血管内皮细胞生长因子受体KDR基因靶向RNA干扰质粒的构建

目的:应用RNA干扰技术设计构建针对血管内皮细胞生长因子受体KDR的小干扰RNA,并观察脂质体转染肺癌细胞A549后的干扰效果。方法:实验于2005-03/2006-01在沈阳医学院生物化学及分子生物学教研室完成。①设计针对KDR编码区有短发夹结构的3条mRNA序列,经退火成互补双链,克隆到pGCsi.H1/neo/GFP载体中构建3个重组质粒,分别命名为KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3。②设立5组:小干扰RNA组,分别转染KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3;阳性对照组,转染pGCsi.H1/neo/siGFP,该质粒载体中的插入序列为针对绿色荧光蛋白的小干扰RNA,不干扰待研究的内源性基因;阴性对照组,转染pGCsi.H1/neo/GFP/NON,该载体为不干扰任何内源性基因的小干扰RNA;空白对照组,转染pGCsi.H1/neo/GFP空载体;正常对照组,不进行任何转染。③对重组质粒进行酶切鉴定、DNA测序分析;脂质体法转染质粒至肺癌A549细胞株后,实时定量PCR检测KDRmRNA的水平变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线。结果:①小干扰RNA表达载体的鉴定:KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3表达载体用限制性内切酶NdeⅠ和SmaⅠ进行单酶切后,均产生约713bp、5480bp和2403bp、3790bp两个片段,与预期结果相同。测序结果与设计的编码相应短发夹状KDR-小干扰RNA的寡核苷酸序列一致,证明KDR-小干扰RNA真核表达载体构建成功。②KDR-小干扰RNA对A549细胞中KDRmRNA水平的影响:与阳性对照组、阴性对照组、空白对照组和正常对照组的A549细胞相比,KDR-siRNA1,2,3表达载体转染后的A549细胞KDR基因表达水平均明显受到抑制,抑制率分别为64%、81%和72%,其中以KDR-siRNA2抑制作用最为明显。③KDR-小干扰RNA对A549细胞生长的影响:阳性对照组、阴性对照组、空白对照组、正常对照组的A549细胞生长趋势较为一致,且生长速度均明显高于转染3种KDR-小干扰RNA表达载体的A549细胞,从接种第2天开始差异有显著性意义(t=15.29～17.65,P均<0.01)。结论:血管内皮细胞生长因子受体KDR靶向RNA干扰重组质粒构建成功,该载体能有效抑制肺癌A549细胞KDR基因表达与细胞增殖。     

脑卒中患者静态踝足矫形器选择效果的临床回顾性分析

目的：回顾性分析临床病历资料以了解静态踝足矫形器在脑卒中患者中的应用情况．为踝足矫形器的合理应用提供依据。方法：对2002年1月-2004年12月脑卒中住院患者的病历资料进行回顾性分析．将病程1—3个月的脑卒中患者按是否使用静踝足矫形器（AFO）分为观察组（穿戴AFO，41例）和对照组（未穿戴AFO，118例）。结果：①两组患者入院时的一般资料无明显差异，出院时两组患者下肢Brunnstrom分级均较入院时升高．但两组间无显著差异，出院时两组Barthel指数均较入院时明显提高，但观察组较对照组增加更显著（P〈0．05）：②观察组出院时独立步行患者的比例（65．8％）显著高于对照组（43．2％），不能步行的比例由入院时的56．2％降低到出院时的4．9％。而对照组出院时不能步行的比例仍高达22．1％，显著高于观察组。出院时10m一坐一站一走时间测定．观察组所需时间明显低于对照组（P〈0．05）。观察组下肢Brunnstrom3级以上者均可恢复不同程度的步行能力．而对照组下肢Brunnstrom3级以上者不能步行的比例达17．8％；③观察组住院天数明显短于对照组，医疗费用也低于对照组。结论：静态踝足矫形器早期应用有助于提高步行能力和日常生活能力。同时缩短康复时程和住院周期．降低医疗费用。     

银杏达莫对脑梗死的疗效观察

目的观察银杏达莫注射液对脑梗死的临床疗效。方法 66例脑梗死病人随机分为银杏达莫组(36例)和维脑路通组(30例),两组患者均于治疗前、后各进行一次血液流变学检测和神经功能缺损评分,观察临床症状。结果两组患者治疗后血液流变学指标及神经功能缺损评分均下降,但治疗组优于对照组。结论银杏达莫对脑梗死的疗效显著且安全可靠。     

高频rTMS对健康大鼠认知功能与运动皮质LTP变化的相关性研究

目的：探究前额叶高频重复经颅磁刺激（repetitive transcranial magnetic stimulation,rTMS）是否能提高健康大鼠认知功能,以及认知功能与运动皮质长时程增强（long?term potentiation,LTP）样可塑性的相关性。方法：24只SD健康成年大鼠,随机分为control组和rTMS组（n=12）,rTMS组接受为期4周的高频（10 Hz）rTMS,control组接受4周假刺激。使用水迷宫检测干预前后认知功能的改变;通过TMS结合肌电图运动诱发电位（motor evoked potential,MEP）评价干预前后运动皮质（M1区）LTP样可塑性的改变;通过Western blot检测干预后大鼠M1区NR1、NR2A、NR2B的蛋白表达改变。结果：前额叶高频rTMS可以提高健康大鼠空间情景记忆能力（P＜0.05）;前额叶高频rTMS可以增强M1区可塑性,表现为M1区LTP样可塑性增高及NR1和NR2A蛋白表达上调（P＜0.05）;且M1区LTP样可塑性的改变与空间情景记忆能力成正相关（P < 0.05）。结论：高频rTMS可改善健康大鼠的空间情景记忆及运动皮质LTP样可塑性,且认知功能与运动皮质LTP样可塑性呈正相关。     

多参数MRI及PET在子宫内膜癌的应用进展

子宫内膜癌(EC)是发生于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤,为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,好发于围绝经期和绝经后女性,常伴随不规则阴道出血。术前准确分期对选择治疗方案和改善预后至关重要。多参数MRI(如DCEMR、DWI、MRS)及PET/CT、PET/MR在EC的术前诊断、肿瘤分期及术后评估中各具优势。本文围绕MRI及PET对EC的研究进展进行综述。     

女性哮喘患者吸入糖皮质激素对骨代谢的影响

目的 :了解女性哮喘患者长期吸入糖皮质激素是否有引起骨质丢失的可能及其与吸入激素剂量的关系。方法 :采用双能X线骨密度仪 (DXA)分别测定了 14例每日坚持吸入GC大于等于 5月的女性哮喘患者和 14例与之配对的未使用GC的哮喘患者的脊椎骨 (L2 -L4 )、股骨颈、股骨粗隆、股骨三角及股骨总量的骨密度 (BMD) ,同时用放免法等测定这些患者的血骨钙素 (BGP)以及碱性磷酸酶 (AKP)等指标 ,进行对比分析。结果 :吸入GC≥ 5月的哮喘患者组与对照组两组病人的脊椎骨 (L2 -L4 )、股骨颈、股骨粗隆、股骨三角及股骨总量的绝对BMD和相对BMD(与同年龄、性别相应正常值的百分比 )以及T评分之间的比较、以及血BGP、AKP等各指标之间的比较无显著差异。吸入组患者 5处绝对骨密度值与其相应日均吸入GC量之间未呈现明显的相关性 ,P均 >0 0 5。吸入组脊椎骨、股骨粗隆及股骨总量 3处绝对骨密度值与其GC累积量之间也未呈现明显的相关性 ,P均 >0 0 5。但吸入组股骨颈和股骨三角的绝对骨密度值与GC累积量之间似有某些负相关 ,P <0 0 5。吸入组骨密度有 3人 6处T评分≤ -2 5 ,对照组仅有 1处T评分≤ -2 5。吸入组股骨三角处的绝对骨密度值与其年龄之间似有负相关 ,P <0 0 5 ,而对照组 5处绝对骨密度值与其年龄之间未呈现明     

新型大鼠心跳骤停和复苏的机械装置

目的研发由电磁阀系统总控制、压缩气体驱动的新型大鼠电刺激诱发心跳骤停和复苏的机械装置,并探讨其有效性和安全性。方法选用Sprague-Dawley雄性大鼠20只,应用自主开发研制的心跳骤停和复苏机械装置,持续交流电经右心室内膜致颤。在6min心室颤动后,开始给予6min的机械胸外按压和同步机械通气,随后双向波经胸体外除颤。结果15只大鼠复苏成功,自主循环恢复率为75%。电刺激后所有大鼠立刻出现心室颤动,3min的电刺激停止后动物持续表现为室颤而没有自发转复心律现象。心肺复苏期间恢复自主循环组其冠状动脉灌注压恒定在24mmHg左右,显著高于未能恢复自主循环组。结论本新型大鼠心跳骤停和心肺复苏装置的有效性和安全性高,可最大限度减少实验的误差,具有一定的推广应用前景。     

不同训练时间的有氧运动干预轻中度阿尔茨海默病的临床研究

摘要 目的：探讨不同训练时间的有氧运动对轻中度阿尔茨海默病(AD)患者的作用。 方法：将54例AD患者随机分为有氧运动A组（18例）、有氧运动B组（18例）和对照组（18例）,有氧运动组采用踩脚踏车的运动方式,接受强度为70%最大运动能力的有氧运动训练,A组每周2h训练,B组每周1h训练,持续6个月。分别在入组前、入组3个月、入组6个月时,采用MMSE、ADAS-cog、Barthel指数、NPI和NPI-D进行AD相关评价。 结果：A组有氧运动能明显改善患者的认知能力和精神神经症状,3个月和6个月时的MMSE评分从基线值19.1±3.1分别增加至21.4±2.5、24.2±1.8;ADAS-cog评分从基线值19.9±2.7分别降低至17.5±2.2、14.9±1.7;Barthel指数评分从基线值35.0±2.8分别增加至39.3±2.0、43.4±2.2;以上差异均有显著性意义（P<0.05）。NPI评分变化值3个月时为-1.8±5.2,6个月时为-1.6±4.2,后者有显著性意义(P<0.05);NPI-D评分变化值3个月和6个月分别为-1.9±3.1和-1.5±2.6,两者均有显著性差异（P<0.05）。B组仅在有氧运动早期（3个月时）可改善患者的认知功能（P<0.05）,MMSE评分从基线值19.1±2.8增加至20.3±2.0,ADAS-cog评分从基线值20.1±2.5降低至18.3±2.5,对患者日常生活活动能力和精神神经症状无有益影响。Barthel指数与MMSE、ADAS-cog分值的变化无相关关系（r=0.136,r=0.77）。 结论：6个月的每周2h的有氧运动较3个月的有氧运动在改善AD患者的认知功能、生活能力、神经精神症状以及对照顾者的困扰评分方面获益较多。     

脑卒中后阻塞性睡眠呼吸暂停患者口咽部形态学变化及其与功能恢复的相关性

摘要 目的：分析卒中后阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）患者口咽部形态学变化及其与功能恢复之间的相关性,为寻求脑卒中并发OSA的康复治疗措施提供依据。 方法：选取首次发病且病程1个月之内的脑卒中患者39例,排除发病前已确诊OSA的患者,入组患者均行多导睡眠图（PSG）监测、口咽部核MRI检查及各项功能评估,将并发与不并发OSA患者的咽部MRI测量相关指标进行比较,将脑卒中并发OSA患者的咽部测量指标与患者的功能评估指标进行相关分析。 结果：①并发OSA的脑卒中患者腭后距离、舌后距离较不并发OSA者偏小、软腭长度较不并发OSA者偏大,两者相比有显著性差异（P=0.002/0.003/0.019）。②脑卒中并发OSA患者的腭后距离与改良Barthel指数评分呈正相关、与改良Rankin分级呈负相关;舌后距离与患者的NIHSS评分、改良Rankin分级呈负相关,与患者Fugl-Meyer评分、改良Barthel指数评分呈正相关（P＜0.05）。 结论：脑卒中并发OSA患者的口咽部形态学变化（腭后距离及舌后距离偏小）与患者的功能评估间有一定相关性,所以改善脑卒中后OSA患者口咽部形态学的变化有利于患者的功能恢复。     

分阶段辨证施治配合免疫抑制剂治疗原发性肾病综合征临床疗效观察

目的观察分阶段辨证施治配合免疫抑制剂治疗原发性肾病综合征(PNS)临床疗效。方法将60例PNS患者随机分成两组各30例。对照组予以足量、规范免疫抑制剂;治疗组临床在对照组治疗基础上分阶段中药辨证施治。疗程24周。结果治疗组临床总有效率为93.33%,对照组为73.33%,两组比较有显著性差异(P0.05);治疗组症状积分改善及减少痤疮发生、降低神经系统兴奋性明显优于对照组(P0.05)。结论分阶段辨证治疗原发性肾病综合征可提高临床有效率,减少激素副作用。