Negative correlation between cyclophilin mRNA level in leukocytes of renal allograft recipients and ciclosporin concentration in whole blood

目的：研究肾移植病人白细胞中亲环蛋白（ＣｙＰ）表达水平及其与环孢素（Ｃｉｃ）血药浓度的相关性．方法：应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）以βａｃｔｉｎ为内标，测定了４７例肾移植病人白细胞中ＣｙＰｍＲＮＡ的水平，同时应用单克隆抗体荧光偏振免疫法测定了他们血中Ｃｉｃ浓度．结果：随着Ｃｉｃ全血浓度由６２μｇ·Ｌ－１升高至６７８μｇ·Ｌ－１，异体肾移植病人白细胞中ＣｙＰ表达水平由１１非线性地降低至００３（ｒ＝０８１９５）．结论：肾移植病人白细胞中ＣｙＰ表达水平与其Ｃｉｃ血药浓度呈负相关     

肾移植病人白细胞中亲环素mRNA表达水平与环孢菌素血药浓度相关性研究

肾移植病人白细胞中亲环素ｍＲＮＡ表达水平与环孢菌素血药浓度相关性研究２１０００２南京南京军区南京总医院赵权李芳秋武建国储小曼周燕姚小丹关键词环孢菌素；肾移植；聚合酶链反应中国图书资料分类号Ｒ３９２．４环孢菌素Ａ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅＡ，ＣｓＡ）是...     

重组烟曲霉二肽基肽酶Ⅴ片段的原核表达

摘要：目的：筛选抗原性强的烟曲霉二肽基肽酶Ⅴ（dipeptidyl peptidases Ⅴ,DPPⅤ）肽段并进行原核细胞表达。 方法：通过生物信息学分析技术,从DPPⅤ全长序列中选取抗原决定簇密集的片段,采用生物合成和PCR技术,获得其肽段相应的DNA序列,并克隆至测序载体;DNA测序验证后构建重组表达质粒,转染原核表达宿主菌BL21(DE3), IPTG诱导表达后用Talon亲和层析柱纯化;western blot分析产物免疫反应性。 结果：DPPⅤ19~144p及DPPⅤ145~447p在大肠埃希菌中均以包涵体形式表达, DPPⅤ19~447p以可溶性蛋白质形式表达。western blot结果表明筛选出的DPPⅤ肽段均可与侵袭性曲霉病（IA）患者血清发生抗原抗体反应。 结论：成功表达烟曲霉二肽基肽酶不同抗原决定簇分布的3个肽段,且重组片段均具有良好免疫反应性。     

人精子蛋白17放射免疫分析的临床应用

为了探讨人精子蛋白17(Sp17)放免分析的临床意义,用自建的Sp17放免分析方法,测定了正常人及部分癌症患者血清Sp17值。结果显示,卵巢癌、子宫内膜癌患者血清Sp17值分别为36.02±27.95μg/L,40.29±21.15μg/L,与对照组15.60±7.66μg/L相比,有显著性差异(P<0.01);而且部分卵巢癌、子宫内膜癌患者血清Sp17值明显升高。因此血清Sp17浓度的测定可能有助于卵巢癌、子宫内膜癌症等患者的诊断和治疗,值得进一步研究。     

定量RT—PCR检测穿孔素mRNA方法的建立与临床初步应用

目的　建立检测穿孔素mRNA的定量RT PCR方法。方法　用限制性内切酶制备竞争性模板 ,建立定量RT PCR方法 ,检测正常人及部分肿瘤病人外周血的穿孔素mRNA水平。结果　 6例正常人的外周血穿孔素mRNA含量为 0 5 1± 0 40pmol/ml,消化道肿瘤患者的穿孔素mRNA水平与正常相比 ,有显著差异 (P <0 .0 1) ,乳腺肿瘤及白血病患者的穿孔素mRNA水平与正常人相比 ,没有差异。结论　穿孔素mRNA水平的降低可能是肿瘤发生的一个重要原因 ;除穿孔素途径以外 ,还存在别的抗肿瘤的效应机制。     

CyP A三类Ig自身抗体测定方法的建立与临床应用

利用基因重组技术 ，大肠杆菌表达人环胞菌素Ａ结合蛋白，建立测定抗ＣｙＰＡ自身抗体的酶联免疫吸附试验，探讨抗ＣｙＰＡ抗体与临床疾病的关系。     

用噬菌体模拟抗原检测白念珠菌菌丝蛋白抗体的研究

目的 用噬菌体展示文库技术制备白念珠菌菌丝蛋白模拟抗原，建立测定白念珠菌抗体的酶联免疫吸附测定法（ELISA）。方法 用抗白念珠菌菌丝蛋白P47的单克隆抗体从噬菌体随机12肽库中筛选能与之免疫学结合的肽，即模拟抗原表位。将该模拟抗原包被微孔板，用于酶联免疫吸附测定法测定病人血清白念珠菌菌丝蛋白抗体。结果 用噬菌体模拟抗原建立ELISA，其敏感性、特异性及重复性良好，测定了10份确诊白念珠菌侵袭性感染的病人血清，全部阳性，与用纯化的菌丝蛋白抗原P47测定结果一致；服用免疫抑制剂患者血清阳性率33％，健康人群阳性率为2％。结论 用抗白念珠菌菌丝蛋白单克隆抗体从噬菌体展示随机肽库筛到的噬菌体模拟抗原可代替白念珠菌P47抗原进行抗体测定。     

胃癌癌变相关基因表达的cDNA微阵列研究

目的 建立胃癌基因表达谱,筛选胃癌相关基因。方法 用含10000个已知基因和7000个ESTs(expressed sequence tags)的cDNA微阵列分析胃癌和癌旁正常胃黏膜基因表达谱的变化,半定量RT-PCR研究差异表达基因与胃癌的关系。结果 二倍以上的差异表达基因359个,其中在胃癌组织中表达上调271个,表达下调88个;二倍以上的差异表达ESTs 28个,其中在胃癌组织中表达上调24个,下调4个。RT-PCR进一步证实碳酸酐酶Ⅱ在胃癌组织中存在表达下调,胰岛素样生长因子结合蛋白4在胃癌组织中存在表达上调。结论 发现碳酸酐酶Ⅱ、胰岛素样生长因子结合蛋白4可能与胃癌发生有关,为进一步寻找和克隆胃癌相关基因提供了重要的研究线索。     

应用免疫酶技术检测EHF病毒抗原

用r线照射灭活的EHF病毒抗原免疫动物,制备高效价的免疫血清和单克隆抗体。用此抗体试剂建立的检测EHF病毒抗原的ELISA夹心法、免疫酶染色法及EHF病毒微量滴定技术。在微量滴定病毒的过程中,比较了ELISA、免疫酶染色法、免疫荧光法的敏感性。结果证明,这三种方法中,ELISA最敏感,后两者敏感性相同。但免疫酶染色法不需装备荧光显微镜,应用更方便。     

全长人穿孔素cDNA的克隆与3′端部分表达

目的 克隆人穿孔素（perforin,PFP)基因并选择性地体外表达抗原特异性C端肽段。方法 利用RT－PCR技术,从人肝总RNA中克隆全长PFP cDNA并进行序列测定分析。将编码PFPC端（hPFP-C)125个氨基酸的cDNA片段亚克隆,并插入载体pGEX-2T中用IPTG诱导融合蛋白表达。目的肽段采用谷胱基肽琼脂糖亲和层析和凝血酶酶切纯化,并用血法测定其生物学活性。结果 克隆的全长人PFP cDNA与已发表的PFP基因序列相比较,有4个碱基不同,导致3个氨基酸残基改变。重组基因在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达的融合蛋白的相对分子质量（Mr)为４００００,纯化后的hPFP-C肽段Mr为14000。重组hPFP-C肽段与兔红细胞共育,呈现钙依赖的血活性。结论 人PFP基因可能存在多态性,其C端肽段亦有溶解兔红细胞的活性。