壬基酚母鼠染毒对仔鼠睾丸支持细胞功能的影响

[目的]研究壬基酚（NP）对性成熟期F1雄性SD大鼠睾丸支持细胞功能的影响机制。[方法]设50、100、200mg／kgNP3个剂量染毒组和1个对照组，对母鼠从妊娠第7天至断乳期灌胃染毒，产后55天处死雄性子代，取睾丸固定制片后，分别作病理组织学观察，作波形蛋白（vimentin）、广谱钙黏附蛋白（pan-cadherin）、信号转换和转录激活因子3（STAT3）的免疫组化分析和雄激素结合蛋白（ABP）、白细胞介素-6（IL-6）的原位杂交试验。[结果]睾丸组织病理学检查显示，各剂量染毒组发育异常的生精小管数增多，支持细胞数量减少；200mg／kg组波形蛋白、广谱钙黏附蛋白的表达低于对照组（P〈0．05）；各染毒组STAT3的表达与对照组相比差异无统计学意义；100mg／kg和200mg／kg组ABPmRNA和IL-6mRNA的表达低于对照组（P〈0．05）。[结论]200mg／kgNP可抑制性成熟期F1雄性SD大鼠支持细胞的波形蛋白、广谱钙黏附蛋白、IL-6、ABP的表达，影响支持细胞功能。     

胎源性卵巢早衰及宫内编程机制的研究进展

卵巢的结构和功能对于女性生育力的维系具有重要意义。卵巢的发育主要受下丘脑-垂体-卵巢轴（HPO）以及卵巢局部因子[如转化生长因子β（TGF-β）、表皮生长因子（EGF）、胰岛素样生长因子（IGF）等]调节。研究发现，孕期不良母体环境（如孕期外源有害物或易成瘾物的暴露、母体营养紊乱与疾病等）会编程子代生殖发育，引起子代成年后生殖能力早衰[如卵巢早衰（POF）]等卵巢功能异常。胎源性POF的发生机制与胎儿时期"宫内编程"改变有关，主要涉及神经内分泌编程和表观遗传修饰异常。深入阐明胎源性POF的宫内编程机制，探寻早期预警标志物和防治靶标，有重要的理论价值和现实意义。     

二硫化碳对大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因表达的影响

[目的]研究二硫化碳（carbondisulfide,CS：）染毒对大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因表达的影响。[方法]选用22～24d龄清洁级雄性SD大鼠,建立睾丸生精-支持细胞体外共培养体系,将细胞分为4组：1个对照组和3个不同浓度csz染毒组（1、2、4μmol／mL）,提取RNA,应用荧光实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测Cyto C、 Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9、Aif、EndoG、Smac、IAPS、 Bax、 Bcl-2 mRNA表达水平。[结果]大鼠睾丸支持一生精共培养细胞中,CS2染毒可导致CytoC、Smac、IAPS、Caspase-3、BaxmRNA的表达水平和Bax／Bcl-2mRNA表达水平值均明显升高（P〈0．05）,同时使Apaf-1、Aif、Bcl-2和EndoGmRNA的表达水平明显下降（P〈0．05）。[结论]CS2染毒可影响大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因的表达,并且这一机制与CS2导致生殖损伤相关。     

妊娠期多环芳烃暴露与子代体格生长的关联研究进展

近年随着化石燃料的加剧使用等,多环芳烃(PAHs)成为常见的环境污染物。胎儿对外界毒物较为敏感,妊娠期多环芳烃暴露可能对子代胎儿期及出生后生长发育产生重要影响。本综述从多环芳烃的暴露情况、妊娠期多环芳烃暴露对子代出生结局的影响、妊娠期多环芳烃暴露对子代出生后体格生长的影响、多环芳烃相关作用机制四个方面展开叙述,为后续开展相关队列研究及制订保护性政策提供依据。     

乌头碱对大鼠睾丸支持细胞的毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠睾丸支持细胞的毒性。[方法]无菌制备18～20日龄SD大鼠的睾丸支持细胞,通过Tris-Hcl低渗处理进行细胞纯化,采用HE染色、瑞氏-吉姆萨染色进行细胞鉴定。然后用MTT法(四唑盐比色法)检测浓度为0、5×101、5×102、5×103、5×104 ng/ml的乌头碱对大鼠睾丸支持细胞活力的影响,并用乳酸试剂盒检测乌头碱对支持细胞乳酸分泌功能的影响。[结果]MTT结果显示:乌头碱作用24h后,各剂量组对大鼠睾丸支持细胞的增殖均有促进作用;作用48 h后,低剂量乌头碱(5×101、5×102ng/m)对大鼠睾丸支持细胞的增殖有促进作用;高剂量乌头碱(5×103、5×104 ng/ml)抑制支持细胞的增殖。乳酸测定结果显示:乌头碱作用24 h后,各剂量组乳酸分泌量均增加,乌头碱剂量为5×104 ng/ml时,乳酸分泌量增加率降低。[结论]低剂量乌头碱可促进大鼠睾丸支持细胞的增殖及乳酸分泌量的增加,高剂量乌头碱可抑制大鼠睾丸支持细胞的增殖,降低其对乳酸分泌的刺激作用。     

母婴分离对大鼠成年后海马星形胶质细胞的影响

[目的]研究生后早期长期反复母婴分离对子代大鼠成年后海马星形胶质胶质细胞的影响.[方法]新生大鼠分为母婴分离组和对照组,每组分别有雄性和雌性大鼠各10只.母婴分离组大鼠于生后第2 d至生后第14 d每日与母鼠分离3 h,对照组大鼠不受干扰.各组大鼠于生后第60 d处死.采用免疫组化方法分析各组大鼠背侧和腹侧海马星形胶质细胞标记物(GFAP和S100β)的表达.[结果]双因素方差分析显示:与对照组相比,母婴分离组雄性大鼠成年后腹侧海马GFAP和S100β染色阳性细胞数显著减少(P＜0.05);背侧海马星形胶质细胞中GFAP和S100β平均光密度明显下降(P＜0.001).[结论]母婴分离可使子代雄性大鼠成年后腹侧海马星形胶质细胞数量减少,背侧海马星形胶质细胞中GFAP和S100β含量下降.     

环境雌激素双酚A对男性生殖细胞影响的研究进展

近年来,世界各国男性不育的检出率呈逐年增高趋势.男性不育的原因复杂,包括先天性疾病和后天性因素如外伤、不良生活作息行为（吸烟、酗酒等）、环境污染、药物滥用等.最近研究报道,发育早期暴露环境雌激素可干扰男性生殖系统发育和功能.双酚A（bisphenol A,BPA）是最普遍存在的一种环境雌激素.动物实验和体外研究报道,发育早期暴露BPA可抑制人和小鼠胎儿期睾丸间质细胞分泌睾酮；BPA可通过影响雄性子代生精细胞内基因的正常表达,干扰减数分裂,影响精子的产生；BPA还可降低新生小鼠睾丸支持细胞间连接蛋白的表达；在激素水平上,BPA可抑制小鼠促性腺激素释放激素和卵泡刺激素的产生.本文就BPA通过影响睾丸间质细胞、生精细胞和支持细胞的功能,导致男性不育进行综述,对进一步研究男性不育的原因提供新思路.     

CD4~+CD25~+Treg细胞与妊娠期高血压疾病关系的研究进展

调节性T细胞(Treg细胞)是不同于Th1和Th2细胞的具有免疫抑制调节功能的T细胞亚群,主要通过"主动"的方式抑制免疫系统对自身和外来抗原的应答,在维持机体免疫耐受和免疫应答以及多种免疫性疾病方面起着重要的作用[1].研究发现,具有调节功能的T细胞有许多亚群,如αβTCR CD4-CD8 CD25 T细胞[2]、CD8 CD28 T细胞[3]以及CD4 CD25 T细胞.CD4 CD25 Treg细胞是调节性T细胞的主要组成部分,本文就CD4 CD25 Treg细胞与妊娠期高血压疾病发病的关系研究进展作以介绍.     

氯化三丁基锡对大鼠睾丸支持细胞的影响

[目的]探讨氯化三丁基锡对雄性sD大鼠睾丸支持细胞活力和增殖的影响。[方法]无菌制备20-23天龄sD大鼠的睾丸支持细胞,用HE染色、FAS—L免疫组化染色进行细胞鉴定。设空白对照组、溶剂对照组和20×10^-9、40×10^-9、80×10^—9、120×10^—9mol／L氯化三丁基锡染毒组,用四唑盐比色法（MTT）、免疫细胞化学法观察细胞增殖及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况,流式细胞仪分析细胞周期分布。[结果]各染毒组睾丸支持细胞的存活率明显低于对照组（P〈0．05）,G0／G1期细胞构成比增加,细胞增殖指数下降,80×10^-9、120×10^-9mol／L染毒组PCNA表达量下降。[结论]氯化三丁基锡可通过抑制睾丸支持细胞增殖,影响细胞周期分布和PCNA表达而表现出对雄性大鼠的生殖毒性。     

甲醛染毒对大鼠子代脏器及血液细胞的影响

[目的]探讨甲醛对大鼠子代脏器及血液细胞的影响。[方法]按一代一窝繁殖法进行生殖毒性试验,选用体重110~130gWistar大鼠120只,随机分为4组,每组雌鼠20只、雄鼠10只,采用静式吸入染毒,雌、雄大鼠每天染毒1h,每周7d,连续染毒24周,高、中、低组的甲醛浓度分别为(119.6±15.4)、(25.2±4.6)、(4.8±1.3)mg/m3,对照组为室内空气;并检测仔鼠脏器系数及血常规。[结果]随着染毒浓度的增加、时间的延长,各染毒组子代大鼠体重与对照组比较呈下降趋势(P<0.05);雄性仔鼠心、肺、脑、睾丸和雌性仔鼠肺、脑的脏器系数呈上升趋势,而肝脏的脏器系数呈下降趋势(P<0.05);仔鼠血液中白细胞、中性粒细胞、单核细胞及血小板值呈现下降趋势,而嗜酸性粒细胞值呈上升趋势(P<0.05)。[结论]说明甲醛可抑制大鼠子代的生长发育,损伤肝脏、脑、肺、心及睾丸等器官,并可影响仔鼠的非特异性免疫及凝血功能。     

自体DC CIK NK αβT γδT细胞治疗乳腺组织细胞肉瘤的临床研究

目的观察细胞因子诱导的自体DC、CIK、NK、αβT、γδT细胞治疗组织细胞肉瘤疗效。方法抽取患者自体外周血60~100 m L,采用血细胞分离机收集其单核细胞,经细胞因子诱导并扩增C I K、N K、αβT、γδT细胞及DC细胞;用流式细胞仪检测其表型后,静脉回输CIK、NK、αβT、γδT细胞,皮下注射DC细胞,观察组织细胞肉瘤变化。结果患者左乳肿块缩小＞50%,生活质量明显改善。结论细胞免疫治疗是一种化疗后组织细胞肉瘤有效的治疗手段,具有广阔的临床应用前景。     

无动物源性培养系统对人胚胎干细胞生长的支持作用

目的:建立完全非动物源性培养系统,为人胚胎干细胞定向诱导为各系统细胞应用于临床、消除动物源性污染打下基础。方法:分别采用人包皮成纤维细胞、胎儿肌肉细胞及人子宫内膜基质细胞为饲养层细胞,以血清替代品取代动物血清,支持人胚胎干细胞生长,观察其增殖和分化情况。结果:人包皮成纤维细胞、胎儿肌肉细胞均能很好支持人胚胎干细胞生长增殖,并保持90%左右未分化表型:AKP染色强阳性,SSEA-4、TRA-1-81表达强阳性,可见OCT-4 mRNA表达,核型正常。人子宫内膜基质细胞不能支持hESC的生长。结论:完全可以使用非动物源性培养系统支持人胚胎干细胞增殖,从而为胚胎干细胞定向诱导分化应用于临床打下坚实基础     

孕期母胎界面及母血中T、NK细胞研究进展

胚胎对于母体来说是半异己的同种移植物,母体免疫系统中的免疫细胞能否识别并耐受胚胎抗原,直接影响妊娠的建立与维持.所以研究孕期母胎界面及母血系统免疫中T细胞和NK细胞免疫状态可以帮助了解妊娠免疫耐受的机制,也可以认识一些严重影响妊娠结局的病理妊娠的发病机制.该文主要对孕期母胎界面及母血系统免疫中T细胞表面标记、辅助细胞1/辅助细胞2模式、自然杀伤细胞分泌细胞因子及自然杀伤细胞表面标记与杀伤活性的变化的研究进展作以综述.     

BRL-CM小鼠胚胎干细胞及体外诱导的研究

目的 探讨以Buffalo大鼠肝细胞培养上清(BRL-CM)替代含LIF培养液体外培养小鼠胚胎干细胞(ESC)的可行性；无血清体外诱导ESC为神经前体细胞(NPC)。方法 以BRL-CM维持ESC生长并抑制其分化，用含LIF的培养液作为对照，硝基四氮唑蓝／5-溴-4氯-3-吲哚基磷酸(NBT／BCIP)显色检测碱性磷酸酶。采用N2选择性无血清培养法获取NPC，免疫组化法检测巢蛋白(Nestin)鉴定。结果 BRL-CM与含LIP的培养液一样能维持ESC未分化状态，无血清培养基诱导。ESC后获得细胞的86％为NPC。结论 BRL-CM可替代LIF用于ESC培养，且经济、简便。采用N2选择性培养基可获得较高纯度的NPC。     

米非司酮对早孕小鼠促性腺激素细胞的形态学影响

研究米非司酮终止早孕时小鼠垂体促性腺激素细胞——FSH细胞、LH细胞的形态学变化。方法:应用免疫组织化学PAP方法,对FSH细胞与LH细胞的阳性细胞密度,细胞质内激素颗粒进行观察。结果:实验组与对照组比较,FSH细胞的阳性细胞密度,细胞质内FSH颗粒无显著性差异;LH细胞的阳性细胞密度,细胞质内LH颗粒均明显减少,有显著性差异(P<0.05)。结论:米非司酮对早孕小鼠的FSH细胞的功能无明显影响;对LH细胞的功能有显著的抑制作用。     

血小板衍化内皮细胞生长因子在结直肠癌细胞及间质细胞中的表达及意义

目的 探讨血小板衍化内皮细胞生长因子（PD-ECGF）在结直肠癌组织的肿瘤细胞和肿瘤间质细胞中的表达及与Dukes分期、组织分化程度、淋巴结转移的关系。方法 采用免疫组化染色法对41例手术切除的结直肠癌组织（结直肠癌组）的肿瘤细胞、肿瘤间质细胞以及25例正常结直肠组织（对照组）的黏膜上皮细胞及间质细胞进行PD-ECGF测定。结果 结直肠癌组肿瘤细胞PD-ECGF阳性表达率明显高于对照组黏膜上皮细胞（P〈0．05）；肿瘤细胞PD-ECGF阳性表达与淋巴结转移密切相关（P〈0．05）；结直肠癌组和对照组间质细胞PD-ECGF阳性表达率比较差异有统计学意义（P〈0．05）；结直肠癌组肿瘤间质细胞PD-ECGF阳性表达与肿瘤细胞是否PD-ECGF阳性表达无相关关系（P〉0．05）。结论 肿瘤细胞PD-ECGF阳性表达与淋巴结转移密切相关；肿瘤间质细胞是PD-ECGF的重要来源。     

甲基丙烯酸环氧丙酯对人支气管上皮细胞周期及凋亡影响的研究

目的探讨甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)对人支气管上皮细胞周期及凋亡的影响。方法人支气管上皮细胞(16HBE)经1~16μg/ml剂量的GMA染毒不同次数后,应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及凋亡率的改变,同时测定细胞分裂指数(MI)。结果经1次染毒处理后,随着染毒剂量的增加,G0/G1期细胞显著减少(P<0.01),S期和G2/M期细胞显著增加,凋亡细胞数增多,细胞分裂指数下降;随着染毒次数的增加,各剂量组细胞周期均明显阻滞于G0/G1期,但高剂量组细胞仍表现出S期和G2/M期增多现象;经3次染毒后,高剂量组细胞出现凋亡率下降、分裂指数升高现象。结论经GMA染毒处理后,16HBE细胞周期由G0/G1期向S期和G2/M期移动而呈现增殖性改变。     

肺炎链球菌疫苗抗原促进CRTH2(CD4~+CD294~+Th2)细胞增殖的实验研究

目的研究肺炎链球菌疫苗通过树突状细胞抗原递呈作用对CRTH2(CD4~+CD294~+Th2)细胞促增殖作用,为扩增及分选Th2细胞提供新方法。方法外周血单核细胞培养为树突状细胞,负载肺炎链球菌疫苗抗原后与T淋巴细胞共培养,CCK8法测定混合淋巴细胞反应,流式细胞仪分析DC及CRTH2细胞。结果肺炎链球菌疫苗可促进树突状细胞成熟,与TNF-a共同是DC成熟佐剂。DC负载肺炎链球菌疫苗抗原能使第5天CRTH2细胞亚群比率[(0.93±0.10)%]较首日[(0.70±0.02)%]升高,其绝对数也升高(均P0.05)。结论树突状细胞负载肺炎链球菌疫苗抗原能够促进CRTH2细胞增殖,可能是扩增Th2细胞有效方法之一。     

Experimental Study on Differentiation of Human Hepatocarcinoma Cells Induced by Zhengganfang Drug Serum in Vitro

Objective To study the effect of Zhengganfang （ZGF） drug serum in inducing differentiation of BEL - 7402 human hepatocarcinoma cell （ HHC ） and its influence of the telomerase activity. Methods Rats were fed with ZGF decoction to prepare the drug - serum of ZGF, and the drug - serum was used for Bel - 7402 HHC culture. Serum of normal rat was taken as negative control and retinoic acid （RA） as the positive control, cell proliferation was detected by MTr colorimetric assy, nucleocytoplasm ratio by image assay, a - fetoprotein （ AFP） by RIA alkaline phosphatase （ ALP） activity and T - glutamy transpeptidase （γ- GT） by dynamic colorimetric assy, and telomerase activity of Bel- 7402 cell by PCR - ELISA. Results Drug - serum of ZGF could inhibit the prohferation of Bel - 7402 cell, markedly reduce the nucleocytoplasm ratio and the secretion of AFP, decrease γ - GT activity, increase ALP activity, and suppress the telomerase activity of Bel - 7402 cell. Conclusion ZGF can induce the differentiation of Bel - 7402 HHC, the main mechanism maybe through the supression of the telomerase activity.