SET蛋白对精母细胞株(GC-2 spd)增殖和组蛋白乙酰化的影响

目的:观察SET蛋白对GC-2 spd精母细胞株增殖和组蛋白乙酰化的影响,探讨SET蛋白调节精子形成的作用。方法:体外培养GC-2 spd细胞,通过精母细胞标志物乳酸脱氢酶C(LDHC)和睾丸特异激酶1(TESK1)鉴定。琼脂糖珠免疫共沉淀试剂盒检测SET蛋白与组蛋白H4的结合。分别转染空载腺病毒(Ad H1-si RNA/NS,对照组)和SET干涉腺病毒(Ad H1-si RNA/SET,干涉组),比较细胞增殖情况,荧光显微镜观察GC-2spd细胞中SET蛋白的表达;用实时定量逆转录聚合酶链反应(Real time RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测m RNA以及蛋白的表达。结果:免疫荧光显示精母细胞株GC-2 spd阳性表达LDHC和TESK1;SET蛋白表达于GC-2细胞的胞核和胞质中,免疫共沉淀提示SET蛋白与组蛋白H4结合。转染SET干涉腺病毒后,核内和胞质中SET蛋白表达明显降低(P0.01)。与对照组相比,干涉组细胞增殖明显降低,组蛋白H4乙酰化水平明显增高(P0.05);但组蛋白乙酰化酶(HATs)和去乙酰化酶(HDACs)m RNA表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:精母细胞核内和胞浆中均表达SET蛋白;SET蛋白降调,则抑制GC-2spd细胞增殖。SET蛋白可能通过与组蛋白H4相互作用调节其乙酰化,参与调节精子形成。     

环境雌激素壬基酚对小鼠生精功能的影响

目的　研究经口染毒壬基酚 (NP)对小鼠生精功能的影响及可能的机制。方法　选健康性成熟雄性昆明种小鼠连续灌胃NP 5d ,剂量为 1 0 0 ,2 0 0 ,4 0 0mg/kg。于首次染毒后第 1 4天和第 35天随机分批各处死 5只小鼠 ,称量睾丸、附睾及精囊腺重量并计算脏器系数。检测第 1 4天处死的小鼠初级精母细胞染色体畸变率 ,第 35天处死小鼠检测精子数、活精率、活动度和畸形发生率。结果　染毒NP剂量达 2 0 0 ,4 0 0mg/kg时精子数明显减少 ,不动精子数、精子畸形率、初级精母细胞染色体畸变率明显升高 ,活精率仅在 4 0 0mg/kg组明显降低 ,与阴性对照组比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ,并均呈明确的剂量 -反应关系 (P <0 0 5 )。结论　经口染毒NP可损伤小鼠的生精功能 ,NP直接损伤生精细胞和初级精母细胞染色体 ,是产生上述结果的机制之一     

环境雌激素双酚A对小鼠生精功能的影响

目的　研究经口染毒双酚A对小鼠生精功能的影响及可能机制。方法　选择健康性成熟雄性昆明种小鼠 ,连续 5d双酚A灌胃 ,剂量为 1 6 3,32 5 ,6 5 0mg/kg。分别于首次染毒后的第 1 4和第 35天每组随机处死 5只小鼠 ,称量睾丸、附睾和精囊腺重量 ,并计算脏器系数 ,分别测定初级精母细胞染色体畸变率、精子计数、精子活动度及精子畸形发生率。结果　在 32 5 ,6 5 0mg/kg双酚A组 ,首次染毒后的第1 4天初级精母细胞染色体畸变率均明显升高 ;第 35天精囊腺重量、脏器系数、精子数、活精率均明显下降 ,静止不动的精子数、精子畸形率明显升高。上述各指标与阴性对照组比较 ,差异均有显著性(P <0 0 5 ) ,呈明确的剂量 -反应关系。结论　在本试验剂量范围内经口染毒双酚A可致小鼠生精功能的损害 ,初级精母细胞染色体畸变率升高是致精子活动度减弱、精子畸形率升高的机制之一。     

睾丸表达新基因HSD-28的克隆及其编码蛋白质的研究

目的 研究从人初级精母细胞特异EST文库中克降的新基因HSD-28及编码蛋白质在精子发生过程中的表达及可能发挥的功能.方法 利用根据本实验室构建的人初级精母细胞特异EST文库,通过电子克隆方法,从网络数据库资源获取基因HSD-28.纯化原核表达系统表达的HSD-28蛋白,以此免疫新西兰白兔制备针对HSD-28的特异性多克隆抗体.采用免疫组化的方法研究HSD-28在人睾丸组织中的表达定位.最后,利用酵母舣杂交系统筛选与HSD-28相互作用的蛋白质.结果 克隆得到了的HSD-28基因,提交GenBank获得登陆号为AY251533,全长为641个碱基,其中开放阅读框为504碱基,编码一个由168个氨基酸构成的蛋白质,命名为HSD-28蛋白.将构建的pET-30a-HSD-28重组质粒转化到BL21(DE3)宿主菌,表达并纯化了HSD-28蛋白,大小约为28kDa.免疫组织化学结果显示,HSD-28蛋白特异的定位于人精原细胞和早期初级精母细胞.筛选得到与HSD-28相互作用的两个阳性克隆45#和106#.结论 从人睾丸cDNA文库中成功克隆得到HSD-28基因,其编码蛋白质表达定位于人精原细胞和初级精母细胞中,可能参与精子发生过程中减数分裂的调节.     

出生前后低蛋白饲料对仔鼠睾丸细胞数的影响

<正>"胎儿期起源学说"和"程序化学说"认为,生命早期如胎儿期受到刺激或损伤会对以后的器官结构、生理功能和代谢产生持续性的影响[1-4]。以往研究表明,出生时低体重的人群成年后发生2型糖尿病和心血管病的危险性显著增加[1-4]。妊娠期母亲过量进食肉类食物会使其子代在成年后血中皮质醇水平增高,易患高血压[3]。动物实验表明,妊娠期限制母羊的总能量会导致其后代睾丸Sertoli细胞数目减少[5]。本研究用不同蛋白含量饲料喂养妊娠期母鼠及其生后的子代鼠,观察出生前后低蛋白饮食对睾丸细胞数的影响。     

85例精母细胞型精原细胞瘤:重点强调包括一些未被广泛认知的形态学谱系

睾丸精母细胞型精原细胞瘤(或称精母细胞性肿瘤)临床罕见,在病理诊断中易误诊。除非罕见情况下发生肉瘤样转化,精母细胞性肿瘤的患者通常预后良好。因此,准确诊断并与经典型精原细胞瘤及包括淋巴瘤在内的其他恶性肿瘤的鉴别至关重要。     

拟原白头翁素A毒性试验研究

目的为了对拟原白头翁素Ａ进行初步毒理学安全性评价。方法采用大鼠急性经口和经皮毒性试验，大鼠皮肤和大白兔眼粘膜刺激试验，Ａｍｅｓ试验，小鼠骨髓微核试验，小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验。结果大鼠急性经口ＬＤ５０４．６７３９（ＩＣ４．０６１４～５．３７８７）ｇ·ｋｇ－１，经皮ＬＤ５０＞２．０ｇ·ｋｇ－１，根据化合物毒性分级为低毒；对大鼠皮肤无刺激作用，对大白兔眼粘膜有中等刺激；Ａｍｅｓ试验、小鼠骨髓微核试验和小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验阴性。结论拟原白头翁素Ａ为低毒、致突变试验阴性的化合物。     

膜片钳技术和酶法分离豚鼠初级精母细胞的比较

应用膜片钳技术与酶法分离细胞技术,分别获得豚鼠单个初级精母细胞,观察了光镜下不同浓度伴刀豆蛋白A、不同时间对精母细胞贴壁及经膜表面清洁后封接和破膜的影响.结果表明,膜片钳技术优于酶法分离,细胞贴壁采用0.125g/L伴刀豆蛋白A作用10min为宜,膜表面清洁处理以0.35g/L胶原酶作用5min易于封接和破膜.     

自噬在氯化镉诱导小鼠初级精母细胞凋亡中的作用

目的 探究自噬在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)凋亡中的作用及其潜在作用机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒GC-2 spd细胞24 h。Hoechst33342染色法和单丹磺酰戊二胺法分别检测凋亡小体和自噬体;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡情况;在不含/含CdCl₂(10μmol/L)的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(60μmol/L)、凋亡抑制剂胱天蛋白酶家族抑制剂(50 nmol/L)、自噬激动剂雷帕霉素(50 nmol/L)和溶酶体抑制剂氯喹(10μmol/L)处理GC-2 spd细胞24 h, Western blot检测细胞内自噬相关蛋白LC3、P62以及促凋亡蛋白cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,自噬体聚集且凋亡细胞增多。Western blot结果显示,5和10μmol/L CdCl_2<...     

怎样做个优秀的准爸爸

<正>避免精子损伤戒烟、严禁酗酒、不乱服药。生殖细胞对于烟酒中的毒素十分敏感,受其毒害,精子产生的数量和质量都会受到影响,导致不育或畸形儿的产生。尼古丁有降低性激素分泌和杀伤精子的作用,每天吸30支烟的男人,其精子的存活率只有49%。长期或大量饮酒会造成慢性或急性酒精中毒,造成70%的精子发