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目的 建立一种应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测乙型肝炎病毒(HBV)变异rtI233V的方法 .方法 参照GenBank收录的HBV基因逆转录(RT)区序列设计PCR引物,根据HBV RT区rt233位野生型和变异犁的序列,分别选择Bst1107I和Bsp1407I两种内切酶.以rtI233V变异株及野毒株质粒为模板进行PCR扩增,PCR产物分别用Bst1107I和Bsp14071两种限制性内切酶进行酶切,观察酶切产物琼脂糖凝胶电泳条带变化.并以变异型和野生型质粒的不同配比,分析该检测方法 的敏感性.结果 本研究建立的PCR-RFLP方法 可同时检测野毒株和rtI233V变异株.PCR扩增后,野毒株和rtI233V变异株的PCR产物长度均为255 bp.以Bst 11071酶切,野毒株质粒的PCR产物可以切成75 bp和180 bp两段,rtI233V变异株PCR产物的长度保持不变.以Bsp1 4071酶切,rtI233V变异株质粒的PCR产物可以切成75bp和180bp两段,野毒株质粒的PCR产物长度保持不变,测序结果 与上述结果 一致.敏感性检测表明,此方法 至少可检出标本中10%的变异株.应用此方法 检测100例慢性乙型肝炎患者,筛选出2例rtI233V变异患者.结论应用PCR-RFLP方法 可检测rtI233V变异,具有较高的敏感性,可用于HBV变异rtI233V的早期诊断. 相似文献
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基于丙型肝炎病毒NS5B基因序列分析的基因分型 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:建立基于丙型肝炎病毒(HCV)NS5B基因序列分析的基因分型方法,对上海地区慢性丙型肝炎进行基因分型。方法:用HCVRNA实时荧光定量检测试剂盒对慢性丙型肝炎患血清标本的HCV RNA水平进行定量分析。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和套式-PCR扩增HCV RNA阳性的41份标本的部分HCV NSSB区基因,PCR产物经回收、纯化后直接进行测序分析。从GenBank中下载25份不同基因型的HCV原型序列,用NSSB区222bp的基因片段构建系统进化树,对临床标本相应的HCVNS5B区序列进行分析。结果:基于HCVNS5B基因序列的系统进化树分析,可成功地对本组41份标本进行基因分型。分型结果显示,1b型占85.4%(35/41),2a型占12.20%(5/41),3a型占2.44%(1/41)。结论:基于HCVNSSB区基因序列的系统进化树分析是一种可靠和方便的HCV基因分型方法。上海地区的HCV基因型以1b型为主。 相似文献
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29岁的张女士怀孕4个月。最近,她去某医院做产前检查,结果发现乙肝大三阳,HBVDNA(乙肝病毒基因)3.24×10^8拷贝/毫升(参考值〈500拷贝/毫升),丙氨酸转氨酶(ALT)正常,后数次检查肝功能均正常。平常,张女士身体没有任何不适。可病毒量这么高,孩子会被感染乙肝吗,要不要服用抗病毒药?服抗病毒药,会对孩子造成哪些影响?张女士心中很纠结。 相似文献
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慢性乙型肝炎的治疗关键是抗病毒治疗,怎样才能使抗病毒药物发挥最大的抗病毒作用、达到有效的抗病毒疗效,是医生和患者共同面临的问题。准确地掌握乙肝抗病毒治疗适应证,是保障后续抗病毒疗效的关键因素之一,而丙氨醛氨基转移酶(ALT)水平是判定应否开始抗病毒治疗的重要参考指标之一。对于ALT,很多患者甚至一些医生存在不少认识误区。笔者结合临床实践,将一些常见误区进行了总结并提出相应对策,希望能对乙肝患者有一定帮助。 相似文献
9.
目的:通过一种能够在细胞内表达短发卡RNA的逆转录病毒载体来研究RNA干扰对乙型肝炎病毒复制的影响.方法:首先针对HBV基因组Pol基因RT区寻找RNAi的靶位,并设计相对应的寡核苷酸链.然后再将一对碱基配对寡核苷酸链退火后连接入载体形成重组的质粒,并进行鉴定.在Huh-7细胞中,将通过鉴定的干扰质粒与HBV复制型质粒pHBV3.8共转染,分别应用ELISA方法来检测HBV相关的抗原,应用Northern印迹检测HBV RNA,以及应用实时荧光定量PCR和Southern印迹检测HBV核心颗粒DNA.结果:研究通过计算机方法协助寻找了3条RNAi靶位,并且构建了相应的基于逆转录病毒载体的RNA干扰质粒154i、312i和734i.结果发现312i对pHBV3.8表达有明显的抑制,HBsAg和HBeAg分别为阴性对照组的39%和41%,差异均有显著性(P=0.001,P=0.000).定量荧光PCR结果显示312i组核心颗粒DNA水平显著低于阴性对照组(21.3%±1.1%vs 100.0%±10.6%,P=0.0046).Southern blot和Northern blot结果均显示,312i组病毒复制及mRNA转录水平最低(10.5%,12.0%).结论:在HBV基因组RT区找到了一个可用于RNAi的靶位,并且构建了相对应的干扰质粒,此质粒可成功地抑制HBV复制型质粒在细胞中的复制和表达. 相似文献
10.
丙型肝炎病毒感染与糖尿病 总被引:3,自引:0,他引:3
近年来,有很多流行病学调查证实了HCV感染与糖尿病的关联,这种关联在年龄大、体重超标的患者身上表现更为明显。HCV编码的蛋白,能干扰胰岛素的信号转导,这就解释了在发生肝纤维化之前,HCV感染者出现胰岛素抵抗的原因,而胰岛素抵抗也促进了肝纤维化的进程。 相似文献