应用ATP生物荧光法进行表面微生物污染监测的可行性研究

目的分析ATP生物荧光法(ATP法)应用于表面微生物污染监测的可行性。方法采用ATP法和活菌计数法,对含不同浓度有机物或无机物的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬液、无菌溶液和人手表面采样液进行平行检测,以活菌计数法为金标准,分析ATP法所测相对光单位(RLU值)与菌浓度的相关性。结果以蒸馏水配制的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬液,菌浓度在10~4~10~7cfu/mL两种方法所得值的对数值呈正相关关系。以PBS配制的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬液,菌浓度分别在10~3~10~7cfu/mL、10~4~10~8cfu/mL,两种方法所得值的对数值呈正相关关系。蒸馏水和PBS以ATP法检测,RLU值均50;以ATP法检测无菌有机物溶液,不同种类、浓度的有机物对RLU值均有不同程度的干扰,且两种方法检测含不同有机物的菌悬液结果均无相关性;以两种方法检测手表面微生物现场采样液,所得值间无相关性。结论菌液浓度、无机物、有机物均可影响ATP法的RLU值,ATP法不能准确反映样本中细菌浓度,应用于表面微生物污染监测的准确性值得进一步探讨。     

ATP生物荧光检测法监测口腔科诊室物体表面污染程度的可行性研究

目的 了解口腔科诊室常见污染区域的污染现状,探讨ATP生物荧光检测法监测物体表面污染程度的可行性.方法 随机选取牙周科诊室20组物体表面,在消毒前、后分别用ATP荧光检测系统进行监测,同时用常规菌落计数法做平行试验,记录合格率.结果 消毒前口腔科诊室物体表面用ATP检测和用国标菌落计数法检测,合格率分别为0和38.3％,消毒后合格率分别为50.0％和100.0％,消毒前后测定结果差异均有统计学意义(P＜0.01)；消毒前ATP法与菌落计数法相比,其测定光度值(RLU)的对数值与菌落计数法所测的菌落形成单位(CFU)对数值具相关性(R=0.504,P＜0.01)；消毒后ATP法与菌落计数法相比,其RLU的对数值与菌落形成单位(CFU)对数值无相关性.结论 ATP法用于监测口腔科物体表面污染程度,与传统方法相比,具有方便、快速的特点,但其与菌落计数法的相关性还待进一步探讨,而且其并不能进行菌落鉴定,因此不能取代菌落计数法.     

ATP生物荧光法评价医院医疗器械清洁效果

目的 采用ATP生物荧光法评价医疗机构医疗器械清洗效果,为加强医疗器械清洗管理提供依据.方法 采用现场采样检测方法,对北京市28所医疗机构无菌医疗器械及内镜清洗效果进行调查.结果 不同品种无菌医疗器械清洁效果差异有统计学意义,手术钳、吸引器头和腹平拉钩清洗合格率均达100.00％,内镜活检口清洗合格率最低,为33.33％.结论 医院内镜清洗可能存在一些问题,有待于进一步改进和提高.     

大鼠脑－心卒中时脑代谢改变对心功能的影响

用光化学法激发大鼠局部脑血栓形成，从脑皮层能量代谢、脑水含量、乳酸含量、局部脑血流量（ｒＣＢＦ）、心室收缩与舒张的最大速率（＋ｄｐ／ｄｔａｎｄ－ｄｐ／ｄｔｍａｘ），左室每分功（ＬＶＭＷ）、心输出量（ＣＯ）、每搏出量（ＳＶ）、心肌血流量（ＢＦ）及外周总阻力（ＴＰＲ）等项指标，探讨局部脑血栓形成后４，２４ｈ及５ｄ脑机能代谢的改变及其对心功能和血液动力学的影响。结果表明，脑血栓形成和脑血流紊乱不仅使脑代谢抑制、乳酸及脑水含量增加．还导致心功能障碍及血液动力改变。脑血栓形成５ｄ，脑代谢障碍继续加重，而心功能已恢复至对照水平；提示本实验条件下心功能异常为一可逆性改变。     

生物荧光法快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的通过生物荧光法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)特异性蛋白PBP2a,以达到快速检测MRSA的目的。方法采用生物荧光技术分别对不同浓度下、普通金黄色葡萄球菌标准菌、临床分离的耐甲氧西林葡萄球菌进行检测,以MRSA PBP2a蛋白提取物标准品为对照;通过T-211D激光诱导检测仪软件数据转换导入Excel软件做曲线图。结果不同浓度下PBP2a蛋白提取物标准品,均在横坐标200(T线)处有不同的荧光信号,且随着蛋白浓度的增加,峰值增高;普通金黄色葡萄球菌由于PBP2a蛋白未被荧光信号捕捉到,所以未在200(T线)出现峰值;临床分离的耐甲氧西林葡萄球菌在约200(T线)与标准品均在同一位置捕捉到荧光信号,且荧光信号与MRSA PBP2a蛋白的含量成正比关系。结论在一定浓度下生物荧光技术快速检测到MRSA特异性蛋白PBP2a,从而达到快速检测MRSA的目的,对临床快速诊断有重要参考价值。     

采用ATP生物荧光法对46所医院ICU环境物体表面洁净度的检测分析

目的了解上海市46所医院ICU环境物体表面的洁净度状况,以预防控制多药耐药菌的播散。方法对ICU医务人员手频繁接触的环境物体表面采样,用三磷酸腺苷(ATP)生物荧光法进行检测,评估其洁净度。结果 46所医院共计采集450份标本,ATP读数范围为5~197 584RLU,以<250RLU为洁净度合格标准,本次检测标本的平均合格率为37.1%;按医院类型分类,二级医院合格率37.3%,三级医院36.9%;按环境物体表面类型分类,仪器面板及表面合格率47.3%,各类把手33.8%,电脑键盘及鼠标20.0%,各类台面30.0%,电话机13.8%,水龙头手柄63.2%,其他物体表面39.3%。结论 ATP生物荧光检测法显示,上海市医院ICU环境物体表面洁净度状况不理想,是医院感染管理和多药耐药菌预防控制的重要隐患,如何加强常规清洁消毒工作,有效提高医院环境物体表面的整体洁净度,亟待重视。     

比较两种方法在新生儿苯丙酮尿症筛查中的应用

目的比较串联质谱（tandemmassspectrometry,TMS）技术与茚三酮荧光法在苯丙酮尿症（phenylketonuria,PKU）筛查中的准确性。方法采用茚三酮荧光法对166247例PKU标本进行初筛,初查阳性标本均采用茚三酮荧光法和串联质谱技术复查,复查阳性者召回采血后统一再用上述两种方法进行检测,通过卡方检验统计比较两种方法的复查阳性率,探讨这两种方法在苯丙酮尿症筛查中的应用。根据血中Phe浓度进行鉴别诊断。结果（1）166247例新生儿初查阳性1152例,初查阳性率为6．93‰;（2）茚三酮荧光法和TMs技术的复查阳性率分别为14．58％、3．91％,两种方法比较具有统计学意义（P〈0．05）;（3）复查阳性者召回采血后统一再用上述两种方法进行检测,均确诊HPA3例,发病率为1：55415,其中经典型PKU2例,高苯丙氨酸血症1例。结论TMS技术能更快速、更准确地监测血苯丙氨酸水平,更适合用于PKU筛查,可有效地开展筛查的阳性召回工作及缓解家庭的精神压力。     

高效液相色谱-荧光法测定大鼠血浆中富马酸比索洛尔的浓度及药物动力学

目的建立大鼠血浆中富马酸比索洛尔(BF)浓度的测定方法,并研究大鼠灌胃给予BF后的体内药动学。方法以酒石酸美托洛尔为内标,采用HPLC-荧光法,测定大鼠血浆中药物浓度。色谱柱:Wondasil C18(250mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.01 mol·L-1磷酸氢二铵缓冲液(35:65);流速:1.0 mL·min-1;荧光检测的激发波长与发射波长分别为275 nm与305 nm;柱温:室温。大鼠灌胃给予0.45 mg·kg-1的BF后,于不同时间采血,测定血浆中药物浓度并估算其药动学参数。结果 BF在4.0¹28.0 ng·mL-1与峰面积线性关系良好,r=0.999 6,提取回收率为88.52%128.0 ng·mL-1与峰面积线性关系良好,r=0.999 6,提取回收率为88.52%⁹6.3%,定量下限为4.0 ng·mL-1。大鼠灌胃给予0.45 mg·kg-1的BF后,其体内消除半衰期为2.5 h。结论本方法操作简便、经济,准确度与灵敏度高,可用于大鼠血浆中BF的测定及药动学研究。     

全血保存过程中血浆中S-亚硝基硫醇的测定

目的建立荧光法测定血浆中S-亚硝基硫醇(RSNOs)的方法并探讨影响其测定的相关因素。方法建立标准曲线,确定荧光法的准确性与可重复性;以检测过程中某一种影响因素(如样品制备条件、孵育时间等)为变量观察多因素对检测结果的影响;取9份全血(400 ml/份)在保存d1、d7、d14、d21、d28和d35时分别检测血浆中RSNOs含量。结果同一份血浆,相同实验条件下检测10次,变异系数为(CV)=3.5%;不同离心力470、734、1057、1 438 g制备的血浆,RSNOs含量分别为(9.22±0.14)、(9.97±0.11)、(10.40±0.05)、(10.91±0.01)μmol/L;铜离子浓度为100、150、200μmol/L时的RSNOs含量分别为(13.83±0.02)、(14.23±0.03)、(13.22±0.01)μmol/L;在其他条件相同的情况下,孵育1、1.5、2、2.5 h样品的RSNOs含量分别为(10.34±0.04)、(10.75±0.02)、(12.31±0.09)、(10.53±0.06)μmol/L;在其他条件相同的结果下,血浆中加入FHb为20、40、60、80、100μl时,检测结果为(13.58±0.02)、(13.41±0.02)、(13.10±0.01)、(12.60±0.06)、(12.17±0.01)μmol/L;全血保存d1、d7、d14、d21、d28和d35血浆中的RSNO含量分别为(12.94±2.92)、(10.67±2.18)、(6.87±1.24)、(7.13±1.17)、(7.01±1.66)和(5.80±1.55)μmol/L.结论荧光法测定RSNOs具有良好的准确性与可重复性;不同离心力制备的样品、不同的孵育时间、不同的铜离子浓度以及血液样品中的游离血红蛋白对荧光法检测RSNOs的结果均会有影响;全血保存过程中RSNOs含量呈下降趋势。     

酶催化荧光法测定酚磺乙胺

目的:建立酶催化荧光法测定酚磺乙胺。方法:基于在pH 8.9的氯化铵-氨水的缓冲溶液中,利用酚磺乙胺对血红蛋白模拟酶催化荧光体系的猝灭作用,研究了该猝灭体系的最佳实验条件及动力学行为。结果:测定的线性范围为3.80×10-8~1.52×10-5mol.L-1,检出限为3.49×10-9mol.L-1。对浓度为6.80×10-6mol.L-1的酚磺乙胺进行11次平行测定,其RSD为3.6%。结论:该方法简单、快速、灵敏,可用于酚磺乙胺注射液中酚磺乙胺含量的测定。