子宫内膜癌和宫颈癌中CT 抗原精子蛋白17 的异常表达

 目的　人精子蛋白17 ( sperm protein 17 ,Sp17) 正常情况下局限表达于睾丸,近年发现在上皮性 卵巢癌等恶性肿瘤中异常表达,已被列入CT (cancer/ testis) 抗原家族。我们研究该蛋白在不同病理类 型的子宫内膜癌和宫颈癌中的表达频度、分布类型以及与肿瘤临床分期分级的关系,旨在探讨Sp17 是 否可能成为相关妇科肿瘤诊断标志和治疗靶标。方法　用免疫组化技术检测81 例石蜡包埋的妇科恶 性肿瘤组织标本中Sp17 的表达,其中包括50 例子宫内膜癌(腺癌44 例、腺鳞癌6 例) 和31 例宫颈癌 (鳞癌17 例、腺癌14 例) 。结果　子宫内膜癌组织Sp17 的阳性率为66 %(33/ 50) ,其中腺癌29 例阳性, 腺鳞癌4 例阳性,表达模式呈异质性,Sp17 表达与肿瘤分化程度和临床分期均无相关性。宫颈癌组织 Sp17 总阳性率32. 2 %(10/ 31) ,鳞癌23. 5 %(4/ 17) ,腺癌42. 8 %(6/ 14) 。结论　Sp17 在子宫内膜癌和宫 颈腺癌中呈高水平异常表达,尽管其表达与肿瘤分化程度和临床分期无明显相关,仍有可能作为肿瘤体 内显像诊断和免疫治疗的分子靶标。     

亲环素及其自身抗体与SLE活动性的相关性探讨

目的：探讨血浆与淋巴细胞内亲环素（ＣｙＰ）水平及抗亲环素自身抗体与全身性红斑狼疮（ＳＬＥ）活动性的关系。方法：用重组人亲环素（ｒｈＣｙＰ）制备单克隆和多克隆抗体,建立双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法,测定血浆和细胞内ＣｙＰ水平,用ｒｈＣｙＰ包被反应板微孔,建立间接ＥＬＩＳＡ法检测抗ＣｙＰ自身抗体,对活动性和非活动性ＳＬＥ患者进行了观察。结果：ＳＬＥ患者含量分别为（３２３±４２０）μｇ／Ｌ和（２６４０±６５０）μｇ／ｇ蛋白,均显著高于正常对照组的（１６５±８０）μｇ／Ｌ和（２２９０±３８０）μｇ／ｇ蛋白;其中活动性ＳＬＥ患者又显著高于非活动性ＳＬＥ（Ｐ＜０．０５）。ＳＬＥ抗ＣｙＰ自身抗体阳性率（４８％）显著高于正常人（２．５％）,抗ＣｙＰ阳性与皮肤粘膜损害、关节痛、发热、白细胞减少、抗Ｓｍ抗体阳性密切相关。结论：血浆和淋巴细胞内ＣｙＰ升高和抗ＣｙＰ自身抗体阳性可反映ＳＬＥ活动性。     

不育患者血清精子蛋白17抗体的检测及临床意义

目的:检测抗精子抗体(AsAb)阳性不育患者血清中抗精子蛋白17(Sp17)的抗体,探讨该抗体在免疫性不育血清学诊断和免疫避孕方面的潜在应用价值。方法:用重组人Sp17作为抗原,ELISA法检测62例AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率及滴度,分析AsAb中抗Sp17的含量。结果:AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率为56.5%,男女之间差异无显著性。Sp17抗体占AsAb的(10.09±7.45)%,结果具有统计学意义(P<0.05)。结论:Sp17是重要的精子抗原组分,血清中Sp17抗体的检测可作为不育患者辅助诊断指标,同时也提示Sp17可能是一种免疫避孕候选抗原疫苗。     

烟曲霉硫氧还蛋白还原酶双抗体夹心ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测烟曲霉硫氧还蛋白还原酶Gli T(thioredoxin reductase Gli T,TR)的双抗体夹心ELISA法,并用于几种真菌培养上清液中TR蛋白的检测。方法纯化鼠抗人TR单克隆抗体并进行辣根过氧化物酶(HRP)标记。以纯化羊抗TR多克隆抗体为包被抗体,HRP标记鼠抗人TR单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法。用方阵滴定法确定包被抗体和检测抗体的最适浓度;对方法的精密度、特异性和最低检测限进行评价;比较分析其检测3种常见曲霉(烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉)培养上清中天然TR蛋白的能力,并与3种常见假丝酵母菌(白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌)作比较。结果方阵滴定的结果显示最适包被抗体浓度为1μg/m L,最适检测抗体的稀释度为1∶3 000。抗原最低检测限达2.25ng/m L。重组TR浓度为5 ng/m L和20 ng/m L时,批内和批间变异系数分别为8.57%、12.69%和6.73%、10.45%。阻断实验显示该法有较好的特异性,阻断率达84.7%。该法可以检出烟曲霉24 h培养上清中的天然TR,TR含量与烟曲霉菌丝含量呈正相关。本法与另2种曲霉和3种假丝酵母菌培养上清无交叉反应。结论成功建立并优化了检测烟曲霉TR抗原的ELISA法。该法具有良好的精密度及特异性,对烟曲霉感染有潜在的诊断价值。     

人亲环素A基因克隆及在大肠杆菌中表达

目的 :用基因重组技术表达人亲环素 A( Cy PA) ,以避免从人组织材料中提取纯化该蛋白的麻烦。　 方法 :应用反转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术从人淋巴细胞系 ( MT4 )总 RNA中扩增得到 Cy PA基因片段 ,并用重组 DNA技术对该基因片段进行克隆 ,构建表达载体 ,转入大肠杆菌进行表达。　 结果 :DNA序列分析表明 ,得到的基因片段与设计编码 Cy PA的结构基因序列完全相同。所构建的表达载体 p ET11/Cy PA转入大肠杆菌获得表达 ,重组蛋白表达量占菌体可溶性蛋白的 4 1% ,经测定具有肽基脯氨酸顺 /反异构酶活性。　 结论 :利用基因重组技术使大肠杆菌高效表达出有生物活性的人 Cy PA。     

用免疫磁珠法检测抗白念珠菌烯醇化酶抗体

摘要：目的：建立检测人血清抗白念珠菌烯醇化酶(Eno)IgG类抗体的免疫磁珠法,并评估其在念珠菌血症诊断中的价值。 方法：将Eno重组蛋白耦联至磁性微珠上,以辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗人IgG为二抗,优化免疫磁珠法的反应条件,考察其精密度和特异性。收集经血培养确诊的念珠菌血症患者（n=113）、念珠菌定植者（n=50）、细菌菌血症患者（n=30）和健康人对照者（n=100）血清,用免疫磁珠法测定抗Eno抗体,并与ELISA法结果进行比较。 结果：免疫磁珠法测定抗Eno抗体的批内、批间变异系数（CV）分别为8.2%和14.2%,重组Eno抗原对相应抗体的阻断率为91.6%。以吸光度（A）值0.29为cut off值时,诊断念珠菌血症的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为80.5%、92.3%、90.1%和84.5%。免疫磁珠法的敏感性和特异性与ELISA法比较无统计学差异,但检测流程从37 ℃ 2.5 h缩短至常温1 h。 结论：免疫磁珠法检测抗Eno IgG类抗体简便、快捷、可靠,在侵袭性念珠菌感染研究中具有潜在的应用价值。     

人穿孔素C端肽段的放射诱导表达

目的 观察克隆的人穿孔素(perforin,PFN)羧基端肽段在肺癌细胞SPC-A1中的放射诱导表达及其对该细胞的杀伤活性.方法 用PCR方法获取hPFN-C基因片段,将该基因片段克隆到含放射诱导启动子的真核表达载体pcDNA3.1( )/Egr-1,脂质体介导转染SPC-A1细胞.放射诱导表达后,RT-PCR、免疫细胞化学方法检测该基因片段在SPC-A1中的表达.MTT法检测该基因片段的表达产物对SPC-A1细胞的杀伤活性.结果 成功获取hPFN-C基因片段,构建了放射诱导表达的真核表达载体,转染SPC-A1细胞后,免疫细胞化学法证实目的蛋白出现在细胞质中,而未照射的细胞则没有hPFN-C基因表达. MTT法检测显示,与对照组相比,有hPFN-C 表达的SPC-A1细胞存活率仅为0.657.结论 成功构建hPFN-C基因片段的放射诱导表达载体,它在SPC-A1细胞中获得可控性表达,其表达产物对该细胞具有较强的杀伤活性.     

人精子蛋白17基因在大肠杆菌中的表达

目的: 克隆人精子蛋白17(hSp17)基因,构建重组表达载体并表达重组蛋白. 方法: 用RT-PCR法从人睾丸中克隆hSp17基因,构建重组表达质粒pET-28a( )/hSp17,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,用特异性hSp17的mAb进行Western blot鉴定,Ni-NTA His-Bind树脂纯化重组蛋白. 结果: 克隆到hSp17 cDNA(456 bp)并经过DNA测序证实,表达和纯化得到重组蛋白hSp17(表观Mr为27 500),并经过Western blot鉴定. 结论: 成功克隆和表达hSp17 基因.     

A组轮状病毒检测方法的研究及初步应用

用抗自制A组轮状病毒(RV)共同组抗原的McAb(2C7)建立了检测A组RV的2种新方法(RIHA,OS),并与RT和PAGE法进行了比较。结果显示,这2种方法实用性强,特异性好,方法简便,快速,便于推广。对54例疑为RV感染的婴儿粪样。用4种方法进行测定,阴、阳性总符合率为90.7％(49/54)。RIHA、OS与PAGE法符合率均为96.2％。经统计学处理P值>0.05,表明3种方法之间无显著性差异。RIHA、OS可作为A组RV快速诊断之用。但RV McAb(2C7)为识别A组RV共同组抗原的McAb,故不能区别A组RV的亚组及血清型。     

间接ELISA检测柯萨奇B组病毒抗体

用PEG处理的CoxB病毒抗原,建立了快速测定该组1～6型病毒抗体的ELISA法,其特异性与中和试验相同。用此法测定健康人330名,病毒性心肌炎患者122例,不明原因发热患者45例。结果显示:健康人群普遍存在低水平该组病毒抗体。CoxB病毒感染与病毒性心肌炎密切相关,也是原因不明发热的重要病因,因此该项检查对CoxB组病毒感染的病因诊断有重要意义。