噬血细胞综合征发病机制及实验诊断

噬血细胞综合征 (hemophagocyticsyndrome ,HPS) ,又称噬血细胞淋巴组织细胞增生症 (hemophagocyticlymphohistocytosis,HLH) ,是一类少见的、死亡率很高的疾病[1 4] 。临床表现为持续发热、肝脾肿大、肝功能异常、全血减少、凝血障碍、高三酰甘油血症、高细胞因子血症 ,有的还     

侵袭性真菌感染的菌种分布和药敏分析

<正>侵袭性真菌感染的主要病原菌有假丝酵母菌属、隐球菌属和曲霉菌属。随着抗真菌药物的广泛应用,真菌耐药情况的变化也逐渐引起临床关注[1]。本研究对南京军区南京总医院2010~2012年3年间就诊患者中发生院内侵袭性真菌感染的病例进行了病原学及体外药物敏感性的回顾性分析,结果如下。1材料与方法1.1菌株来源356株真菌分离自2010年1月至2012年12月间南京军区南京总医院住院和急诊重症监护病房(ICU)收治的302例临床疑似侵袭性真菌感染患者的无菌部位标本(包括脓液)。其中男性206例,女性96例;年龄11~     

MTT比色法的条件探讨

检验细胞存活与增殖的方法很多 ,如同位素释放法、乳酸脱氢酶释放改良法、流式细胞仪法等。ＭＴＴ法由于简单、经济、快速、无放射性污染 ,其检测结果与同位素掺入法有良好的一致性 ,故可有效地应用于淋巴细胞转化 ,观察细胞因子对细胞增殖的影响 ,抗肿瘤药物的筛选等研究[1] 。我们以ＳＫ ＢＲ 3细胞为模型 ,对ＭＴＴ法的条件进行了探讨。1　材料与方法1 1　培养液　ＲＰＭＩ 16 4 0 (ＧｉｂｃｏＢＲＬ) ,内含 2ｍｍｏｌ/Ｌ谷氨酰胺 (第二军医大学药学系合成药物研究所 ) ,灭活的 10 %新生小牛血清 ,每毫升含 10 0单位的青霉素和链霉素。1 …     

检测抗烟曲霉分泌蛋白抗体的ELISA法及其诊断价值

目的建立检测人血清中抗烟曲霉特异性抗体的ELISA法,评估该法在侵袭性烟曲霉病(IA)诊断中的价值。方法用沙氏液体培养基震荡培养烟曲霉,TCA/丙酮沉淀法分离菌体蛋白和培养上清中的分泌蛋白。用烟曲霉播散感染的家兔血清及确诊IA患者血清,分别与菌体蛋白和分泌蛋白进行免疫印迹分析,选择反应强的分泌蛋白作为包被抗原,建立测定抗烟曲霉特异抗体的ELISA,并对方法的精密度和特异性进行考察、确定cut off值。对实验动物模型血清以及5例确诊、24例临床诊断为IA的患者血清样本进行测定,并与血清半乳甘露聚糖(GM)测定结果进行比较。结果免疫印迹结果显示培养获得的烟曲霉分泌蛋白与感染动物和病人血清均呈现强反应,以其作为包被抗原建立的ELISA法精密度良好,批内CV=12.0%,批间CV=8.1%;阻断试验证实此法对烟曲霉抗体具特异性。依据200份健康人血清测定结果,取吸光度(A)值1.03作为cut-off值。健康人抗体阳性率为2.0%(4/200),IA患者阳性率41.4%(12/29),二者差异显著(P<0.01)。2例临床诊断病人血清GM试验阴性,但抗体阳性,占8.3%(2/24)。实验感染的家兔均在感染后1周内测...     

白色念珠菌烯醇化酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

目的:建立定量检测白色念珠菌烯醇化酶(enolase,Eno)的双抗体夹心ELISA法,并应用于不同真菌培养上清液的检测,探讨其在侵袭性念珠菌感染中潜在的诊断价值?方法:将白色念珠菌Eno单抗作为包被抗体,HRP标记的羊抗Eno作为检测抗体,利用重组白色念珠菌Eno蛋白作为标准品评价该方法的精密度?线性范围?最低检测下限等性能指标?用建立的双抗体夹心ELISA法定量检测不同真菌培养上清和白色念珠菌在不同温度下培养上清中Eno水平?结果:Eno浓度为20 ng/ml和5 ng/ml时,批内和批间精密度分别为6.61%?9.19%和6.98%?13.81%,最低检出下限为1.25 ng/ml,线性范围为1.25~50.00 ng/ml?白色念珠菌37℃培养24 h时的上清中Eno含量为3.06 ng/ml,培养120 h时Eno水平上升到33.43 ng/ml,Eno水平与白色念珠菌菌丝含量呈正相关?本方法与近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌?光滑念珠菌?季也蒙念珠菌?新型隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应?结论:成功建立了定量检测白色念珠菌Eno的双抗体夹心ELISA法,在侵袭性念珠菌感染研究中具有潜在的应用价值?