环孢素A亲合素—Cyclophilin研究进展

环孢素A亲合素(Cyclophilin,CyP)广泛存在于生物体内,是细胞内环孢素A (Cy-closporin A,CsA)的受体,具有催化加速蛋白质折叠和转运等生物学功能。CyP与CsA结合抑制了钙离子、钙调素(Calmodulin,CaM)依赖的神经钙蛋白(Calcineurin,CN)的磷酸酶活性,阻断IL-2等T细胞增殖必需的一些细胞因子的转录,介导CsA免疫抑制作用。CyP在自身免疫性疾病和器官移植排斥研究中具有应用价值。     

人穿孔素N端肽段的放射诱导表达研究

目的：构建人穿孔素N端（hPFN—N）的真核放射诱导表达载体，并在放射诱导条件的刺激下研究hPFN-N的表达产物（rhPFN-N）在肺癌细胞SPC—A1中的分布及其对该细胞的细胞毒性作用。方法：以克隆有hPFN全长cDNA序列的载体pcDNA3．1（＋）／hPFN为模板，用PCR扩增hPFN-N，将该基因片段克隆到含放射诱导启动子的真核表达载体pcDNA3．1（＋）／Egr-1中，以重组体稳定转染SIC—A1细胞，经过X射线的放射诱导后，应用RT-PCR、细胞免疫化学法检测hPFN-N蛋白的表达，用MTT法测定该蛋白对靶细胞的杀伤活性。结果：成功构建了真核放射诱导表达载体pcDNA3．1（＋）／Egr-hPFN-N。以重组体转染SPC—A1细胞后，用RT-PCR检测到hPFN-N mRNA的表达。细胞免疫化学法检测结果呈阳性反应，MTT法检测结果为rhPFN-N对靶细胞的杀伤活力为29．2％。结论：构建了pcDNA3．1（＋）／Egr-hPFN-N真核放射诱导表达载体，在经过X射线的放射诱导后，hPFN-N能够在SPC—A1细胞的细胞膜上大量表达，表达产物rhPFN-N对靶细胞有明显杀伤活力。     

穿孔素与疾病

穿孔素（ＰＦＰ）是ＣＴＬ和ＮＫ赖以溶解和杀伤靶细胞的一种糖蛋白。有关研究表明,ＰＦＰ参与了机体对恶变细胞的免疫监视及抗感染作用,其免疫调节作用与维持免疫自稳和防止发生自身免疫病有关。ＰＦＰ介导的对正常功能细胞的免疫病理损伤与移植排斥、心肌炎等多种疾病相关。已发现一些可调节ＰＦＰ表达和细胞毒作用的细胞因子和化学药物,为相关疾病的治疗和预防带来了希望。     

新生儿肺炎患者血清柯萨奇B组病毒抗体测定

新生儿肺炎患者血清柯萨奇Ｂ组病毒抗体测定李芳秋，熊华，宋韶鸣，于毅，杨毓华南京军区总医院微生物科南京２１０００２柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）是引起新生儿肺炎的病原之一［１］。本文利用ＥＬＩＳＡ法，对９０例新生儿肺炎患者血清ＣＢＶ－ＩｇＭ、ＣＢＶ－ＩｇＧ抗...     

双重酶免疫组化法识别淋巴细胞亚群中穿孔素的分布

0 引 言穿孔素(perforin)又称成孔蛋白(pore-forming protein,PFP),是一种相对分子质量为67 000,存在于激活的细胞毒T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤(NK)细胞胞质杀伤颗粒中的糖蛋白,当CTL和NK细胞与靶细胞相遇时,释放PFP,在Ca2+存在下,于靶细胞膜上形成一个520 nm的活性孔道,使靶细胞渗透压改变而溶解.杀伤颗粒中的颗粒酶等其他成分通过此孔道进入靶细胞,也可诱导靶细胞凋亡［1］.CTL和NK细胞介导的细胞毒作用在抗感染、抗肿瘤免疫和器官移植排斥反应中发挥着重要作用［24］.本文介绍采用双重酶免疫组化染色法检测CD3+T淋巴细胞和CD5…     

CIK体外抗癌活性分子机制的探讨

目的:分析细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell, CIK)抗肿瘤活性增强的分子机制.方法:从健康人志愿者和恶性肿瘤患者PBMC培养获得CIK细胞,用LDH释放法分别对PBMC和CIK进行体外杀伤肿瘤细胞的活性测定,用流式细胞术分析PBMC和CIK细胞群中颗粒溶素(granulysin, GNLY)和穿孔素(perforin, PFN)的表达.结果:在效靶比为5∶1时,健康人和肿瘤患者PBMC对肿瘤细胞K562的裂解率分别为6.33%和1.29%,两组CIK细胞对肿瘤细胞K562的裂解率分别为14.7%和14.16%,PBMC与CIK对细胞的裂解率显著提高,P<0.01;GNLY阳性表达细胞百分比由4.43%和1.95%上升到19.15 % 和17.52%,P<0.01.但PFN细胞却由21.91 % 和14.69%降低到4.96%和3.7%,P<0.05.结论:肿瘤患者PBMC抗肿瘤活性下降可能与该细胞中GNLY和PFN表达减少有关;CIK细胞杀伤肿瘤活性的提高可能与GNLY的表达增加相关;PFN表达下降可能是维持CIK细胞在体外大量增殖的调节因素.     

抗烯醇化酶抗体检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值

目的 利用白念珠菌烯醇化酶重组蛋白质为抗原,建立测定人血清中抗白念珠菌烯醇化酶IgG类抗体的ELISA法,评估其在侵袭性念珠菌病(IC)诊断中的应用价值.方法 收集各类确诊IC患者(66例)和白念珠菌定植者(32例)血清,用重组白念珠菌烯醉化酶包被ELISA微孔板,测定血清中的抗烯醇化酶抗体,确定cut off值并对方...     

双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌烯醇化酶抗体

目的建立检测抗念珠菌烯醇化酶(Eno)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并进行临床应用评价。方法用基因工程制备的重组Eno作为包被抗原和酶标抗原,通过棋盘滴定法对双抗原夹心ELISA法的反应条件进行优化,对方法的敏感性、特异性和精密度进行考察。用双抗原夹心ELISA法测定291例住院患者(侵袭性念珠菌病114例,念珠菌定植82例,细菌感染患者95例)以及200名健康人血清,并与本实验室前期自建的间接ELISA法检测抗Eno抗体的结果进行比较。结果双抗原夹心ELISA法工作条件为:Eno抗原包被浓度为0.5μg/m L,酶标抗原1∶4 000稀释;封闭液为含50 g/L脱脂奶粉的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100。患者血清检测结果显示,批内变异系数(CV)分别为6.8%、7.4%和5.9%;不同批次重复测定15次,其批间CV分别为10.1%、9.6%和12.4%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为92.2%。通过ROC曲线确定cut off值吸光度(A)为0.209。检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的敏感性和特异性分别为81.6%(93/114)和94.4%(356/377),敏感性高于检测抗Eno抗体的间接ELISA法(81.6%vs 76.1%)。结论建立了双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌Eno特异性抗体,可提高IC的诊断率,具有临床应用价值。     

人精子蛋白17单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗精子蛋白17(Sp17)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:克隆人Sp17cDNA,表达带有6His标记的重组Sp17,用纯化的重组Sp17免疫BALB/c小鼠制备mAb。用ELISA筛选抗体阳性的细胞克隆。用免疫组化染色法及阻断试验鉴定mAb的特异性。结果:获得2株杂交瘤细胞系3C12和3D6,其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG1和IgM(κ),杂交瘤细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶64和1∶32;腹水mAb的效价分别为1∶1×105和1∶5×104。用人和大鼠睾丸组织以及人精液精子免疫组化染色及阻断试验证明,抗Sp17mAb具有良好的特异性。抗Sp17mAb也可识别卵巢癌组织中异常表达的Sp17。结论:成功地制备特异性的抗Sp17mAb,为研究该蛋白的功能、天然分布及异常表达奠定了基础。     

DNA聚合酶链反应检测石蜡包埋人脑组织中弓形虫的研究

孕妇感染弓形虫是胎儿先天性畸形的危险因素。本文运用DNA聚合酶链反应检测30例先天性畸形儿尸检石蜡包埋脑组织中弓形虫。结果表明,30例先天性畸形儿石蜡脑组织切片经体外扩增后出现阳性条带者13例,而对照组无1例阳性(P<0.05)。研究结果进一步支持弓形虫感染与胎儿先天性畸形有密切关系。