组（N组）、镁铝合金组（M组）、氟涂层镁铝合金组（F组）和阳性对照组（P组）4组。细胞毒性实验：将L929细胞在各组的DMEM浸提液中培养,光学显微镜下观察细胞生长状况。应用WST-1法测量光密度（OD）值。溶血实验：按GB-T16175-2008《医用有机硅材料生物学评价实验方法》第13部分《溶血试验》进行实验。测量各样本的OD值,计算溶血率。豚鼠最大剂量致敏实验,按照GBJ16886.10-2005（（医疗器械生物学评价》第10部分《刺激与迟发型超敏反应试验》进行实验。观察激发阶段去除贴附片后24、48、72h豚鼠皮肤致敏情况。结果各观察期F组的形态分级为0级,M组为4级。各组各观察期内OD值差异均有统计学意义（F=312.96,P=0.000）。第3天,实验组OD值均高于P组（1.050±0.065 vs 0.292±0.010）（P〈0.05）。第5天、第7天,F组与N组OD值（1.429±0.096 vs 1.622±0.156,0.928±0.040 vs 50.995±0.070）处于同一水平（P〉0.05）,均高于P组（0.270±0.015,0.281±0.006）（P〈0.05）。M组溶血率为68.3％,F组为0.8％。24h、48h和72h后N组、M组、F组皮肤均无红斑。结论氟涂层镁铝合金体外实验显示具有良好的生物相容性。     

多层螺旋CT冠状动脉造影评价心血管支架置入后血管再狭窄

文章阐述了随心血管支架在临床的广泛应用,其并发症以及支架再狭窄等问题不断出现,利用多层螺旋CT冠状动脉造影对支架术后的随访,对不同的心血管支架进行评估、并分析其生物相容性特点,对心血管支架发展提出意见。     

乙型肝炎病毒干预后小鼠肝脏树突状细胞P-干扰素调节因子3表达的研究

目的 研究HBV干预后小鼠肝脏树突状细胞P-干扰素调节因子3及其下游Ⅰ型干扰素表达的变化.方法用免疫磁珠分选法分离肝脏树突状细胞,并用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4在24孔板中诱导培养.用超离心技术获得HBV,并用实时荧光定量PCR检测.第5天将培养的树突状细胞分为2组:HBV组与HBV共同培养,对照组加入等量的细胞培养液.24 h后,两组均加入聚肌胞刺激,收集0、1、2、6、24 h的细胞和上清液,用Western blot检测P-干扰素调节因子3的表达情况,用酶联免疫吸附法检测上清液中干扰素β的浓度.组间比较用t检验.结果 0h时HBV组培养液上清液干扰素β浓度[(12.38 ±3.71)pg/ml]与对照组[(10.83±4.11)pg/ml]比较,差异无统计学意义(P>0.05).聚肌胞刺激后6 h,HBV组培养液上清液干扰素β浓度[(88.67±9.01)pg/ml]与对照组[(137.68±12.28)pg/ml]比较,t=9.653,P<0.01,差异有统计学意义.聚肌胞刺激后24h,HBV组培养液上清液干扰素β浓度[(69.89±5.80)pg/ml]与对照组[(72.25±8.61)pg/ml]比较,差异无统计学意义(P>0.05).聚肌胞刺激小鼠肝脏树突状细胞后P-干扰素调节因子3表达逐渐增强.经HBV干预在感染时病毒与细胞数量的比值为25,24 h后再用聚肌胞刺激2 h,HBV组P-干扰素调节因子3表达较对照组减弱.结论 HBV干预后小鼠肝脏树突状细胞P-干扰素调节因子3及其下游Ⅰ型干扰素表达均下调.

Abstract：

Objective To detect the secretions of type Ⅰ interferon and the expressions of phospho-IRF3 in murine liver dendritic cells intervened by HBV.Methods The murine liver dendritic cells were isolated via anti-CD11c microbeads and were incubated in the presence of GM-CSF and IL-4 to induce the DC generation and proliferation in 24-well cell culture plates.HBV virions were isolated via ultracentrifugation and were detected by quantitative Realtime-PCR.The DCs were divided into two groups:one group was cultured with HBV virions for 24 hours,the other group was cultured without HBV as control group.The cells were harvested at Oh,1h,2h,6h and 24h after being stimulated with poly I:C and the expressions of pIRF3 and the concentration of IFN β in supematants were detected with western blot and ELISA respectively.Results The IFN β concentrations at 0h,6h and 24h in the supernatants of the RBV group and the control group were(12.38±3.71)pg/ml,(88.67±9.01)pg/ml and(69.89±5.80)pg/ml vs(10.83±4.11)pg/ml,(137.68 ± 12.28) pg/ml and (72.25 ± 8.61) pg/ml,respectively. No statistical differences found at 0 h (t =0.8398,P > 0.05) and 24 h (t = 0.6820,P > 0.05) between the two groups except that at 6 h (t = 9.653,P <0.01). The expressions of phospho-IRF3 in HBV group were lower than that in control group. Conclusions The type Ⅰ interferon secretion and the phospho-IRF3 expression were decreased in murine liver dendritic cells when intervened by HBV.     

RNA干扰对乙型肝炎病毒复制的体外影响

目的:通过一种能够在细胞内表达短发卡RNA的逆转录病毒载体来研究RNA干扰对乙型肝炎病毒复制的影响.方法:首先针对HBV基因组Pol基因RT区寻找RNAi的靶位,并设计相对应的寡核苷酸链.然后再将一对碱基配对寡核苷酸链退火后连接入载体形成重组的质粒,并进行鉴定.在Huh-7细胞中,将通过鉴定的干扰质粒与HBV复制型质粒pHBV3.8共转染,分别应用ELISA方法来检测HBV相关的抗原,应用Northern印迹检测HBV RNA,以及应用实时荧光定量PCR和Southern印迹检测HBV核心颗粒DNA.结果:研究通过计算机方法协助寻找了3条RNAi靶位,并且构建了相应的基于逆转录病毒载体的RNA干扰质粒154i、312i和734i.结果发现312i对pHBV3.8表达有明显的抑制,HBsAg和HBeAg分别为阴性对照组的39%和41%,差异均有显著性(P=0.001,P=0.000).定量荧光PCR结果显示312i组核心颗粒DNA水平显著低于阴性对照组(21.3%±1.1%vs 100.0%±10.6%,P=0.0046).Southern blot和Northern blot结果均显示,312i组病毒复制及mRNA转录水平最低(10.5%,12.0%).结论:在HBV基因组RT区找到了一个可用于RNAi的靶位,并且构建了相对应的干扰质粒,此质粒可成功地抑制HBV复制型质粒在细胞中的复制和表达.