精子蛋白17抗体免疫磁性颗粒活性分析及细胞成像研究

目的:制备精子蛋白17(Sp17)抗体免疫磁性纳米颗粒, 以期用于卵巢癌的磁共振成像靶向诊断.方法:在偶联剂EDC/NHS作用下, 将壳聚糖修饰磁性氧化铁纳米颗粒与抗人Sp17抗体结合, 制备抗Sp17抗体免疫磁性纳米颗粒(IMNPs).透射电镜观察颗粒的形貌特征, 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳评价抗体与磁性颗粒的结合效果, ELISA检测免疫磁性颗粒的免疫活性.将IMNPs与转染人Sp17的卵巢癌HO-8910细胞共孵育, 进行体外磁共振成像检测.结果:成功实现了抗体与磁性纳米颗粒的偶联, 并且IMNPs保持良好的抗体活性.磁共振显示该颗粒成功靶向Sp17阳性的细胞, 没有发生明显的非特异吸附.结论:该免疫磁性纳米颗粒特异性良好, 可进一步用作卵巢癌的靶向治疗研究.     

血清抗烟曲霉二肽基肽酶Ⅴ肽段IgG类抗体ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测人血清中抗烟曲霉二肽基肽酶Ⅴ(dipeptidyl peptidasesⅤ,DPPⅤ)肽段IgG类抗体(抗DPPⅤ)的ELISA法,评估其对侵袭性曲霉病(IA)的早期诊断价值。方法用重组烟曲霉DPPⅤ肽段作为包被抗原,建立检测血清中抗DPPⅤ的ELISA法,检测105例IA患者、200例非IA患者及200例健康人血清中抗DPPⅤ水平,确定cut off值,考查方法的精密度和特异性。部分IA患者抗DPPⅤ结果与抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(TR)抗体(抗TR)检测和曲霉半乳甘露聚糖(GM)检测结果对比,评价其临床应用价值。结果以建立的ELISA法检测吸光度(A)值为6.688、0.709的2份抗DPPⅤ抗体阳性血清,批内变异系数(CV)为4.1%和8.0%,批间CV为7.1%和10.7%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率90%。以A值0.542为cut off值,对IA诊断的敏感性为66.7%,特异性为90.7%。非中性粒细胞缺乏的IA患者抗DPPⅤ阳性率(75.3%,55/73)高于中性粒细胞缺乏的IA患者(46.9%,15/32),差异有统计学意义(χ2=8.11,P0.05);92例IA患者血清抗DPPⅤ、抗TR和GM测定总阳性率分别为63.0%、60.9%和73.9%,差异无统计学意义(P0.05);中性粒细胞缺乏的IA患者GM阳性率(89.7%)显著高于抗DPPⅤ、抗TR的阳性率(41.4%和34.5%),χ2分别为14.96、18.75,P均0.01。抗DPPⅤ与抗TR联合检测阳性率达到82.6%,抗DPPⅤ、抗TR和GM试验三者联合检测的阳性率可提高到96.7%。结论检测抗DPPⅤ抗体的ELISA法精密度和特异性较好,对侵袭性曲霉感染具有潜在的辅助诊断价值,联合多个指标检测可提高诊断的敏感性。     

人精子蛋白17基因在大肠杆菌中的表达

目的: 克隆人精子蛋白17(hSp17)基因,构建重组表达载体并表达重组蛋白. 方法: 用RT-PCR法从人睾丸中克隆hSp17基因,构建重组表达质粒pET-28a( )/hSp17,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,用特异性hSp17的mAb进行Western blot鉴定,Ni-NTA His-Bind树脂纯化重组蛋白. 结果: 克隆到hSp17 cDNA(456 bp)并经过DNA测序证实,表达和纯化得到重组蛋白hSp17(表观Mr为27 500),并经过Western blot鉴定. 结论: 成功克隆和表达hSp17 基因.     

肿瘤研究中近红外技术与其他技术的联合应用

近红外技术可用于肿瘤早期诊断以及辅助外科手术中切除肉眼不可分辨的微小病灶.但由于其存在很多不足之处,该技术的单独应用尚不能满足需要.于是发展了近红外与其他技术的融合技术,扩展了应用范围.文中综述了几种融合技术在肿瘤研究中的应用,包括近红外与核素双标记技术的联合、近红外与荧光共振能量转移技术的联合、近红外和内镜技术的联合及近红外与碳纳米管技术的联合.     

放射诱导基因治疗肿瘤的研究进展

近年来，放射诱导基因治疗已成为肿瘤治疗领域新的研究热点之一。该治疗策略一方面将放射治疗与基因治疗有机地结合，发挥协同治疗作用；另一方面由于放疗具有靶向性和可控性，实现了对杀伤基因表达的时空调控。相关的研究已经取得一定进展，作者简要概述目前的研究现状及该技术未来的应用前景。     

用聚合酶链反应检测人巨细胞病毒DNA的失败原因

聚合酶链反应(PCR)是一种新的基因扩增技术,应用日趋广泛,但影响因素较多。我们在用 PCR 检测人巨细胞病毒(HCMV)DNA 时发现,紫外吸收法进行引物定量,不一定能测出样品中寡核苷酸的实际含量,引物寡核苷酸定量不准,是 PCR 不成功的重要原因。材料与方法(一)PCR 模板 HCMV AD 169株,引自解放军第302医院病毒室。病毒经人胚肺纤维母细胞培养增殖,冰融3次,直接或     

亲环素及其自身抗体与SLE活动性的相关性探讨

目的：探讨血浆与淋巴细胞内亲环素（ＣｙＰ）水平及抗亲环素自身抗体与全身性红斑狼疮（ＳＬＥ）活动性的关系。方法：用重组人亲环素（ｒｈＣｙＰ）制备单克隆和多克隆抗体,建立双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法,测定血浆和细胞内ＣｙＰ水平,用ｒｈＣｙＰ包被反应板微孔,建立间接ＥＬＩＳＡ法检测抗ＣｙＰ自身抗体,对活动性和非活动性ＳＬＥ患者进行了观察。结果：ＳＬＥ患者含量分别为（３２３±４２０）μｇ／Ｌ和（２６４０±６５０）μｇ／ｇ蛋白,均显著高于正常对照组的（１６５±８０）μｇ／Ｌ和（２２９０±３８０）μｇ／ｇ蛋白;其中活动性ＳＬＥ患者又显著高于非活动性ＳＬＥ（Ｐ＜０．０５）。ＳＬＥ抗ＣｙＰ自身抗体阳性率（４８％）显著高于正常人（２．５％）,抗ＣｙＰ阳性与皮肤粘膜损害、关节痛、发热、白细胞减少、抗Ｓｍ抗体阳性密切相关。结论：血浆和淋巴细胞内ＣｙＰ升高和抗ＣｙＰ自身抗体阳性可反映ＳＬＥ活动性。     

人穿孔素cDNA的克隆与序列分析

引言穿孔素（ｐｅｒｆｏｒｉｎ）又称成孔蛋白（ｐｏｒｅｆｏｒｍｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＰＦＰ）,是一种主要由激活的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）和自然杀伤（ＮＫ）细胞所产生的溶细胞蛋白,贮存于细胞的杀伤颗粒中,在细胞介导的杀伤过程中起非常关键的作用［１］。...     

A组轮状病毒检测方法的研究及初步应用

用抗自制A组轮状病毒(RV)共同组抗原的McAb(2C7)建立了检测A组RV的2种新方法(RIHA,OS),并与RT和PAGE法进行了比较。结果显示,这2种方法实用性强,特异性好,方法简便,快速,便于推广。对54例疑为RV感染的婴儿粪样。用4种方法进行测定,阴、阳性总符合率为90.7％(49/54)。RIHA、OS与PAGE法符合率均为96.2％。经统计学处理P值>0.05,表明3种方法之间无显著性差异。RIHA、OS可作为A组RV快速诊断之用。但RV McAb(2C7)为识别A组RV共同组抗原的McAb,故不能区别A组RV的亚组及血清型。     

免疫亲和素与蛋白折叠、信号传导及免疫抑制的关系

免疫系统具有精细的识别自己和非己的能力。异体移植的器官往往被受体免疫系统识别和攻击,这是移植医学最棘手的问题,从而需要用免疫抑制药物进行预防。常用免疫抑制剂如环孢素A(CsA)、FK506和雷帕霉素(rapamycin)均可选择性地抑制T淋巴细胞的激活。对这三种药物作用机理的研究发现,它们都与细胞内相应的受体蛋白结合形成复合物,再与淋巴细胞信号传导途径的其它成分相互作用,从而阻断抗原对T淋巴细胞的激活而产生免疫抑制。由于与免疫抑制剂的高度亲和性,这些受体蛋白被称为免疫亲和素(immunophilin),它们本身具有肽基脯氨酸顺/反异构酶(…