A组轮状病毒引起成人腹泻4例

轮状病毒(RV)是人和许多动物急性胃肠炎的一种主要病原。根据其组抗原性可将RV分成A到F6个组。A组RV主要引起婴幼儿和     

通用引物检测志贺毒素和紧密素多个基因亚型

目的旨在建立同时检测stx2和intimin两个基因多个变型的双重PCR快速检测技术,更好满足实验室和临床检测的需求。方法以stx2主要的6个亚型和intimin主要的27个基因亚型为靶序列,设计引物,建立双重PCR方法,分析其敏感性、特异性,并检测模拟制备的阳性样品。结果stx2-intimin双重PCR扩增片段分别为388bp和609bp,检测大肠杆菌纯培养物最低限介于10～100cFu／mL,增菌样品最低检测限介于1～10CFU／g,特异性检测intimin和stx2的多个亚型。结论Stx2-Intimin二重PCR技术灵敏、特异、通用和高效。     

A组轮状病毒检测方法的研究及初步应用

用抗自制A组轮状病毒(RV)共同组抗原的McAb(2C7)建立了检测A组RV的2种新方法(RIHA,OS),并与RT和PAGE法进行了比较。结果显示,这2种方法实用性强,特异性好,方法简便,快速,便于推广。对54例疑为RV感染的婴儿粪样。用4种方法进行测定,阴、阳性总符合率为90.7％(49/54)。RIHA、OS与PAGE法符合率均为96.2％。经统计学处理P值>0.05,表明3种方法之间无显著性差异。RIHA、OS可作为A组RV快速诊断之用。但RV McAb(2C7)为识别A组RV共同组抗原的McAb,故不能区别A组RV的亚组及血清型。     

抗A组轮状病毒单克隆抗体特性鉴定及临床初步应用

本文报道了A组RV McAb的特性鉴定及临床初步应用。用从河南省腹泻犊牛粪便中分离的HN-7毒株(RV)免疫BALB/C小鼠,用杂交瘤技术获得2株分泌A组RV特异性McAb的杂交瘤细胞。所获2个McAb(2C_7、3C_9)与A组RV第1血清型Wa株、第3血清型SA-11株、第6血清型NCDV株,以及从国内猪、牛粪便中分离的4株未分型毒株的间接ELISA效价达1:10~5～1:10~6,但与这7个毒株的血凝抑制滴度≤1:8,中和效价≤1:100,表明这2个McAb是针对A组RV共同抗原的。用此McAb建立的单夹心ELISA技术,测定162人、牛腹泻粪样,与常规ELISA总符合率为98.8％。     

ELISA一步法检测轮状病毒抗原

用牛轮状病毒(NCDV株,A组)抗原免疫家兔,制备兔抗牛NCDV多克隆抗体。用该抗体与辣根过氧化物酶联结,建立了检测轮状病毒(RV)的ELISA一步法。该法实验过程为: 40孔酶标板用兔抗RV包被,4℃过夜后加入50μl处理过的待测标本和50μl HRP-     

乙型脑炎病毒E基因在杆状病毒中的表达及其初步应用

目的克隆表达日本乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitis virus,JEV)的E基因,研究其抗原性,并初步作为诊断抗原建立JEV抗体检测方法。方法用RT-PCR方法扩增E基因全长,然后克隆到pFastbacTM载体中,转化宿主菌DH5a中,提取阳性克隆质粒转导到DH10Bac,利用通用引物鉴定阳性,提取其基因组转染昆虫细胞sf9,而后经IFA和Western blot进行鉴定。挑蚀斑纯化获得高纯度和高滴度的重组病毒,收集细胞裂解上清作为抗原建立间接ELISA方法,对不同年龄段猪血清进行检测。结果从JEV中成功克隆E基因,并在昆虫细胞中得到表达,分子量约53kD,具有良好的抗原性。建立的ELISA方法的抗原最佳包被浓度为30μg/ml,待检血清的最佳稀释度为1:40,阳性判定标准初步定为OD450≥0.3,且OD值待检血清/OD值阴性血清≥2。结论JEV的E基因经过体外昆虫细胞表达,获得抗原性良好的蛋白作为诊断抗原,用其建立的ELISA方法能很好用于猪群JEV抗体水平的检测。     

流行性乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白基因在原核细胞中的高效表达及其表达产物的抗原性分析

目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并将其克隆入 pET - 32a(+)表达载体中 ,构建重组融合表达载体pET -E ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后 ,利用IPTG诱导获得高效表达。结果　扩增的E蛋白基因片段长 1113bp ,编码 371个氨基酸残基 ,该基因片段与国内发表的减毒株SA14 - 14 - 2碱基序列同源性为 10 0 %。表达产物分子量约为 6 2kD ,经Westernblotting分析表明表达产物具有较好的抗原性。结论　通过序列分析表明 ,我国的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株未发生基因突变。表达产物的稳定高效表达及其抗原特异性分析为今后ELISA早期诊断试剂盒的研制提供了依据。     

猪链球菌2型的分子流行病学研究

目的　了解猪链球菌 2型高发地区 (疫区 )与少发地区 (非疫区 )猪群的带菌率及其毒力因子MRP与EF的分布情况 ,探讨猪链球菌 2型的发生及其流行规律。方法　分别从不同地区采集正常屠宰猪或活体采集成年猪扁桃体 ,经接种马丁汤培养基增菌培养后 ,用PCR方法进行 2型猪链球菌的检测 ,同时检测各 2型菌的主要毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)与细胞外蛋白因子 (EF)基因 (mrp和epf)。 结果　除少数猪群外正常猪群中猪链球菌 2型的带菌率普遍较高 ,为 31 6 %～77% ,平均为 4 0 9% ,且疫区 (39% )与非疫区 (42 % )差异不明显。但毒力因子mrp和epf的阳性率疫区与非疫区存在明显差异 ,非疫区的 2型菌株除极少数表现为mrp+ epf-(5 % )或mrp-epf+ (5 % )外 ,绝大多数 (90 % )都表现为对猪无毒力的mrp-epf-表现型 ,无一株表现为mrp+ epf+ ;来自疫区的所有 16株 2型菌株均为对猪有强毒力的mrp+ epf+ 表现型。结论　正常猪群中 2型猪链球菌的带菌率与猪群是否暴发流行该病可能并无直接关系 ,但疫区猪群mrp+ epf+ 表现型菌株检出比率较高 ,提示携带mrp+ epf+ 表现型菌株的猪可能是本病的主要潜在传染源     

VELCIA对轮状病毒抗原的检测及轮状病毒中和抗体和总抗体的鉴定

<正> 本文报道病毒酶联细胞免疫试验(VELCIA)作为轮状病毒抗原的检测和滴定。这种方法可在24小时内直接从粪便中检测到猪轮状病毒野毒型抗原。本方法亦可用于确证轮状病毒中和抗体和总抗体。 材 料 和 方 法 血清:从南斯拉夫斯洛文尼亚地区大农场收集5～6 月龄猪的血清。 病毒:猪OSU轮状病毒及野毒型猪轮状病毒粪便样品。